復方紅花微乳處方藥物配比的篩選研究

馮文全，季新燕，王 艷，王穎莉，劉亞明

（山西中醫學院，山西太原030024）

復方紅花微乳處方藥物配比的篩選研究

馮文全，季新燕，王 艷，王穎莉，劉亞明

（山西中醫學院，山西太原030024）

目的：將紅花和利多卡因按不同比例制備成6種微乳劑，對其鎮痛、活血化瘀作用藥效進行實驗研究，以篩選最優處方。方法：觀察6個處方對醋酸致小鼠扭體反應以及對小鼠出凝血時間的影響。結果：處方6的鎮痛作用較其他處方顯著，差異有統計學意義（P＜0.01）。結論：復方紅花微乳處方最佳配比的探索研究，對于進一步將之開發為一種應用于臨床的活血化瘀經皮給藥制劑具有重要的意義。

紅花；利多卡因；微乳

紅花具有通經活血、祛瘀止痛的功效，可以改進局部組織的微循環，促進新陳代謝，治療皮下充血腫脹。利多卡因屬酰胺類局麻藥，具有藥效強，局麻作用維持時間長的特點，國內劑型以注射劑和膠漿劑為主。為增加藥物的溶解度，提高載藥量，促進藥物的透皮吸收，研制了紅花利多卡因復方微乳。該微乳兼顧兩者的主要功效，同時具有抗炎、活血、鎮痛等作用。本實驗將紅花和利多卡因按不同比例制備成微乳劑，對其鎮痛、活血化瘀作用藥效進行實驗研究，以篩選最優處方。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 昆明種小鼠，體重（20±2）g，雌雄各半，由山西醫科大學實驗動物中心提供，許可證號SCXK（晉）2011-0007。

1.1.2 實驗藥品 紅花提取物（山西華衛藥業有限公司提供，批號：091009，產地：山西）；利多卡因（太原瑞和豐科貿有限公司）；冰醋酸（廣東汕頭西隴化工廠，分析純）。

1.1.3 實驗儀器 大功率磁力攪拌器（常州國華電器有限公司）；電熱恒溫鼓風干燥箱（上海躍進醫療器械有限公司）；LD5-10低速離心機（北京醫用離心機廠）；SB25-120型超聲波清洗器（寧波新芝生物科技股份有限公司）；微量移液器（上海求精生化試劑儀器有限公司）；微量滴定管等。

1.2 實驗方法

1.2.1 擬篩選的微乳處方 實驗采用均勻設計法設計微乳處方，以微乳中紅花提取物和利多卡因在微乳中所占的百分比濃度為因素，考察這2個因素在6個不同濃度水平的藥效學效果。設計2因素6水平U6（62）均勻設計表，如表1所示。

表1 微乳處方均勻設計表

根據藥效實驗結果篩選不同配比微乳處方，選擇鎮痛實驗中的醋酸致小鼠扭體反應實驗，活血化瘀實驗中的凝血時間和出血時間3個指標進行評價。

1.2.2 空白微乳及含藥微乳的制備 通過繪制偽三元相圖和體外透皮實驗，將油相與混合表面活性劑，用雙蒸水滴定，室溫攪拌，至形成澄清、透明的液液混合體系，用染色法、稀釋法和電導率鑒別微乳類型。在偽三元相圖O/W區域中選擇適當比例的各相，攪拌下用雙蒸水滴定，室溫下靜置，得空白微乳。

將紅花提取物和利多卡因按表1所示水平，分別溶于空白微乳中，攪拌混合均勻，室溫下靜置，制備1～6號待測樣品，外觀澄清透明。在3 000 r/min下離心1 h，不分層、不渾濁即得供試載藥微乳。

1.2.3 藥效實驗

1.2.3.1 分組及實驗前準備 取昆明小鼠84只，雌雄各半，隨機平均分為7組。各組小鼠用8%硫化鈉腹部去毛，去毛面積不小于1.5 cm2×1.5 cm2。在去毛處，小鼠腹部涂抹藥物50 μL，每天2次（給藥劑量按照低于半數致死量作為外用給藥劑量，通過體表面積法折算成小鼠的給藥量）。

1.2.3.2 微乳對抑制醋酸致小鼠扭體反應的影響小鼠腹部經皮給藥，給藥劑量5 mg/（kg·d），連續給藥7 d，用移液器精確給藥。末次給藥15 min后腹腔注射0.6%冰醋酸0.1 mL/10 g。記錄注射后10 min內各組小鼠的扭體次數，計算鎮痛抑制率［1］。

1.2.3.3 微乳對小鼠凝血時間的影響 采用玻片法，給藥劑量5 mg/（kg·d），連續給藥7 d，用移液器精確給藥。末次給藥30 min后，眼眶靜脈叢取血，將血滴在干凈的載玻片上2滴，同時用秒表計時，每隔15 s用潔凈的針頭挑1次（沿血滴邊緣某一固定部位，直挑到血滴中心）直至挑出絲狀物為止，并記錄時間［2］，即為全血凝固時間。另一滴血做復驗。

1.2.3.4 微乳對小鼠出血時間的影響 采用斷尾法，給藥劑量5 mg/（kg·d），連續給藥7 d，用移液器精確給藥。在末次給藥30 min后，小鼠置于小鼠固定器中，以毫米尺測量小鼠尾部并標記，用手術剪在距尾尖2 cm處剪斷，待血液自行流出時計時，每隔15 s用濾紙吸去尾尖血滴，直至血液自然停止流出（用濾紙吸時無血跡）時為出血時間［3］。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 微乳對醋酸致小鼠扭體反應的影響

結果見表2。

表2 微乳對醋酸致小鼠扭體反應的影響 （±s）

表2 微乳對醋酸致小鼠扭體反應的影響 （±s）

注：與空白對照組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01

組別 n空白對照組 12 1號處方 12 2號處方 12 3號處方 12 4號處方 12 5號處方 12 6號處方 12劑量（mL/kg） 扭體反應 抑制率（%）- 29.1±9.7 -5.0 19.6±7.5 32.65 5.0 18.1±8.51） 37.75 5.0 23.7±5.1 18.63 5.0 17.6±13.11） 39.71 5.0 21.7±8.3 25.49 5.0 11.3±5.62） 61.27

如表2所示，與空白對照組比較，1～6號處方都能抑制醋酸所致小鼠腹部疼痛，減少扭體反應發生。與空白對照組比較，2號、4號、6號處方扭體反應次數降低，差異有統計學意義（P＜0.05，P＜0.01）。扭體實驗中6號處方效果優于其他各組。

2.2 微乳對小鼠凝血時間的影響

結果見表3。

表3 微乳對小鼠凝血時間的影響 （±s）

表3 微乳對小鼠凝血時間的影響 （±s）

注：與空白對照組比較，1）P＜0.05

組別 n空白對照組 12 1號處方 12 2號處方 12 3號處方 12 4號處方 12 5號處方 12 6號處方 12劑量（mL/kg） 凝血時間（min）-7.8±1.6 5.0 11.9±4.21）5.0 10.9±4.91）5.0 8.7±3.3 5.0 8.6±3.5 5.0 8.8±2.8 5.0 12.1±4.61）

如表3所示，與空白對照組比較，1～6號處方都能延長小鼠全血凝血時間。與空白對照組比較，1、2和6號處方凝血時間延長，差異具有統計學意義（P＜0.05）。

2.3 微乳對小鼠出血時間的影響

結果見表4。如表4所示，與空白對照組比較，1～6號處方都可以延長小鼠出血時間的作用，而6號處方可顯著延長小鼠出血時間，差異有統計學意義（P＜0.01）。提示紅花利多卡因微乳具有抑制小鼠血小板和毛細血管功能。

表4 微乳對小鼠出血時間的影響 （±s）

表4 微乳對小鼠出血時間的影響 （±s）

注：與空白對照組比較，1）P＜0.01

組別 n空白對照組 12 1號處方 12 2號處方 12 3號處方 12 4號處方 12 5號處方 12 6號處方 12劑量（mL/kg） 出血時間（min）-21.9±5.7 5.0 23.3±4.4 5.0 21.5±5.5 5.0 21.8±10.1 5.0 25.5±9.3 5.0 22.1±6.3 5.0 32.1±7.81）

3 討 論

中藥紅花具有活血祛瘀、通經止痛的作用，有臨床報道外用紅花治療血脈不暢、血滯血瘀導致的褥瘡等療效顯著［4］。還有人用2%鹽酸利多卡因和75%乙醇紅花提取液制得利多卡因紅花醇液，用于減輕靜脈穿刺帶給病人都痛苦，取得了顯著的效果［5］。紅花具有活血化瘀作用，利多卡因作為局部麻醉藥，具有較好的穿透力。本實驗將紅花提取物和利多卡因組方，按照不同的比例進行配比，制備微乳制劑對其藥效進行考察。實驗結果表明，從鎮痛作用、凝血時間和出血時間均表現出第6組較其他組及空白對照組作用顯著。

目前，關于微乳制備的文獻已經有很多，但是直接聯系臨床開發中西藥結合微乳制備的較少［6］，如王棋文等［7］制備的炎毒熱清（AEE）微乳是將阿司匹林和丁香酚組方的微乳制劑。本研究將紅花提取物和利多卡因組方，并進行了微乳處方最佳配比的摸索，對于進一步開發一種應用于臨床的活血化瘀經皮給藥制劑具有重要的意義。

［1］曹斌，劉元，宋志釗，等.消腫止痛酊的藥效學研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2009，15（9）：83-85.

［2］李儀奎.中藥藥理實驗方法學［M］.上海：上?？萍汲霭嫔纾?006：684-687.

［3］侯小濤，慕麗群，周江煜，等.伊血安顆粒的主要藥效學實驗研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2010，16（1）：109-112.

［4］金銀芝.紅花酒精制備及藥效分析［J］.時珍國醫國藥，1999，8（1）：22.

［5］韋玉芳，謝紅，盧泳棠，等.利多卡因紅花醇液外涂減輕病人靜脈穿刺疼痛的臨床研究［J］.中醫藥臨床雜志，2006，18（4）：399-400.

［6］任玉壽，劉曉明，劉必旺，等.決明子微乳膠囊治療脂肪肝的臨床觀察研究［J］.山西中醫學院學報，2011，12（6）：31-32.

［7］王棋文.炎毒熱清毒理學及藥效學初步評價［D］.蘭州：甘肅農業大學，2009：6.

Screening on Medicine Ratio of Safflower Microemulsion Prescription

Feng Wenquan，Ji Xinyan，Wang Yan，Wang Yingli，Liu Yaming
（Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

Objective：Six kinds of microemulsion were prepared according to different proportion of safflower and lidocaine.Then optimum prescription was screened out according to analgesic effect and stasis-eliminating effect of prescription.Methods：Effects of 6 kinds of microemulsion on acetic acid-induced writhing response of mice as well as bleeding time and clotting time of mice were observed.Results：Analgesic effect of the sixth prescription was better than that of other prescriptions（P＜0.01）.Conclusion：Exploration on optimal matching of safflower-lidocaine was conducted in this experiment，and it provides value to develop transdermal drug delivery preparations of promoting blood circulation and removing blood stasis.

safflower；lidocaine；microemulsion

R285

A

1671-0258（2012）04-0021-03

太原市科技平臺建設項目（2012-3-PT-F-125）；山西省科技攻關項目（2011091014）；山西中醫學院校級課題（2011JC007）

馮文全，男，碩士研究生，從事方藥配伍研究

劉亞明，男，教授，博士生導師，E-mail：liuyaming66@yahoo.com.cn

2012-04-11