幾種石斛粗提物抗氧化活性的對比研究

李嬋娟

（保山中醫藥高等專科學校，云南 保山 675000）

研究表明，氧化應激是許多疾病和損傷的病理基礎，也是加速機體衰老的重要原因[1]。特別在心腦血管疾病中，氧化損傷是心腦血管疾病發展的一個重要階段。石斛因其具有抗氧化、清除自由基等功效，長期以來一直用于心、腦血管疾病的防治以及抗衰老、抗腫瘤、治療白內障等。本實驗通過探討溴代苯致肝臟脂質過氧化小鼠的肝臟MDA含量改變，旨在對比研究幾種石斛粗提物的抗氧化作用及其機制，從而為開發利用這一類天然藥物提供參考。

1 實驗材料

1.1 樣品

1.1.1 受試物 鼓槌石斛SHch（Dendrobiumchrysotoxum），棕色浸膏，提取率為3.15%；金釵石斛SHn（D.nobile），棕色浸膏，提取率為5.42%；翅梗石斛SHtr（D.trigonopus），棕色浸膏，提取率為4.34%；長距石斛SHl（D.longicornum），棕色浸膏，提取率為4.16%；報春石斛SHp（D.primulinum），棕色浸膏，提取率為13.81%；球花石斛SHth（D.thysiflorum），棕色浸膏，提取率為11.80%；玫瑰石斛SHcr（D.crepidatum），棕色浸膏，提取率為121.11%；疊鞘石斛SHd（D.denneanum），棕色浸膏，提取率為13.24%；黑毛石斛SHw（D.williamsonii），棕色浸膏，提取率為11.39%；流蘇石斛SHf（D.fimbriatum），棕色浸膏，提取率為14.27%；由中科院昆明植物研究所提供。所有樣品均為60%乙醇提取物，易吸濕，常溫密閉保存。

1.1.2 對照藥品 維生素C片（國藥準字 H53021188）100 mg／片，昆明制藥集團股份有限公司出品，批號090908。

1.1.3 配制方法 各種石斛粗提物按提取率折算成6.0 g／kg的生藥劑量為實驗的給藥劑量，臨用前稱取適量樣品于乳缽中，用1%CMC－Na研磨后配制成相當于生藥0.30 g／m L濃度的混懸液供小鼠灌胃用；陽性對照維生素C片的配制方法同石斛粗提物。為保證受試物的穩定性，所有樣品均為臨用前新鮮配制。

1.2 動物 SPF級昆明種小鼠，全雄，體重18～24 g；購自于昆明醫學院實驗動物中心。合格證號：SCXK（滇）2005－0008

1.3 主要儀器 AL104電子分析天平（稱量試劑、藥品、臟器），梅特勒－托利多儀器（上海）有限公司；JJ2000型電子天平（稱量動物體重），常熟雙杰測試儀器廠；F5810－R型臺式高速冷凍離心機，德國Eppendorf；Thermo1500型酶標儀，芬蘭雷勃；Millipore超純水處理系統，美國 Millipore公司；BCD－225E冰箱，青島海爾冰箱廠；HS－1恒溫水浴箱，江蘇金壇。

1.4 主要試劑 氯化鈉注射液，國藥準字 H53020469，500 mL／瓶，昆明南疆制藥有限公司，批號A091011e1；溴代苯，分析純，中國青浦合成試劑廠出品，批號20000405；橄攬油，化學純，中國醫藥集團上海化學試劑公司出品，批號20090801；丙二醛測定試劑盒（MDA，硫代巴比妥酸法），南京建城生物工程研究所出品，批號20091107。

1.5 統計學處理 實驗結果以均值±標準差（±s）表示，用DAS ver1.0統計軟件進行數據處理。方差齊用t檢驗，方差不齊用t’檢驗；偏態分布資料用秩和檢驗；計數資料用χ2檢驗。

2 方法與結果

選18～22 g雄性昆明種小鼠130只，按體重隨機分為13組：空白對照組；模型對照組；陽性對照維生素C片200 mg／kg組；10種石斛樣品粗提物6.0 g／kg組；每組10只。各組動物每日分別按劑量灌胃給藥1次，連續灌胃3d，空白對照組灌服等容量1%CMC－Na 20 mL／kg.bw。末次給藥后30 min，除空白對照組外，其余各組均以10 m L／kg.bw的劑量灌胃給予0.3 mol／L的溴代苯橄欖油溶液，間隔4h再加強給藥1次。造模20 h后脫臼處死小鼠，摘取肝臟用PH7.4的Tris－HCl緩沖溶液清洗后，稱取200 mg同部位肝組織，加生理鹽水制成10%肝勻漿，以3000轉／min離心10 min，取上清液按試劑盒方法測定 MDA（肝臟丙二醛）含量[2]。結果見表1。

表1 石斛樣品粗提物對小鼠體內抗氧化作用的影響

由表1可知，模型組小鼠肝組織中MDA含量明顯高于空白對照組，表明溴代苯誘發小鼠肝臟脂質過氧化模型成功；陽性對照維生素C片、鼓槌石斛、金釵石斛及報春石斛組，對溴代苯誘發的小鼠肝損傷有不同程度的保護作用，可使肝組織中的MDA含量明顯下降，表明抗氧化作用顯著；除玫瑰石斛外，其余各組僅有一定作用趨勢。

3 討論

脂質過氧化是一典型的自由基鏈式反應，是自由基攻擊細胞膜上的多聚不飽和脂肪酸而引發的一系列鏈式反應，產生大量脂肪質過氧化物及許多中間產物，如丙二醛等，可導致人體細胞氧化損害、老化、致癌和動脈硬化等許多疾病。通過食用具有抗氧化能力的食物或藥物，可防止多種疾病發生。食物的抗氧化能力可通過體外和體內抗氧化實驗進行評價[3]。

生物體系（如肝細胞等）脂質過氧化反應的最終產物有丙二醛，測定丙二醛的含量，在一定程度上可以反映脂質過氧化損傷的程度，是目前公認的反映脂質過氧化的指標[4]。溴代苯是一種有毒的氧化劑，在體內對肝臟有很強的親和力，能造成動物細胞脂質過氧化性損傷[5]。本文采用溴代苯致小鼠實驗性肝損傷模型，測定肝組織勻漿MDA含量。本實驗中給予小鼠溴代苯油20h后，小鼠肝臟代償性增大、壞死，溴代苯可使模型組小鼠肝勻漿MDA含量明顯增加，表明溴代苯引起肝損傷的機制與脂質過氧化有關。本結果顯示，鼓槌石斛、金釵石斛及報春石斛組能顯著降低肝勻漿丙二醛含量，說明以上這三種石斛具有抗脂質過氧化能力。翅梗石斛、長距石斛、球花石斛、疊鞘石斛、黑毛石斛、流蘇石斛僅有一定作用趨勢，與損傷模型組差異無統計學意義。本次實驗因樣品量僅夠用藥3 d，而以往實驗的連續用藥時間多在7 d以上，是否存在給藥時間太短而影響結果的判斷？有待于進一步的研究。

[1]Szweda PA，Friguet B，Szweda L I.Proteolysis free radicals and aging[J].Free Radic Biol Med，2002，33（1）：29.

[2]張均田.現代藥理實驗方法學[M].北京：中國協和醫科大學聯合出版社，1998：1232.

[3]宋懷恩，聞韌.抗氧化篩選方法的研究進展[J].中國藥物化學雜志，2003，13（2）：119～123.

[4]劉方，武子斌，牛淑敏，等.中藥材抗氧化及自由基清除活性的研究[J].中國藥學雜志，2001，36（7）：442～445.

[5]吳植強，周智，韋奇質.水羅傘提取物對溴代苯小鼠肝損傷的保護作用和抗氧化作用[J].中國藥理學通報，2004，20（11）：1221～1223.