山西不同產地野生酸棗葉總黃酮的含量測定

白 莉，杜晨暉，閆 艷，張朔生，孟 欣，張 峰

（山西中醫學院，山西太原030024）

山西不同產地野生酸棗葉總黃酮的含量測定

白 莉，杜晨暉，閆 艷，張朔生，孟 欣，張 峰

（山西中醫學院，山西太原030024）

目的：測定山西不同產地野生酸棗葉中總黃酮的含量，為酸棗葉資源的開發利用提供科學依據。方法：采用紫外可見分光光度法在波長510 nm處測定山西省9個不同產地的酸棗葉樣品中總黃酮的含量。結果：山西介休產的酸棗葉中總黃酮含量最高，其次為陽泉、五臺、太谷等。結論：不同產地酸棗葉中總黃酮含量存在一定差異，應注意生長環境對藥材質量的影響。

山西；酸棗葉；總黃酮；含量測定

酸棗葉為鼠李科植物酸棗［Ziziphus jujuba Mil1.var.spinosa（Bunge）Huex H.F.Chou］的葉子。民間廣泛將其加工成茶葉，具有利尿、促進膽酸合成、消炎等多種保健功能［1-2］。據報道，酸棗葉提取物有明顯的鎮靜、安神作用［3］，蘆丁等黃酮類成分是其主要化學成分［4-5］。

本課題組前期研究表明，山西省不同產地酸棗葉中蘆丁的含量均隨季節的變化而基本呈U字形趨勢，其中以5月份含量最高［6-7］。為了進一步研究酸棗葉中蘆丁與總黃酮含量關系，本文采用紫外分光光度法測定酸棗葉中總黃酮的含量，考察山西九個不同產地5月份的酸棗葉中總黃酮的含量。本實驗為酸棗葉的質量評價提供一定的研究基礎，并為酸棗葉的深入開發提供科學依據。

1 實驗材料

1.1 實驗儀器

數顯恒溫水浴鍋（菏澤市石油化工學儀器設備廠，型號：HH-S2S）；十萬分之一電子天平（梅特勒公司）；紫外可見分光光度計（北京瑞利分析儀器公司，UV-1600）。

1.2 實驗藥品

蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：0080-9705）；試劑均為分析純。酸棗葉樣品均采自山西省各地區（每個產地采樣不少于1 kg），經中藥鑒定教研室裴香萍副教授鑒定為鼠李科植物酸棗［Ziziphus jujuba Mil1.Var.Spinosa（Bunge）Huex H.F.Chou］的葉子。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取蘆丁對照品適量，置于5 mL的容量瓶中加70%的乙醇溶液定容至刻度，搖勻，得濃度為2 mg/mL的蘆丁對照品儲備液。

2.2 供試品溶液的制備

取酸棗葉粉末約0.2 g，精密稱定，置錐形瓶中，加入70%乙醇100 mL，加熱回流提取2 h，過濾，濾液蒸干，加70%的乙醇定容至10 mL，搖勻，得供試品溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 波長選擇 精密吸取對照品溶液0.5 mL置比色管中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，放置6 min；加10%硝酸鋁溶液0.3 mL，搖勻，再放置5 min；加4%氫氧化鈉溶液4 mL；加70%乙醇定容至10 mL，放置15 min，在400 nm～800 nm波長處掃描，對照品在510 nm處有最大吸收。

2.3.2 線性關系考察 分別精密量取0.15 mL、0.2 mL、0.25 mL、0.3 mL、0.35 mL 的 2 mg/mL 的蘆丁對照品溶液置于10 mL具塞試管中，先加5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL搖勻，放置6 min；加10%硝酸鋁溶液0.3 mL，搖勻，再放置5 min；加4%氫氧化鈉溶液4 mL；各加70%乙醇定容至10 mL，放置15 min，在波長510 nm處測定各試管中溶液的吸光度。以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為Y=10.865X-0.016 5，r=0.999 4。結果表明蘆丁在0.03 mg/mL～0.07 mg/mL范圍內呈良好的線性關系。

2.3.3 精密度試驗 精密量取同一濃度的蘆丁標準品（2 mg/mL）溶液 0.25 mL，平行 5份，分別置于具塞刻度試管中。按“2.3.2”項下的方法進行測定，記錄吸光度值，并計算其RSD（n=5）值為2.83%。表明儀器精密度好。

2.3.4 穩定性試驗 取同一供試品溶液（聞喜5月產），按“2.3.2”項下的方法分別在 0 min、20 min、40 min、60 min、80 min 進行測定，記錄吸光度值，計算RSD為2.77%。表明供試品溶液在顯色80 min內穩定性較好。

2.3.5 重復性試驗 取同一樣品（聞喜5月產）平行6份，精密稱定，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.3.2”項下的方法進行測定，記錄吸光度值，平均含量為43.62 mg/g，計算含量的RSD值為2.69%。表明本實驗方法重復性好。

2.3.6 加樣回收率試驗 取已知總黃酮含量的同批樣品（聞喜5月產）6份，每份0.1 g，精密稱定，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.3.2”項下的方法進行測定，記錄吸光度值，計算含量的RSD值為2.30%，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果

2.4 樣品測定

取不同產地5月份采收時期的樣品，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，“2.3.2”按項下的方法進行測定，記錄吸光度值，外標兩點法計算樣品中總黃酮的濃度并計算其含量。測定結果見圖1。

圖1 不同產地野生酸棗葉總黃酮含量

3 討論

3.1 提取溶劑的選擇

實驗曾對甲醇、70%乙醇、乙醇等不同溶劑提取效率進行了考察。研究表明以70%乙醇提取的黃酮含量最高，且葉綠素較少，避免了對后續測定工作的影響，故選用70%乙醇為提取試劑。

3.2 提取方法的選擇

實驗采用了超聲、滲漉、回流提取3種方法。結果表明，超聲提取的含量比回流和滲漉的低，滲漉提取葉綠素較多，故選擇回流提取作為提取方法。

3.3 樣品含量測定

由圖2可以看出，山西不同產地酸棗葉中總黃酮含量以介休市的最高，這與酸棗葉中蘆丁的含量測定結果一致［6］。從整體上看，山西晉中地區酸棗葉中總黃酮的含量較高，而晉南和晉東南地區酸棗葉中總黃酮的含量相對較低，造成這些差異的原因可能是海拔高度、氣候等多方面因素所致。

通過本實驗測定不同產地總黃酮含量與前期測定的蘆丁含量進行對比分析，研究表明晉中、晉南和晉東南地區酸棗葉總黃酮的含量與蘆丁含量基本成正相關。因此，可以選擇蘆丁和總黃酮的含量兩個指標作為酸棗葉質量控制指標。本實驗結果顯示，不同產地酸棗葉中總黃酮含量有差異，提示應注意生長環境對中藥材質量的影響。

［1］吳樹勛，張建新，徐濤，等.酸棗（仁、葉、肉）與酸棗皂苷A對中樞神經系統作用的實驗研究［J］.中國中藥雜志，1993，18（11）：685-687.

［2］王身艷，劉清飛，秦明珠.酸棗仁、葉、肉、根的研究進展［J］.中成藥，2000，22（11）：794-796.

［3］趙新華，伊麗楠.酸棗葉提取物對中樞神經系統作用的實驗研究［J］.時珍國醫國藥，2009，20（2）：463-464.

［4］劉壽山.重要研究文獻摘要（第2卷）［M］.北京：科學出版社，1986：817.

［5］李蘭芳，趙淑云.不同生長期酸棗葉中總黃酮和蘆丁的含量測定［J］.中國中藥雜志，1992，17（2）：81-82.

［6］張東坡，劉必旺，趙換，等.加味酸棗仁湯對肝郁小鼠的鎮靜催眠作用［J］.山西中醫學院學報，2008，9（16）：15-17.

［7］裴香萍，杜晨暉，閆艷，等.HPLC-UV測定不同產地及不同采收期酸棗葉中蘆丁的含量［J］.中國實驗方劑學雜志，2011，17（21）：65-67.

Determination of Total Flavoids in Leaves of Ziziphus Jujuba Gathered From Different Areas in Shanxi Province

Bai Li，Du Chenhui，Yan Yan，Zhang Shuosheng，Meng Xin，Zhang Feng
（Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

Objective：To compare the content of total flavoids in leaves of Ziziphus Jujuba gathered from different areas of Shanxi province.Method：The content of total flavonoids in leaves of Ziziphus Jujuba was determined by UV spectrophtomotry at the wavelength of 510 nm.Results：Content of total flavoids was highest in leaves of Ziziphus Jujube from Jiexiu，followed by those from Yangquan，Wutai，Taigu，etc.Conclusion：The content of total flaviods in leaves of Ziziphus Jujube from various areas is different，and attention should be paid to effects of environment on herbs.

Shanxi；the leaves of Ziziphus Jujuba；total flavonoids；determination of content

R285.5

A

1671-0258（2012）04-0032-03

山西省衛生廳科技攻關青年項目（20100124）；山西省普通高等本科學校大學生創新性實驗項目（2011）

白莉，女，碩士，從事中藥炮制及中藥新藥研究

張朔生，男，教授，碩士生導師，從事中藥炮制及中藥新藥的研究

2012-04-13