廈門海域貝類養(yǎng)殖環(huán)境中的大腸菌群和異養(yǎng)細菌＊

鐘碩良，黃萬紅，陳月忠

（1.福建省水產研究所，福建 廈門361012；2.廈門市水產研究所，福建 廈門363200）

廈門海域貝類養(yǎng)殖環(huán)境中的大腸菌群和異養(yǎng)細菌＊

鐘碩良1，黃萬紅2，陳月忠1

（1.福建省水產研究所，福建 廈門361012；2.廈門市水產研究所，福建 廈門363200）

2005年和2006年春季（4月）和秋季（10月）研究了廈門海域貝類養(yǎng)殖環(huán)境（海水、底質）和養(yǎng)殖貝類中大腸菌群（TC）和異養(yǎng)細菌（HB）數量分布及其在不同介質中數量之間的相關性，并對貝類養(yǎng)殖環(huán)境衛(wèi)生質量進行了評價。結果表明：潮間帶貝類養(yǎng)殖區(qū)TC數量較高，蝦池和淺海貝類養(yǎng)殖區(qū)的較低；蝦池貝類養(yǎng)殖區(qū)HB數量較高，潮間帶和淺海貝類養(yǎng)殖區(qū)的較低。總體上，廈門海域貝類養(yǎng)殖環(huán)境中TC和HB數量分布呈同安灣灣內和西海域高，同安灣灣口和大嶝海域低的格局。大多數站位海水中TC和HB數量春季稍高于秋季，養(yǎng)殖貝類體中TC和HB數量秋季高于春季，底質中HB數量春、秋季無明顯差異，TC數量則秋季稍高于春季。淺海和蝦池貝類養(yǎng)殖區(qū)海水與貝類、底質與貝類中TC和HB的數量之間均成顯著正相關。貝類養(yǎng)殖區(qū)底質中HB和TC數量，軟泥＞粉砂質軟泥＞粉砂，貝類體內器官組織中HB和TC數量，僧帽牡蠣：外套膜＞外套腔液＞內臟團；縊蟶和菲律賓蛤仔：外套腔液＞外套膜＞內臟團。廈門海域貝類養(yǎng)殖環(huán)境受到TC和HB不同程度的污染，潮間帶貝類養(yǎng)殖區(qū)和蝦池貝類養(yǎng)殖區(qū)分別受到TC和HB的較重污染。

大腸菌群；異養(yǎng)細菌；海水；底質；養(yǎng)殖貝類；廈門海域

海洋細菌是海洋生物群落中的重要組成部分。大腸菌群（coliforms）和異養(yǎng)細菌（heterotrophic bacteria，HB）是海洋環(huán)境中2項重要的微生物污染指標，可用以反映陸源排放的生活污水和工業(yè)廢水的影響以及海洋環(huán)境的有機污染程度。大腸菌群又稱總大腸菌群（Total Coliform Bacteria，TC），它包括埃希氏菌屬、檸檬酸桿菌屬、腸桿菌屬、克雷伯菌屬四個屬，其中以埃希氏菌屬只來源于糞便為主，其他3個菌屬不但存在于糞便中，而且還是土壤和水中的棲息菌［1］。HB是異養(yǎng)微生物的主要組成部分，它能吸收溶解有機質轉化為顆粒有機質的次級生產力相當于初級生產力的30%［2］。微生物對有機質的分解是微生態(tài)系統(tǒng)能量流動和物質循環(huán)的重要環(huán)節(jié)，其中HB對于水域沉積物的礦化及水質環(huán)境的改善起著至關重要的作用［3］。國內外對海洋和近岸海域海水、沉積物和海洋生物體中TC和HB的分布、豐度和種類組成，及其與環(huán)境因子之間的關系進行了許多的研究［4－10］，但對于海水貝類體HB數量分布和質量評價在20世紀末和近幾年才全面展開［11－13］。而對于養(yǎng)殖環(huán)境中HB或TC數量與貝類體中的數量之間的關系研究較少［14］，尤其是貝類各組織器官中HB和TC的數量分布尚未見報道。

廈門海域貝類養(yǎng)殖區(qū)主要分布在同安灣、大嶝海域和西海域的淺海、灘涂和蝦池。主要養(yǎng)殖品種為僧帽牡蠣（Saccostrea cucullata）、菲律賓蛤仔（Ruditapes philippinarum）、泥蚶（Tegillarca granosa）和縊蟶（Sinonovacula constricta）。貝類養(yǎng)殖總面積為6 917hm2，年總產量為12.3萬t。近幾年來，隨著廈門經濟特區(qū)經濟的迅猛發(fā)展和沿海農村城市化進展加快，大量的工農業(yè)廢水和城市生活污水排入廈門海域。貝類養(yǎng)殖區(qū)環(huán)境和養(yǎng)殖貝類的污染呈日趨嚴重之勢，因而進行貝類產區(qū)環(huán)境質量的監(jiān)測評價和劃型是目前亟需開展的工作。現根據廈門海域貝類養(yǎng)殖環(huán)境中有毒有害物質的同步調查結果，對廈門貝類養(yǎng)殖環(huán)境中海水、底質和養(yǎng)殖貝類體中TC和HB的分布特征及其數量之間的相關性、不同類型的底質和貝類不同器官組織中TC和HB的數量進行了分析研究。并對貝類養(yǎng)殖環(huán)境質量進行了討論和評價。為實施水產品食品衛(wèi)生工程，保護人類身體健康，促進貝類產地生態(tài)環(huán)境的保護和貝類養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)發(fā)展提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 樣品采集和處理

在廈門海域主要貝類養(yǎng)殖區(qū)共設置了25個調查站位。淺海浮筏式僧帽牡蠣養(yǎng)殖區(qū)共8個（M1～M8）；蝦池菲律賓蛤仔養(yǎng)殖區(qū)共10個（F1～F10），其中F3，F4，F7～F9站在放養(yǎng)對蝦和貝類前，進行了清池、鋪沙，其余各站均未進行。潮間帶貝類養(yǎng)殖區(qū)5個（M9，M10，N1，N2，Y1，Y2，F11），其中潮間帶僧帽牡蠣條石式養(yǎng)殖區(qū)1個（M9），潮間帶僧帽牡蠣棚架式養(yǎng)殖區(qū)1個（M10），潮間帶菲律賓蛤仔養(yǎng)殖區(qū)1個（F11），潮間帶縊蟶養(yǎng)殖區(qū)2個（Y1和Y2），潮間帶泥蚶圍網蓄水養(yǎng)殖區(qū)2個（N1和N2）。采樣站位分布見圖1。分別于2005－04、2005－10和2006－04，2005－10同步采集海水、底質和養(yǎng)殖貝類二批次樣品。表層水樣用無菌玻璃瓶采集。底質樣品用滅過菌的不銹鋼小勺，刮去表層后，采集于無菌玻璃瓶中。養(yǎng)殖貝類采集種類為僧帽牡蠣、菲律賓蛤仔、泥蚶和縊蟶。貝類樣品裝于無菌塑料袋中。將上述樣品采集后裝入便攜式冷藏箱當日送回實驗室進行分析。

圖1 采樣站位Fig.1 Location of sampling stations

1.2 檢測方法

1.2.1 培養(yǎng)基

1）乳糖蛋白胨培養(yǎng)液：蛋白胨10.0g，牛肉膏3.0g，乳糖5.0g，NaCl 5.0g，溴甲酚紫乙醇溶液（16g·L－1）1mL，蒸餾水1 000mL，Na2CO3溶液調pH 為7.2～7.4。

2）EC培養(yǎng)液：胰蛋白胨20.0g，乳糖5.0g，膽鹽混合物1.5g，K2HPO4·3H2O 4.0g，KH2PO41.5g，NaCl 5.0g，蒸餾水1 000mL，pH 6.9。

3）2216E培養(yǎng)基：蛋白胨5.0g，酵母膏1.0g，FePO40.1g，瓊脂20g，陳海水1 000mL，pH 值為7.6，約105kPa滅菌20min。

1.2.2 檢測方法

樣品的前處理：用無菌培養(yǎng)皿稱取底質（沉積物）樣品1.0g，然后加入無菌海水9.0mL，制成10－1稀釋樣；貝類樣品清除外殼上附著物，用酒精棉球擦洗外殼，然后用滅菌海水沖洗干凈，開殼取體內軟體部。貝類體器官組織樣品開殼時，先將外套腔液收集于無菌燒杯中，然后用無菌解剖刀和手術剪，將貝類體內外套膜和內臟團分離，分裝于無菌燒杯中。取貝類體內組織25.0g，加入無菌海水225mL，勻漿。取1mL勻漿液，制成10－1稀釋樣品。用無菌移液管移取貝類勻漿10－1稀釋樣品或底質10－1稀釋樣品，加入無菌海水制成的10－2，10－3和10－4稀釋樣品。水樣的稀釋步驟與沉積物樣品和貝類樣品相同。

貝類養(yǎng)殖區(qū)海水、底質和養(yǎng)殖貝類體中TC和HB檢測均采用《海洋監(jiān)測規(guī)范》（GB17378.7－2007）中的方法［15］。TC的檢測：水樣品采用15管發(fā)酵法；貝類樣品和沉積物樣品采用9管發(fā)酵法，于37℃恒溫條件下培養(yǎng)24h后，產酸產氣者視為可疑菌群。將可疑菌群接種于EC培養(yǎng)液中，于37℃恒溫條件下培養(yǎng)24 h后計數。HB的檢測：用無菌移液管吸取1mL不同稀釋梯度的水樣，在2216E培養(yǎng)基平板上涂布接種，于30℃恒溫條件下培養(yǎng)48h后計數。

1.3 水產養(yǎng)殖環(huán)境衛(wèi)生質量的評價方法

貝類養(yǎng)殖環(huán)境中海水、底質和養(yǎng)殖貝類中TC和HB的污染評價，采用單因子污染指數法和超標率法，單因子污染指數（Ri）公式：

式中，Ci，Cs分別為海水、底質和養(yǎng)殖貝類中TC和HB的實測值和國家標準和國際標準中的標準限值。

樣品超標率（P%）公式：

式中，Mi，Mt分別為海水、底質和養(yǎng)殖貝類中TC或HB的Ri＞1的樣品數和測定樣品總數。

1.4 國內外水產養(yǎng)殖環(huán)境衛(wèi)生質量的評價標準

對于海洋與漁業(yè)環(huán)境質量評價，國內外制訂了多部標準和規(guī)范。本文研究的為海水貝類養(yǎng)殖環(huán)境，故采用評價標準：1）國內水產養(yǎng)殖區(qū)海水、底質和貝類體中TC和HB的衛(wèi)生標準（表1）；2）歐盟貝類體中TC和HB的衛(wèi)生標準（表2）。

表1 國內水產養(yǎng)殖區(qū)海水、底質和貝類的衛(wèi)生標準Table 1 The sanitation standards for seawater，sediment and shellfish of aquaculture areas in China

表2 歐盟貝類衛(wèi)生質量評價標準Table 2 The assessment standards of sanitation qualification for shellfish in European Economic Community

2 結 果

2.1 TC和HB數量的分布特征

2.1.1 區(qū)域分布

春、秋季廈門海域貝類養(yǎng)殖區(qū)海水、底質（濕重）和養(yǎng)殖貝類體（濕重）中HB分別為（7.0×10～6.1×104）cfu·mL－1，（1.2×104cfu·g－1～9.0×106）cfu·g－1和（5.0×103～9.2×105）cfu·g－1；TC分別為0.02cfu·mL－1～≥24cfu·mL－1，≤2cfu·g－1～240cfu·g－1和≤3cfu·g－1～240cfu·g－1（表3）。

表3 貝類養(yǎng)殖區(qū)海水、底質和養(yǎng)殖貝類中HB和TC的數量Table 3 Numbers of heterotrophic bacteria and coliforms in seawater，sediment and culture shellfish in aquaculture areas

將貝類養(yǎng)殖環(huán)境中3種介質以相同的質量單位比較，底質和養(yǎng)殖貝類體中HB和TC數量比海水中的高1～3個數量級。貝類養(yǎng)殖環(huán)境中HB數量的高值區(qū)分布在未清池鋪沙或未徹底清池的蝦池貝類養(yǎng)殖區(qū)F1，F2，F6和F10站以及杏林排污口鄰近海域貝類養(yǎng)殖區(qū) M10站。HB數量海水中達（8.9×103～6.1×104）cfu·mL－1；底質中達（1.1×105～9.2×106）cfu·g－1，養(yǎng)殖貝類體中達（6.3×104～7.8×105）cfu·g－1。其中F2站和F6站養(yǎng)殖環(huán)境中HB數量最高，海水中分別高達1.6×104cfu·mL－1和6.1×104cfu·mL－1；底質中分別高達2.6×106cfu·g－1和9.0×106cfu·g－1，菲律賓蛤仔體中分別高達7.8×105cfu·g－1和4.0×105cfu·g－1。TC的高值區(qū)均分布在同安排污口鄰近海域M4站、集美排污口鄰近海域Y2站、杏林排污口鄰近海域M10和F11站和海滄排污口鄰近海域的M9站。TC數量在海水中0.27～≥24cfu·mL－1；底質中達（43～240）cfu·g－1，養(yǎng)殖貝類體中達（43～240）cfu·g－1。其中 M4站和 Y2站養(yǎng)殖環(huán)境中TC污染尤其嚴重，海水中TC數量分別達0.27cfu·mL－1和≥24cfu·mL－1；底質中分別達130cfu·g－1和240cfu·g－1；僧帽牡蠣和縊蟶體中分別達43cfu·g－1和240cfu·g－1。HB和TC的低值區(qū)分布在與外海水交換條件較好、人類活動影響較小的同安灣口M6站、大嶝海域的M7站和M8站。其HB數量海水中為7.0×10～4.6×102cfu·mL－1，底質中為1.2×104～8.6×104cfu·g－1，僧帽牡蠣體中為2.0×103～8.1×104cfu·g－1。TC數量海水中為≤0.02～0.14cfu·mL－1，底質中為≤2cfu·g－1～4cfu·g－1，僧帽牡蠣體中為≤3cfu·g－1～4cfu·g－1。高值區(qū)與低值區(qū)環(huán)境中HB和TC數量的差異達1～3個數量級。總體上，不同區(qū)域的貝類養(yǎng)殖環(huán)境中HB數量的高低依次為蝦池貝類養(yǎng)殖區(qū)、潮間帶貝類養(yǎng)殖區(qū)、淺海貝類養(yǎng)殖區(qū)；TC數量的高低依次為潮間帶貝類養(yǎng)殖區(qū)、淺海貝類養(yǎng)殖區(qū)、蝦池貝類養(yǎng)殖區(qū)，其平面分布呈同安灣內和西海域較高，同安灣口和大嶝海域較低的格局。

2.1.2 季節(jié)分布

春季（4月）、秋季（10月）均有采樣的貝類養(yǎng)殖環(huán)境中HB和TC數量的季節(jié)分布（圖2），大多數站位春、秋季海水和底質中HB和TC數量分布差異較小，均處于同一數量級。總體上，海水中HB和TC數量春季稍高于秋季，這在河口和陸源排污口鄰近海域類養(yǎng)殖區(qū)（N1，N2，M1站）尤其明顯；底質中HB數量春、秋季無明顯差異，TC數量秋季稍高于春季；養(yǎng)殖貝類（僧帽牡蠣、菲律賓蛤仔、泥蚶和縊蟶）體中HB和TC數量的季節(jié)分布較明顯，秋季比春季分別高1.4倍～4.7倍和1.3倍～6.4倍。同安灣口的M6站、大嶝海域的M7站、M8站和Y2站海水、底質和養(yǎng)殖貝類體中HB和TC數量波動較小，春、秋季無明顯差異。

2.2 貝類體內不同組織中TC和HB的數量比較

雙殼類軟體動物通過濾食和呼吸等生理生活活動，將海水中的TC和HB攝入體內而分布于體內不同器官組織中。將貝類體內臟團、外套膜和外套腔液中TC或HB的數量除以三者的數量之和，得出貝類體內臟團、外套膜和外套腔液中TC或HB的數量分配率。由圖3所示，僧帽牡蠣體外套膜中HB的數量最高，外套腔液中的數量次之，內臟團中的數量最低。其數量分配率分別為55.6%，36.4%和8.0%；TC數量外套膜中最高，內臟團和外套腔液中TC數量均低于檢出限（≤3cfu·g－1），其數量分配率分別為75.0%，12.5%和12.5%；縊蟶和菲律賓蛤仔體外套腔液中HB和TC的數量最高，外套膜中的數量次之，內臟團中的數量最低。縊蟶體內外套腔液、外套膜和內臟團中HB的數量分配率分別為44.1%，41.2%和14.7%，TC的數量分配率分別為59.5%，36.9%和3.6%。；菲律賓蛤仔體內外套腔液、外套膜和內臟團中HB的數量分配率分別為48.5%，42.4%和9.1%，TC的數量分配率分別為53.1%，37.5%和9.4%。由此表明，雖然3種養(yǎng)殖貝類取自不同的養(yǎng)殖區(qū)，但其體內器官組織中HB和TC的數量分布趨勢仍較明顯，僧帽牡蠣：外套膜＞外套腔液＞內臟團；縊蟶和菲律賓蛤仔：外套腔液＞外套膜＞內臟團。

2.3 不同類型底質中TC和HB的數量比較

將貝類養(yǎng)殖區(qū)底質的粒度粗略地分成3級：粉砂、粉砂質軟泥和軟泥（圖4）。淺海灘涂養(yǎng)殖區(qū)軟泥中TC和HB的數量比粉砂質軟泥中的數量平均分別高20倍和1.4倍，比粉砂中的數量平均分別高62倍和6.2倍；粉砂質軟泥中的數量比粉砂中的數量平均分別高2倍。蝦池貝類養(yǎng)殖區(qū)軟泥中TC和HB的數量比粉砂質軟泥中的數量平均分別高3.0倍和4.0倍，比粉砂中的數量平均分別高7.0倍和15倍；粉砂質軟泥中TC和HB的數量比粉砂中的數量平均分別高1.0倍和2.3倍。由此表明，淺海灘涂貝類養(yǎng)殖區(qū)不同類型底質中TC的數量差異比蝦池貝類養(yǎng)殖區(qū)明顯；蝦池貝類養(yǎng)殖區(qū)不同類型底質中HB數量的差異則比淺海灘涂貝類養(yǎng)殖區(qū)明顯。總體上，貝類養(yǎng)殖區(qū)不同類型底質中HB總數和TC數量的高低，軟泥＞粉砂質軟泥＞粉砂。

2.4 海水、底質和養(yǎng)殖貝類體中TC和HB數量之間的相關性

由表4所示，淺海貝類養(yǎng)殖區(qū)海水與僧帽牡蠣、底質與僧帽牡蠣體中HB或TC數量之間成正相關關系，經t檢驗，相關性分別為顯著（P＜0.05）和高度顯著（P＜0.01）；海水與底質中HB或TC數量之間成正相關關系，經t檢驗，其相關性不顯著（P＞0.05）。在蝦池貝類養(yǎng)殖區(qū)海水與菲律賓蛤仔體中HB或TC數量之間成正相關關系，經t檢驗，相關性高度顯著（P＜0.01）和顯著（P＜0.05）；海水與底質、底質與菲律賓蛤仔體中HB或TC數量之間成正相關關系，經t檢驗，其HB數量之間的相關性顯著（P＜0.05），其TC數量之間的相關性則不顯著（P＞0.05）。

表4 在3種環(huán)境介質中TC或HB數量之間的相關系數Table 4 Correlation between numbers of heterotrophic bacteria or comforms in three environment mediums

2.5 貝類養(yǎng)殖環(huán)境質量評價

廈門貝類養(yǎng)殖區(qū)水質、底質和和養(yǎng)殖貝類衛(wèi)生質量采用表1中國內標準評價，從表5可看出，水質中TC的污染指數范圍為0.02～48.0，總平均值為3.35。超標率為13.2%。潮間帶貝類養(yǎng)殖區(qū)污染指數的平均值和超標率均最高，淺海貝類養(yǎng)殖區(qū)次之，蝦池貝類養(yǎng)殖區(qū)最低。底質中TC污染指數范圍為0.01～1.20，總平均值0.14，超標率為5.26%，潮間帶貝類養(yǎng)殖區(qū)底質中TC污染指數的平均值和超標率均較高，淺海和蝦池貝類養(yǎng)殖區(qū)底質中TC污染指數較低且未超標。養(yǎng)殖貝類體TC的污染指數范圍為0.3～80.0，總平均值6.71，超標率達73.7%。潮間帶貝類養(yǎng)殖區(qū)貝類中污染指數的平均值最高，淺海貝類養(yǎng)殖區(qū)次之，蝦池貝類養(yǎng)殖區(qū)最低，超標率則反之。養(yǎng)殖貝類體中HB的污染指數范圍0.01～0.92，總平均值為0.18。樣品均未超標。養(yǎng)殖貝類衛(wèi)生質量采用表2中歐盟《活雙殼貝類和投放市場的衛(wèi)生條件規(guī)定》（91／492／EEC）［20］和《關于煮熟的甲殼類和貝類產品生產的微生物指標》（93／51／EEC）［21］的標準評價，廈門海域養(yǎng)殖貝類體TC指標的合格率占26.3%，需凈化的養(yǎng)殖貝類達63.2%，不合格率占10.5%。除潮間帶養(yǎng)殖貝類泥蚶中TC指標的合格率較高外，其余潮間帶養(yǎng)殖貝類、淺海養(yǎng)殖貝類和蝦池養(yǎng)殖貝類的合格率均較低。養(yǎng)殖貝類體HB指標的合格率占42.1%。不合格率占57.9%。淺海養(yǎng)殖貝類HB指標的合格率較高，潮間帶養(yǎng)殖貝類和蝦池養(yǎng)殖貝類的合格率較低。

表5 海水、底質和養(yǎng)殖貝類衛(wèi)生質量的評價Table 5 Assessment of sanitation quality of seawater，sediment and cultured shellfish

3 討 論

3.1 貝類養(yǎng)殖環(huán)境中TC和HB數量的分布特征

養(yǎng)殖貝類對TC和HB具有富集作用，而底質表層2～5cm處有機質較為豐富，是適合細菌大量繁衍的場所。據Lochte估計，沉積物表層10cm內底棲HB的生物量占整個水層系統(tǒng)和底棲系統(tǒng)總細菌生物量的75%［22］。故貝類養(yǎng)殖環(huán)境中的TC和HB主要存在于底質和養(yǎng)殖貝類體中。貝類養(yǎng)殖區(qū)環(huán)境中TC數量的區(qū)域分布，潮間帶貝類養(yǎng)殖區(qū)＞淺海貝類養(yǎng)殖區(qū)＞蝦池貝類養(yǎng)殖區(qū)。可能的綜合影響因素：1）同安灣2條主要入海徑流同安東溪和西溪，其合流段水體中糞TC值高達1.59×106cfu·L－1。廈門地區(qū)一些污水處理廠排出的污水中TC數量未達到《城鎮(zhèn)污水處理廠污染物排放標準》（GB18918－2002），其排污水大部分輸入西海域和同安灣①廈門市環(huán)境保護局.廈門市2004年環(huán)境質量概要，2005.；2）TC主要來源于陸源排污水，大量的陸源排污水均直接注入潮間帶，故使該海區(qū)環(huán)境受TC的污染相對較重；3）陸源排污水抵達淺海時，受到外海水較強的稀釋和混合作用，海水中TC的數量顯著下降；4）蝦池為半封閉性環(huán)境，一般在高平潮時納水，蝦、貝混養(yǎng)模式的納水頻率較低，在10～15d進排水一次，故蝦池受陸源TC的污染明顯較輕。貝類養(yǎng)殖環(huán)境中HB數量的區(qū)域分布，蝦池貝類養(yǎng)殖區(qū)＞灘涂貝類養(yǎng)殖區(qū)＞淺海貝類養(yǎng)殖區(qū)。可能的綜合影響因素：1）蝦池經多年養(yǎng)殖底質已趨老化，未清池消毒或清池不徹底的蝦池，底部蓄積的大量有機質成為HB的天然培養(yǎng)基，為HB的生長和繁殖提供了大量的能量和碳源［23］；2）蝦、貝混養(yǎng)時，換水量較少，對蝦殘餌以及蝦、貝等水生生物的排泄物排出較少而大量沉降積累于蝦池底質中；3）蝦池浮游植物密度較高且更替較快，浮游植物的分泌物和排泄物是HB的食物，其尸骸溶出的溶解有機物是HB有機營養(yǎng)的主要來源［24］；4）蝦池中水溫較高，有利于HB的大量繁殖。由此表明，貝類養(yǎng)殖區(qū)HB和TC數量分布，前者與其環(huán)境中受有機污染的程度密切相關，后者與其環(huán)境中陸源排污水的輸入量密切相關。

廈門海域貝類養(yǎng)殖區(qū)均分布于近岸海域和毗鄰近岸的蝦池，春季（4月）處于豐水期，雨量充沛，攜帶了大量TC和HB的陸源沖淡水在近岸海域水體中的輸入量較大，故貝類養(yǎng)殖區(qū)海水中TC和HB數量春季總體稍高于秋季，受陸源沖淡水影響較大的潮間帶貝類養(yǎng)殖區(qū)和陸源排污口鄰近海域的貝類養(yǎng)殖區(qū)季節(jié)分布趨勢尤其明顯。貝類養(yǎng)殖區(qū)底泥溫度秋季（10月）比春季（4月）相對較高，對適合較高環(huán)境溫度的TC的繁殖起了促進作用，這是底質中TC數量秋季總體高于春季的原因之一。但是，貝類養(yǎng)殖區(qū)底質中HB數量的季節(jié)分布卻無明顯的差異，僅潮間帶貝類養(yǎng)殖區(qū)和陸源排污口鄰近海域的貝類養(yǎng)殖區(qū)底質中HB數量春季稍高于秋季，表明泥溫對底質中HB數量的季節(jié)分布影響較小，并非是主要的環(huán)境影響因素。這與薛超波等的調查結果一致［25］。廈門海域貝類養(yǎng)殖區(qū)海水水溫秋季（10月）比春季（4月）高3～5℃，在適宜的溫度下，養(yǎng)殖貝類體新陳代謝較為旺盛，隨著養(yǎng)殖貝類攝食及生理活動的提高，其攝入體內的TC和HB數量亦隨之增加，這是養(yǎng)殖貝類體中TC和HB數量分布秋季高于春季的主要原因。由此表明，貝類養(yǎng)殖區(qū)海水和養(yǎng)殖貝類體中TC和HB數量的季節(jié)分布分別受到陸源沖淡水輸入量和貝類攝食及生理活動頻率的影響，底質中HB的季節(jié)分布主要受到底泥有機碳濃度的影響［26］，而TC數量的季節(jié)分布則受到泥溫的影響。

3.2 養(yǎng)殖貝類體不同器官組織和不同類型底質中TC和HB數量的比較

海水總懸浮顆粒中附菌顆粒量所占的比例為52%，附菌顆粒數與水體中總懸浮顆粒數關系極為密切［27］。僧帽牡蠣通過鰓纖毛的運動將含有一定量懸浮顆粒（食物）的水流引入進水腔時，大型的懸浮顆粒未到達鰓表面之前就沉降到外套膜上，且在食物運送的過程中，食物運送溝中較重的被鰓絲分泌的粘液包裹的顆粒亦沉降在外套膜上［28］。沉降在外套膜上的懸浮微粒比表面積較大，粘附了數量較多的細菌。從而導致僧帽牡蠣體外套膜中HB和TC數量明顯高于內臟團和外套腔液中數量。縊蟶和菲律賓蛤仔則以鰓纖毛打動產生水流，一定量懸浮顆粒（食物）隨海水從進水管進入體內外套腔，經鰓過濾，大小適宜的顆粒運送到消化管，而不適宜的顆粒則留在外套腔中。由于滯留于外套腔中表面粘附了較多細菌的顆粒混溶于外套腔液中，從而導致縊蟶和菲律賓蛤仔體外套腔液中細菌數量相對較高，外套膜和內臟團中的數量相對較低。

據鄭國興等報道，沉積物中細菌數量隨含泥量、有機質含量和全氮量的增加而增加［29］。軟泥中顆粒粒度較細且富含有機質，粒度較細的顆粒比表面積較大，有較多的表面積供細菌附著，豐富的有機質可作細菌生長、繁殖的營養(yǎng)源［30］，而粒度較粗的粉砂質泥和粉砂，比表面積較小，內部所蓄積有機質含量較低，故其細菌數量亦相對較低。從而導致貝類養(yǎng)殖區(qū)不同類型底質中TC和HB的數量表現出明顯的差異性。

3.3 海水、底質和養(yǎng)殖貝類體TC或HB數量之間的相關性

淺海貝類養(yǎng)殖區(qū)海水中HB和TC的數量高低直接影響到養(yǎng)殖貝類體中的數量。而底質中HB和TC數量的高低對底棲貝類體中的數量影響更為顯著，這可能是養(yǎng)殖貝類和底質中存在的HB和TC相對較為穩(wěn)定，而海水中的HB和TC數量受潮流、潮汐等各種因素的影響較大之故。底質與海水中HB或TC數量之間相關性不顯著，這與姚瑞梅等在大亞灣的調查結果一致［31］。這可能與淺海貝類養(yǎng)殖區(qū)水體較深，一般為5～10m，底質中細菌遷移、擴散至海水中時受海流、潮汐等因素的影響，其遷移、擴散的速度、方向與采樣站位不盡相同之故。在蝦池貝類養(yǎng)殖區(qū)海水、底質、菲律賓蛤仔體中HB數量之間的相關性均顯著或高度顯著，這是由于蝦池為半封閉的水體，水深僅為1～1.5m，底質中富含有機質，HB繁衍旺盛且較易遷移至水體中，底質中的HB是水體和養(yǎng)殖貝類體中HB的主要來源，故海水、底質、養(yǎng)殖貝類體中HB數量之間的關系十分密切。而蝦池貝類養(yǎng)殖區(qū)環(huán)境中的TC主要靠蝦池進水時輸入，海水中TC數量較高時，菲律賓蛤仔攝入體中的TC數量隨之增加。在海水環(huán)境中，由于受鹽效應的影響，雖然蝦池海水和底質中供TC繁殖的營養(yǎng)物質較豐富，但其卻無法大量繁殖，這可能是海水與底質、底質與菲律賓蛤仔體中TC數量之間無顯著相關的原因。

3.4 貝類養(yǎng)殖環(huán)境衛(wèi)生質量評價

廈門海域貝類養(yǎng)殖區(qū)海水和底質中TC的超標率分別為13.2%，5.26%；養(yǎng)殖貝類體中TC和HB指標的不合格率分別10.5%和57.9%。貝類養(yǎng)殖環(huán)境質量用TC作評價指標，淺海貝類養(yǎng)殖環(huán)境質量較好，蝦池貝類養(yǎng)殖環(huán)境質量次之，潮間帶貝類養(yǎng)殖環(huán)境質量較差。養(yǎng)殖貝類衛(wèi)生質量用HB作評價指標，淺海養(yǎng)殖貝類質量較好，潮間帶養(yǎng)殖貝類質量次之，蝦池養(yǎng)殖貝類質量較差。由此表明，廈門貝類養(yǎng)殖區(qū)海水、底質和養(yǎng)殖貝類受到TC和HB不同程度的污染。潮間帶貝類養(yǎng)殖區(qū)受到TC的污染和蝦池貝類養(yǎng)殖區(qū)受到HB的污染尤其嚴重。值得注意的是，潮間帶養(yǎng)殖貝類泥蚶體中無論是TC指標抑或是HB指標均處于合格狀態(tài)，表明泥蚶在較差的衛(wèi)生環(huán)境中，對細菌具有較強的抑制能力。這是潮間帶貝類體TC或HB的超標率或合格率出現異常的原因。國內外對于水產養(yǎng)殖環(huán)境和水產品中細菌數量的衛(wèi)生標準相差較大，《海水水質標準》（GB3097－1997）中合格和供生食的養(yǎng)殖水體中TC數量標準分別為≤10cfu·mL－1和0.7cfu·mL－1，《漁業(yè)水質標準》（GB11607－89）中養(yǎng)殖水中TC數量標準為≤0.5cfu·mL－1。美國《國家貝類衛(wèi)生綱要》（NSSP）中的標準用菲律賓蛤仔對養(yǎng)殖水體中TC的富集公式換算，合格和供生食的養(yǎng)殖水體中TC限量分別為≤0.7cfu·mL－1和≤0.14cfu·mL－1［32－33］。而可直接上市的養(yǎng)殖貝類體中 TC的安全限量，《農產品安全質量無公害水產品安全要求》（GB18406.4－2001）中為≤0.3cfu·g－1，《貝類凈化技術規(guī)范》（SC／T3013－2002）中TC限量與歐盟《活雙殼貝類和投放市場的衛(wèi)生條件規(guī)定》（91／492／EEC）一致，為≤3cfu·g－1。《農產品安全質量無公害水產品安全要求》（GB18406.4－2001）中養(yǎng)殖貝類體HB數量標準為≤1.0×106cfu·g－1濕重，歐盟《關于煮熟的甲殼類和貝類產品生產的微生物指標》（93／51／EEC）中貝類體HB數量標準則為≤5×104cfu·g－1，濕重或養(yǎng)殖區(qū)40%貝類樣品應在＞5×104cfu·g－1～≤5×105cfu·g－1濕重范圍內。國內外養(yǎng)殖水質和貝類衛(wèi)生質量指標的評價結果差異較大，這是由于歐盟的91／492／EEC和93／51／EEC指令中的標準，主要是考慮到歐美人生吃貝類的習慣而制定的。根據我國群眾普遍均有貝類煮熟進食的習慣，建議重新修訂貝類質量衛(wèi)生標準，并分別制定我國生吃貝類和熟吃貝類的衛(wèi)生標準。這樣既能與國外的標準如歐盟的91／492／EEC，93／51／EEC和美國《國家貝類衛(wèi)生規(guī)范》（NSSP）和國際食品法典委員會的《活雙殼貝類及加工品標準草案》（CAC－GL31－1999）［34］中的標準（在這些標準中，貝類體中的衛(wèi)生標準基本一致）接軌，又能在保持貝類衛(wèi)生質量，對人體健康無影響的前提下，降低貝類養(yǎng)殖產業(yè)的成本，促進我國貝類養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。

（Reference）：

［1］ LI S Y.The classing and inspecting technology of environmental microorgannism［M］.Beijing：Chemical Industry Press，2005：284－285.李素玉.環(huán)境微生物分類與檢測技術［M］.北京：化學工業(yè)出版社，2005：284－285.

［2］ COLE J，PACE M.Bacteria production in fresh and salt water ecosystems：a cross－system overview［J］.Mar.Ecol.Prog.Ser.，1988，43：1－10.

［3］ JIAO J P，ZHANG S Y，YANG H，et al.Distribution of fecal coliform bacteria and heterotrophic bacteria and its environment factors in Hangzhou Bay［J］.Journal of Shanghai Fisheries University，2000，9（3）：209－213.焦俊鵬，章守宇，楊紅，等.杭州灣糞大腸桿菌和異養(yǎng)細菌的分布特征及其環(huán)境因子［J］.上海水產大學學報，2000，9（3）：209－213.

［4］ SHEN X S，CHEN Y Q，CHEN Q.Distribution characteristic of coliform and heterotrophic bacteria in Fengxian of Hangzhou Bay in summer［J］.Marine Environmental Science，2006，25（1）：20－23.沈曉盛，陳亞瞿，陳瓊.杭州北岸奉賢水域大腸菌群和異養(yǎng)細菌的生態(tài)分布［J］.海洋環(huán)境科學，2006，25（1）：20－23.

［5］ QIAO X D，TANG X X，XIAO H.Analysis of bacterial abundance in Costal Bohai Bay［J］.Periodical of Ocean University of China，2007，37（2）：273－276.喬曉東，唐學璽，肖慧，等.渤海灣近岸海域的細菌數量分析［J］.中國海洋大學學報，2007，37（2）：273－276.

［6］ JENNIFER C，JAMESA A E，ELLEN T M.Utilization and turnover of labile dissolved organic matter by bacteria heterotrophic in eastern North Pacific surface water［J］.Mar.Ecol.Prog.Ser.，1996，139：267－279.

［7］ WANG W Q，QIAN Z R.Study of heterotrophic bacteria，coliform bacteria and oil decomposing bacteria in the Jiaozhou Bay［J］.Marine Sciences，2000，24（1）：37－39.

［8］ ZHAO S J，XIAO T，LI H B，et al.Distribution of heterotrophic bacteria and coliform in Jiaozhou Bay and its indication to pollution from land［J］.Oceanologica Limnologia Sinica，2005，36（6）：541－547.趙三軍，肖天，李洪波，等.膠州灣異養(yǎng)細菌及大腸菌群的分布及對陸源污染的指示［J］.海洋與湖沼，2005，36（6）：541－547.

［9］ LIN X T，YAN R J，HUANG C J.Distribution of bacteria and environmental factors in the large－scale mariculture area of Zhelin Bay in East Guangdong，China［J］.Acta Oceanologica Sinica，2006，28（3）：167－172.林小濤，晏榮軍，黃長江.粵東大規(guī)模海水增養(yǎng)殖區(qū)柘林灣細菌與環(huán)境因素的關系［J］.海洋學報，2006，28（3）：167－172.

［10］ ZHOU W H，WANG H K，DONG J D，et al.Phytoplankton and bacteria biomass and theri ralationship with the environmental factors in auturmn and winter in the Sanya Bay，China［J］.Acta Ecologica Sinica，2006，26（8）：2632－2639.周偉華，王漢奎，董俊德，等.三亞灣秋、冬浮游植物和細菌的生物量分布特征及其與環(huán)境因子的關系［J］.生態(tài)學報，2006，26（8）：2633－2639.

［11］ NI C Z，ZEN W Y.Preliminary assay of coliforms in sea water and several edible bivalves of Tolo Harbour，Hong Kong［J］.Tropic O－ceanology，1985，4（3）：80－84.倪純治，曾文陽.香港大埔海海水和幾種食用貝類中含大腸菌群的初步檢測［J］.熱帶海洋，1985，4（3）：80－84.

［12］ HE J.LIN F A，BIAN Z H，et al.The coliform in scallop and its environment near the shore of the China Yellow Sea and Bohai Sea.Marine Environment Science，2002，21（2）：42－46.賀杰，林鳳翱，卞正和，等.渤、黃海沿岸幾種經濟貝類及其環(huán)境中的糞大腸菌群［J］.海洋環(huán)境科學，2002，21（2）：42－46.

［13］ LIN F A，BIAN Z H，GUAN C J，et al.The heterotrophic bacteria in sea water and shellfish in the Bohai Sea and Huanghai Sea coast［J］.Acta Oceanologica Sinica，2002，24（2）：101－105.林鳳翱，卞正和，關春江，等.渤海、黃海沿岸幾種經濟貝類及其生存環(huán)境中的異養(yǎng)細菌［J］.海洋學報，2002，24（2）：101－105.

［14］ LIN F A，YU Z G，LIANG Y B，et al.The fecal coliform and total bacteria in shellfish in coastal environment of Liaodong Bay［J］.Marine Environmental Science，2004，23（3）：43－45.林鳳翱，于占國，梁玉波，等.遼東沿岸貝類和環(huán)境中的糞大腸菌和細菌總數［J］.海洋環(huán)境科學，2004，23（3）：43－45.

［15］ GB17378.7－2007Marine monitoring protocols［S］.Beijing：Chinese Standard Press，2007.GB17378.7－2007海洋監(jiān)測規(guī)范［S］.北京：中國標準出版社，2007.

［16］ B11607－1989Water quality standard for fisheries［S］.Beijing：Chinese Standard Press，1989.GB11607－1989漁業(yè)水質標準［S］.北京：中國標準出版社，1989.

［17］ GB18668－2002Marine sediment quality［S］.Beijing：Chinese Standard Press，2002.GB18668－2002海洋沉積物質量［S］.北京：中國標準出版社，2002.

［18］ GB18406.4－2001Safety qualification for agricultural product－Safety requirements for non－environmental pollution aquatic products［S］.Beijing：Chinese Standard Press，1989.GB18406.4－2001農產品安全質量 無公害水產品安全要求［S］.北京：中國標準出版社，2001.

［19］ SC／T3013－2002Technical specification for shellfish depuration［S］.Beijing：Chinese Standard Press，2002.SC／T3013－2002貝類凈化技術規(guī)范［S］.北京：中國標準出版社，2003.

［20］ 91／492／EEC Laying down the health conditions for the production and the placing on the market of live bivalve molluscs［S］.Brussels：Official Journal of the European Committee，1991，34：15－34.

［21］ 93／51／EEC On the microbiological criteria applicable to the production of cooked crustaceans and molluscan shellfish［S］.Brussels：Official Journal of the European Committee，1993.

［22］ LOCHTE K.Bacterial standing stock and consumption of organic carbon in the benthic boundary layer of the abyssal North Atlantic［J］.Deep－sea Food China and the Globe Carbon Cycle，1992，360：1－10.

［23］ ZHONG S L，CHEN Y Z，LIN K B，et al.Studies on variation of contents of NH＋4－N，S2－and heterotrophic bacteria in substrate of shrimp ponds and their correlations［J］.Journal of Oceanography in Taiwan Strait，1997，16（4）：450－453.鐘碩良，陳月忠，林克冰，等.蝦池表層沉積物中NH＋4－N，S2－和異養(yǎng)細菌含量的變化及其相關研究［J］.臺灣海峽，1997，16（4）：450－453.

［24］ TURLEY C M，MACKIE P J.The significance of bacteria attached to sanding aggregates in the upper and mid water column in the Atlantic Ocean［J］.Deep－sea Res I，1995，42：1453－1474.

［25］ XUE C B，WANG G L，JIN S，et al.The dynamic distribution of some main bacteria in the marine shoalmud［J］.Chinese Journal of Microecology，2007，19（5）：426－428.薛超波，王國良，金珊，等.海洋灘涂沉積物環(huán)境中幾類主要細菌的動態(tài)變化［J］.中國微生態(tài)學雜志，2007，19（5）：426－428.

［26］ LIU H H，XUE C B.The bacteria distribution on the culture environment of interdial shellfish［J］.Acta Ecologica Sinica，2008，28（1）：436－444.劉慧慧，薛超波.灘涂貝類養(yǎng)殖環(huán)境的細菌分布［J］.生態(tài)學報，2008，28（1）：436－444.

［27］ LIU G C，LI D S，XU H S，et al.A study on bacteria attached to suspended particles in shrimp ponds［J］.Acta Oceanologica Sinica，1999，21（1）：97－102.劉國才，李德尚，徐懷恕，等.對蝦池懸浮顆粒附著細菌的研究［J］.海洋學報，1999，21（1）：97－102.

［28］ WANG R C，WANG S P，ZHANG J Z.Marine Shellfish culture［M］.Qingdao：Ocean University of Qingdao Press，1998.王如才，王昭萍，張建中.海水貝類養(yǎng)殖學［M］.青島：青島海洋大學出版社，1998.

［29］ ZHENG G X，SHI Q X，CHEN Z Y，et al.Study of the Relationship between bacteria and sediment the estuary of Changjiang River andits adjacent continental shelf［J］.Acta Oceanologica Sinica，1982，4（6）：743－753.鄭國興，史群賢，陳忠元，等.長江口及鄰近陸架海區(qū)細菌與沉積物相互關系的初步探討［J］.海洋學報，1982，4（6）：743－753.

［30］ GAO S D，CHEN X R，WU Y P.Variation of total bacteria number in shrimp pond waters and substrate during the adult culture of Penaeus Chinensis［J］.Journal of Fisheries of China，1994，12（8）：138－142.高尚德，陳旭仁，吳以平.中國對蝦養(yǎng)成期間蝦池水體和表層沉積物中細菌含量的變化［J］.水產學報，1994，18（2）：138－141.

［31］ YAO L M，NI C Z.Distribution of heterotrophic bacteria in Daya Bay sediments［C］∥ Collections of Papers on Marine Ecology in the Daya Bay（Ⅰ），Beijing：Ocean Preess，1989：46－52.姚瑞梅，倪純治.大亞灣沉積物中異養(yǎng)細菌的分布［C］∥ 大亞灣生態(tài)論文集（Ⅰ），北京：海洋出版社，1989：46－52.

［32］ The National Shellfish Sanitation Program（U.S.A.），Model Ordinance［S］.Silver Spring MO，USA：2009，Revision.

［33］ XU J，QIAO Q L，CAI Y Q，et al.Study on safety level of coliform bacteria for ruditapes philippinarum in the rearing water［J］.Fisheries Science and Technology Information，2006，33（1）：3－7.徐捷，喬慶林，蔡友瓊，等.菲律賓蛤仔養(yǎng)殖水體中大腸桿菌安全限量研究［J］.水產科技情報，2006，33（1）：3－7.

［34］ CAC－G131－1999Codex Guidelines for the Sensory Evaluation of Fish and Shellfish in Laboratories［S］.Rome，Italy：Codex Alimentarius Commission，1999.

（高 峻 編輯）

Coliforms and Heterotrophic Bacteria in the Environment of Shellfish Culture in Xiamen Sea Area

ZHONG Shuo－liang1，HUANG Wan－h(huán)ong2，CHEN Yue－zhong1
（1.Fisheries Research Institute of Fujian，Xiamen 361012，China；2.Fisheries Research Institute of Xiamen，Xiamen 361005，China）

In spring（April）and Autumn（October）of 2005and 2006，the quantitative distribution and correlation of coliforms（TC）and heterotrophic bacteria（HB）in different culture environments（seawater，sediments）and shellfish tissues along Xiamen sea area were studied，and the sanitaiony quality of shellfish culture environment was evaluated.The results showed that the higher number of TC was found in the tidal zone，whereas the lower number was found in shrimp pond or shallow sea.The number of HB was higher in shrimp pond and lower in tidal zone or shallow sea.As a whole，the numbers of both TC and HB in the west sea area of Xiamen and Tong＇an Bay were higher than those in Dadeng sea area and Tong＇an Bay mouth.The number of TC and HB in seawater of most stations was slightly higher in spring than in autumn，but lower in shellfish tissue.In sediments，the number of HB was no significant differences between in spring and in autumn，but the number of TC was higher in autumn than in spring.In the shallow sea and shrimp pond，there was a significantly positive correlation between the numbers of TC and HB in seawater and in shellfish tissues or between in sediments and in shellfish.The numbers of TC and HB in shellfish culture environments were compared：those in ooze sediment were higher than those in silty ooze；and those in silt sand were the least.The numbers of TC and HB in shellfish tissues were compared：those in mantle of Saccostrea cucullata were higher than those in mantle cavity fluid，and those in visceral mass were the least；Those in mantle cavity fluid of Ruditapes philippinarumand Sinonovacula constricta were higher than those in mantle，and those in visceral mass were the least.The environmental quality of shellfish culture in Xiamen sea area suffered from the TC and HB pollution to various degrees.The shellfish culture areas of tidal zone and shrimp pond were seriously polluted by TC and HB，respectively.

coliforms；heterotrophic bacteria；seawater；sediment；culture－shellfishes；Xiamen sea area

January 24，2011

Q142

A

1671－6647（2012）03－0357－12

2011－01－24

廈門市海洋與漁業(yè)局資助項目——廈門市貝類生產環(huán)境區(qū)劃研究（廈海漁2004－06）

鐘碩良（1953－），男，福建武平人，教授級高工，主要從事海洋與漁業(yè)生態(tài)環(huán)境方面的研究.E－mail：ZSL－5388@163.com