血清中腫瘤相關(guān)鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白2抗體對乳腺癌診斷及預(yù)后的臨床價值

鄭專 董學(xué)君

血清中腫瘤相關(guān)鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白2抗體對乳腺癌診斷及預(yù)后的臨床價值

鄭專 董學(xué)君

目的探討乳腺癌患者血清中腫瘤相關(guān)鈣信號傳導(dǎo)蛋白2(TACSTD2)抗體表達水平及其在乳腺癌診斷及預(yù)后中的臨床應(yīng)用價值。方法用表達TACSTD2的噬菌體包被空白的微孔板，ELISA法分別檢測100例乳腺癌患者、60例乳腺良性增生患者及60名健康體檢者血清中TACSTD2抗體含量。結(jié)果與健康對照組相比，乳腺癌患者血清中TACSTD2抗體含量明顯升高，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．001);乳腺癌患者組血清中TACSTD2抗體含量亦明顯高于良性對照組(P＜0．001);但是已發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者與未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清中TACSTD2抗體含量相比較，無顯著性差異(P＞0．05)。結(jié)論血清TACSTD2抗體的表達與乳腺癌的發(fā)生密切相關(guān)，可作為乳腺癌診斷的腫瘤標志物。

TACSTD2乳腺癌腫瘤標志物

本文利用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測100例乳腺癌患者血清中TACSTD2抗體的含量，探討血清中TACSTD2抗體在乳腺癌的診斷及預(yù)后中的臨床應(yīng)用價值。

對象與方法

1．對象:經(jīng)病理和影像學(xué)確診的乳腺癌患者共100例，年齡35～70歲，其中無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移64例。病理確診為乳腺良性疾病患者60例，年齡26～58歲，其中乳腺纖維瘤31例，乳腺囊腫29例。以上研究對象均為紹興市人民醫(yī)院住院患者。對照組為60名健康體檢者，年齡20～65歲，無任何慢性疾病。

2．標本采集:均采空腹靜脈血5ml，4℃1800×g離心10min，收集血清并于－20℃保存待測。

3．TACSTD2抗體測定:將表達TACSTD2的T7噬菌體液1∶1000稀釋，并包被96孔酶標板，4℃冰箱內(nèi)過夜，次日每孔加200μl 5%牛血清白蛋白(BSA)/磷酸鹽緩沖液(PBS)室溫封閉2h;用TBS－T(50mmol/L Tris－HCl pH 7．5，0．15mol/L NaCl，0．1%吐溫20)洗5次，每次3min，加入1∶100稀釋的血清樣本100μl，室溫孵育1h;用TBS－T洗5次，加入1∶10000稀釋的HRP偶聯(lián)的山羊抗人IgG100μl，室溫放置1h;用TBS－T洗5次，加入顯色液A、B各1滴，于37℃孵育15min，立即加入終止液1滴;酶標儀450nm波長下檢測OD值。每孔反應(yīng)均重復(fù)3次，并設(shè)陰性對照和空白對照。按試劑說明書，Cutoff值=2．0×陰性對照平均OD值。

結(jié)果

1．TACSTD2抗體在乳腺癌、乳腺良性腫瘤患者及健康體檢女性血清中的表達:乳腺癌患者血清中TACSTD2抗體水平高于健康對照組及乳腺良性疾病組患者(P＜0．001);而乳腺良性疾病組與健康對照組之間無顯著性差異(P=0．274，表1)。

2．乳腺癌患者血清中TACSTD2抗體水平與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系:出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者與未出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的患者TACSTD2抗體水平無顯著性差異(P= 0．162，表2)。

表2 血清TACSTD2抗體表達與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

討論

大量研究結(jié)果顯示，人體內(nèi)的腫瘤能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，生成抗腫瘤相關(guān)抗原(TTA)的自身抗體，其在腫瘤抗原表達量很低的時候就能檢測出。ADMON A和SHOSHAN SH提出，這些自身抗體可直接作用于體內(nèi)細胞表面的受體，活化和刺激細胞生長的信號傳導(dǎo)通路，從而可能導(dǎo)致細胞無限制的增殖，甚至誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生［10］。這些異常的自身抗體有可能出現(xiàn)在腫瘤發(fā)生早期的某個階段，在上調(diào)促腫瘤受體的表達、增加腫瘤的惡性程度或者在導(dǎo)致腫瘤獲得潛在的轉(zhuǎn)移能力中起到關(guān)鍵性的作用，因此產(chǎn)生的自身抗體有可能作為腫瘤發(fā)生標志物。

本研究顯示乳腺癌患者血清中TACSTD2抗體整體水平顯著高于正常對照組及乳腺良性疾病組，而乳腺良性疾病組的TACSTD2抗體水平與正常對照組無顯著性差異，表明該指標可用于乳腺癌的輔助診斷。我們進一步研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者與未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清中TACSTD2抗體含量相比，無顯著性差異(P＞0．05)，說明該指標在監(jiān)測乳腺癌病情方面價值不大。

研究中我們還應(yīng)用了噬菌體展示技術(shù)，用噬菌體展示肽庫來源的模擬抗原替代TACSTD2，包被微孔板，用ELISA法檢測血清中的抗體［11］。其操作簡便，重復(fù)性好，檢測速度快，可以對乳腺癌進行早期診斷，有利于腫瘤的早期治療，提高患者的生存率。

總而言之，檢測乳腺癌患者血清中的TACSTD2抗體，為腫瘤的診斷與治療提供一個新的有效思路。

1Birkenkamp－Demtroder K，Olesen SH，Srensen FB，et al．Differential gene expression in colon cancer of the caecum versus the sigmoid and rectosigmoid［J］．Gut，2005，54:374－384

2Nakashima K，Shimada H，Ochiai T，et al．Serological identification of TROP2 by recombinant cDNA expression cloning using sera of patients with esophageal squamous cell carcinoma［J］．Int J Cancer，2004，112(6):1029－1035

3Santin AD，Zhan F，Bellone S，et al．Gene expression profiles in primary ovarian serous papillary tumors and normal ovarian epithelium:identification of candidate molecular markers for ovarian cancer diagnosis and therapy［J］．Int J Cancer，2004，112(1):14－25

4Iacobuzio－Donahue CA，Maitra A，Shen－Ong GL，et al．Discovery of novel tumor markers of pancreatic cancer using global gene expression technology［J］．Am J Pathol，2002，160(4):1239－1249

5Coldren CD，Helfrich BA，Witta SE，et al．Baseline gene expression predicts sensitivity to gefitinib in nonsmall cell lung cancer cell lines［J］．Mol Cancer Res，2006，4(8):521－528

6Mühlmann G，Spizzo G，Gostner J，et al．TROP2 expression as prognostic marker for gastric carcinoma［J］．Clin Pathol，2009，62:152－158

7Wang J，Day R，Dong Y，et al．Identification of Trop－2 as an oncogene and an attractive therapeutic target in colon cancers［J］．Mol Cancer Ther，2008，7(2):280－285

8Pau NIB，Zakaria Z，Muhammad R，et al．Gene expression patterns distinguish breast carcinomas from normal breast tissues:the malaysian context［J］．Pathol Res Pract，2010，206(4):223－228

9Tan EM，Zhang J．Autoantibodies to tumor associated antigens:reporters from the immune system［J］．Immunol Rev，2008，222(1):328－340

10Admon A，Shoshan SH．Antibodies as oncogenes:a hypothesis［J］．Med Hypotheses，2006，67(3):471－473

11董學(xué)君，李志國，楊明峰，等．乳腺癌新指標的篩選及其臨床價值驗證［J］．中華實驗外科雜志，2011，28(11):2005－2006

(收稿:2011－12－31)

(修回:2012－02－16)

Diagnostic Value of Antibody Against Tumor－associated Calcium Signal Transducer 2 in Patients with Breast Cancer．

Zheng Zhuan，Dong Xuejun．Molecular Medicine Center，Shaoxing People's Hospital，Zhejiang 312000，China

ObjectiveTo evaluate the application value of antibody against tumor－associated calcium signal transducer 2 (TACSTD2)in the treatment effect monitoring in breast cancer．MethodsAntibody against TACSTD2 was determined by ELISA in breast cancer patients(n=100)，benign breast disease patients(n=60)and health controls(n=60)．ResultsThe level of antibody against TACSTD2 was significantly higher in breast cancer patients than that in health controls and in benign breast disease patients(P＜0．001)．However，there was no statistically significant difference between antibody against TACSTD2 in the breast cancer patients who had axillary lymph node metastasis and that in the breast cancer patients who had no axillary lymph node metastasis(P＞0．05)．ConclusionAntibody against TACSTD2 is helpful in the diagnosis of breast cancer．

TACSTD2;Breast neoplasms;Tumor markers

乳腺癌是危害婦女健康的主要惡性腫瘤之一。近年來，乳腺癌發(fā)病率呈明顯上升趨勢，流行病學(xué)調(diào)查表明，女性25～35歲乳腺癌的發(fā)病率大幅增加，55～65歲為第2個發(fā)病高峰。在大中城市，乳腺癌已躍居女性惡性腫瘤的首位或第2位，成為“女性之?dāng)场薄z測乳腺癌血清標志物可以反映腫瘤的生物學(xué)特性，對輔助診斷、指導(dǎo)治療及判斷預(yù)后均有重要意義。腫瘤相關(guān)鈣信號傳導(dǎo)蛋白2(TACSTD2)在人類的角膜、胰腺、前列腺等器官中均有表達，并在正常的滋養(yǎng)層細胞、多層上皮細胞及上皮癌中高度表達［1～4］。TACSTD2參與多種細胞的增殖、凋亡相關(guān)基因和癌基因的轉(zhuǎn)錄。TACSTD2的表達與腫瘤侵襲及預(yù)后有關(guān)，已有研究報道，乳腺癌組織中TACSTD2的基因表達量遠遠高于正常乳腺組織，但是乳腺癌患者血清TACSTD2抗體含量是否高于正常人，TACSTD2抗體檢測能否作為檢測乳腺癌的標志物之一，還有待進一步研究［5～8］。

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科學(xué)研究基金資助項目(2009A208)

312000紹興市人民醫(yī)院分子醫(yī)學(xué)中心

董學(xué)君，電子信箱:dxj9666@163．com