UHPLC法測定食品中黃曲霉毒素的含量

歐陽燕玲 陳玲 曾志定

UHPLC法測定食品中黃曲霉毒素的含量

歐陽燕玲 陳玲 曾志定

目的 建立一種同時測定食品中多種黃曲霉毒素含量的方法。方法 采用UHPLC法同時測定食品中黃曲霉毒素B1、B2、G1與G2，并建立回歸方程，考察方法的準確度與精密度。結果 在各自的線性范圍中，黃曲霉毒素B1、B2、G1與G2的濃度c(μg/L)與峰面積A呈現良好的線性關系(r>0.999)。食品樣品的平均回收率為83.4%～107.5%。黃曲霉毒素B1、B2、G1與G2的相對標準偏差RSD為2.21%、2.79%、3.62%、2.57%(n=5)。結論 UHPLC法操作簡便、線性范圍較廣、靈敏度高、準確度和精密度良好，是實用的黃曲霉毒素檢測方法。

超高效液相色譜法；UHPLC；食品；黃曲霉毒素；理化檢驗

黃曲霉毒素中的黃曲霉毒素B1、B2、G1與G2毒性最強，黃曲霉毒素具有高致癌性，能引發人類多種癌變，尤其是肝癌[1-2]。糧油食品、熱帶與亞熱帶地區食品受到黃曲霉毒素的污染較為嚴重，食品中的黃曲霉毒素污染問題受到國內外政府主管部門的重視。近年來，檢測食品中黃曲霉毒素的主要方法為高效液相色譜(HPLC)法與酶聯免疫(ELISA)法[3-4]。ELISA法檢驗步驟簡便，但假陽性結果較多。HPLC法操作簡便、靈敏度高、準確率好，還可同時定量測定多種黃曲霉毒素。

1 材料與方法

1.1 儀器 1290 Infinity型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；凈化萃取柱（美國Multisep romer labs公司）；分析天平；干燥箱；離心機；混勻器。

1.2 試劑 黃曲霉毒素（Sigm a公司）；三氟乙酸（Sigm a公司）；乙腈（色譜純）；甲醇（色譜純）；水為純化水；正己烷（分析純）；其它試劑均為分析純。

1.3 UHPLC條件 色譜柱：C 18柱(Zorbax Ex tend C 18,50mm×2.1mm id,1.8μm)（美國A gilen t公司）；柱溫：35℃；進樣量：20μL；檢測器：G1321A型熒光檢測器，激發波長：365nm，發射波長：450nm；流動相：乙腈:甲醇:水=1:3:6；流速1.0m L/m in。

1.4 標準溶液的配制方法 取黃曲霉毒素標準品配制質量濃度分別為10.0、5.0、2.5、1.25、0.625μg/L的標準溶液，吹氮氣干燥，然后加0.1m L三氟乙酸溶液，放入混勻器快速振蕩混勻。置室溫暗處約20m in，再加0.9m L乙腈和水混合液（體積比88:12），2000 r/m in離心10 m in，保留上清液待測。

1.5 樣品處理方法 將食品樣品粉碎后，稱取20g樣品置250m L的三角瓶內，再加80m L乙腈和水混合液（體積比88:12），置搖床上振蕩30m in混勻，抽濾得到樣品提取液。精確量取8m L樣品提取液，置凈化柱中，慢速推柱，獲得凈化后的樣品提取液。精確量取2m L凈化液加入棕色具塞小口瓶中，置60℃水浴中，吹氮氣干燥，加入100μL三氟乙酸衍生液與200μL正己烷，置混勻器上混勻，置干燥箱中40℃衍生20m in，置室溫中蒸干，再加入200μL乙腈和水混合液（體積比88:12）溶解，置混勻器上混勻，2000r/m in離心10m in，保留上清液待測[5]。

2 結果

2.1 標準溶液的線性關系結果 通過檢測黃曲霉毒素標準溶液，分別建立黃曲霉毒素B1、B2、G1與G2的標準曲線（見表1）。可見，在各自的線性范圍中，黃曲霉毒素B1、B2、G1與G2的濃度c (μg/L)與峰面積A呈現良好的線性關系(r>0.999)。

表1 黃曲霉毒素標準溶液的線性關系結果

2.2 回收率和精密度 在食品樣品中分別加入1.0μg/L黃曲霉毒素B2與G2，5.0μg/L黃曲霉毒素B1與G1，加樣回收率結果表明：食品樣品的平均回收率為83.4%～107.5%。黃曲霉毒素B1、B2、G1與G2的相對標準偏差RSD為2.21%、2.79%、3.62%、2.57%(n=5)，這表明本檢測方法的精密度良好。

3 討論

UHPLC法與傳統的高效液相色譜技術相比，UHPLC在分析的靈敏度、速度與分離度等多方面有顯著的提升，目前已經逐步成為液相色譜技術發展的趨勢。本文建立的UHPLC法同時測定食品中黃曲霉毒素B1、B2、G1與G2的方法，檢驗的處理步驟簡便，線性范圍較廣，靈敏度較高，準確度和精密度良好，是實用的黃曲霉毒素檢測方法。黃曲霉毒素在光照下不穩定，標準品和樣品應置4℃冰箱保存，檢測時應注意避光。黃曲霉毒素具有劇毒和高致癌性，檢測人員在樣品處理和檢測過程中應避免皮膚與黃曲霉毒素直接接觸。檢驗使用結束的器皿、操作臺與相關物品應置次氯酸鈉溶液中進行浸泡消毒至少30m in，消毒后大量水反復洗滌。

[1] 高秀芬，計融，李燕俊，等.高效液相色譜法測定玉米中的黃曲霉毒素[J].中國食品衛生雜志，2007,19⑵:105-108.

[2] 柳潔，何碧英.高效液相色譜法測定食品中黃曲霉毒素的方法研究[J].現代預防醫學，2002,29⑵:891-896.

[3] 史瑩華，許梓榮，馮建蕾，等.高效液相色譜法測定動物組織樣品中黃曲霉毒素的殘留量[J].分析化學，2005,33⑹:850-852.

[4] 柳潔，何碧英，孫俊紅.糧油食品中黃曲霉毒素B1測定[J].中國公共衛生，2006,22⑴:122-123.

[5] 北京市質量技術監督局.食品中黃曲霉毒素的測定免疫親和層析凈化高效液相色譜法[S].GB/T 18979-2003.

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10.3969/j.issn.1009-4393.2012.26.115

362000 福建省泉州市疾病預防控制中心理化檢驗科 （歐陽燕玲 陳玲 曾志定）