苯并噻二唑對漂浮育苗煙草白粉病的誘導抗性及其對煙苗安全性研究

汪漢成， 楊雙劍， 許冬青， 陳興江， 胡向丹， 商勝華， 石俊雄＊

（1.貴州省煙草科學研究所，貴陽 550081；2.中國農業大學農學與生物技術學院，北京 100193；3.貴州省煙草公司，貴陽 550001；4.黔西南州煙草公司技術中心，興義 562400）

由煙草白粉病菌（Erysiphe cichoracearum DC.）引起的煙草白粉病（tobacco white powder）是煙草生產上危害性很強的氣傳真菌性病害［1］，其寄主范圍廣，危害性強。它主要發生在南非、歐洲東部、中東地區和亞洲等煙草種植區，在中國以華南、西南和華中煙區最為普遍，發病株率可達100%，發病葉率一般在10%～20%，嚴重的可達80%以上［2］。隨著我國煙草集約化育苗的發展，煙草白粉病在我國西南局部煙區的危害越發嚴重，造成煙苗素質下降并嚴重影響了煙苗的適時移栽，給煙農造成嚴重的經濟損失。

煙草白粉病的防治主要是利用抗病品種和化學藥劑；然而，兼具優良品質和煙草白粉病抗性的品種并不多見，而化學藥劑防治不但嚴重影響煙草的安全性，而且還會帶來抗藥性、環境污染等方面的問題。利用植物的誘導抗性來防治植物病害是近年來非常熱門的研究領域。苯并噻二唑（benzothiadiazole）是先正達公司開發的一種植物抗病誘導劑，已有報道其對馬鈴薯、番茄、大豆、煙草等作物的多種病害都有較好的誘抗效果［3－5］，但能否誘導煙草幼苗對煙草白粉病產生抗性則鮮有報道。為了評價其防治煙草白粉病的可行性，筆者就苯并噻二唑對漂浮育苗煙草白粉病的誘導抗性及其對煙苗的安全性進行了初步研究，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

從煙草漂浮育苗溫室大棚內采集煙草白粉病標本，用毛刷將單個病斑的分生孢子刷入4℃冷水中，轉接于離體無病煙草葉片正面。在培養皿中墊濕潤濾紙，于25℃，12h光照（10 000lx），12h黑暗交替條件下培養，每隔9d在新鮮離體煙草葉片正面轉代培養1次。為了得到大量新鮮分生孢子供活體接種使用，采用手動噴霧器將分生孢子懸浮液均勻地噴霧在隔離培養的煙草葉片正面，培養9d后，待葉片正面產生密集、菌齡基本一致的煙草白粉病菌分生孢子，備用。本試驗采用同一株煙草白粉病菌。

1.2 供試藥劑

98%苯并噻二唑原藥，安徽合肥麗巴奧物理化學科技有限公司生產。將其用甲醇（分析純）配成1×103μg／mL的母液，4℃低溫保存，待用?；铙w試驗時用含0.01%吐溫80的蒸餾水稀釋母液。50%苯并噻二唑水分散粒劑，先正達（中國）投資有限公司生產；10%苯醚甲環唑水分散粒劑，先正達（中國）投資有限公司生產。

1.3 苯并噻二唑對煙草白粉病的誘導抗性

采用小苗法測定。將煙草（品種：‘K326’）種植于裝有草炭和蛭石（質量比為4∶1）的烤煙育苗專用苗盤（160孔／盤）中，每穴種植1株，待煙苗長至40d苗齡時備用。將苯并噻二唑母液稀釋成如下系列濃度：0、0.98、1.95、3.90、7.80、15.60、31.25μg／mL。利用小型手動噴霧器，將藥液均勻噴霧處理煙草葉片的正面，直至有藥液開始流失為止，每個濃度處理30株煙草苗。24h后噴霧接種煙草白粉病菌分生孢子懸浮液（分生孢子濃度2×105個／mL），自然風干后將漂盤置于溫室內苗床上，于15～28℃、自然光照和濕度條件下培養。9d后調查病情［6］，計算各處理的病情指數和藥劑的相對防效。根據系列藥劑濃度的對數值和防效幾率值之間的線性回歸關系，求出苯并噻二唑對煙草白粉病菌的EC50、EC90和相關系數R。

1.4 苯并噻二唑在烤煙漂浮育苗上的持效期測定

試驗設50% 苯并噻二唑水分散粒劑用量為11.50、23、46g／hm2，對照藥劑10%苯醚甲環唑水分散粒劑45g／hm2和清水對照共5個處理，每處理處理1漂盤煙苗（30株），在煙苗（品種：‘K326’）4葉期第1次用藥，一周后第2次用藥，使用小型手動噴霧器按藥液量750kg／hm2常規噴霧。噴藥后的煙苗放置于有白粉病煙苗的溫室內，自然條件下培養（15～28℃，40%～70%RH，自然光照），按照漂浮育苗規程進行剪葉和養分管理。分別于第2次用藥后10、20、30d，每苗盤五點取樣隨機調查10株煙苗，參照煙草白粉病藥效試驗準則［6］的分級標準調查，計算病情指數和防效。同時，注意觀察新長出煙葉的發病情況和發病時間，分析藥劑的持效期。

1.5 苯并噻二唑對漂浮育苗烤煙安全性測定

試驗設50% 苯并噻二唑水分散粒劑用量為11.90、23.80、47.50、95、190、380g／hm2，和清水對照共7個處理，每處理處理30株漂盤煙苗（品種：‘K326’）。煙苗4葉期時，采用小型手動噴霧器按藥液量750kg／hm2常規噴霧，直至流失。藥后煙苗按照常規育苗方式管理，各處理分別于藥后5、10、20、30d五點取樣隨機調查10株煙苗，觀察藥劑對煙苗的危害情況；并于藥后30d五點取樣，稱量和記錄10株煙苗的鮮重、莖圍和根長值。

2 結果與分析

2.1 苯并噻二唑對煙草白粉病菌的誘導抗性

煙草小苗法測定結果（表1）表明，苯并噻二唑對煙草白粉病菌具有很強的誘導抗性，其毒力回歸方程為y＝2.551 5x＋3.677 1，EC50、EC90值分別為3.30μg／mL 和 10.49μg／mL，相 關 系 數 R 為0.989 5。隨著藥劑濃度的增加，煙苗獲得的抗性逐漸加強，31.25μg／mL苯并噻二唑處理的煙苗能夠完全抵御煙草白粉病菌的侵染。

2.2 苯并噻二唑在漂浮育苗烤煙上的持效期

持效期試驗結果如表2所示，漂浮育苗在溫室自然發病情況下，藥后10d，空白對照已經發病，苯并噻二唑所有處理均未發??；20d后，50% 苯并噻二唑水分散粒劑11.50g／hm2處理的煙苗才開始發??；30d后，50% 苯并噻二唑水分散粒劑23g／hm2和46g／hm2處理的防效仍然達到100%，顯著優于45g／hm2苯醚甲環唑的處理（93.99%）。這表明苯并噻二唑在漂浮育苗煙苗上有30d以上的持效期。此外，50% 苯并噻二唑水分散粒劑11.50、23g／hm2和46g／hm2噴霧處理4葉期的煙苗，均會誘導煙苗新生葉片對煙草白粉病菌的抗性。

表2 50%苯并噻二唑水分散粒劑防治煙草白粉病的持效期1）

2.3 苯并噻二唑對漂浮育苗烤煙的安全性

安全性試驗結果如圖1所示，50%苯并噻二唑水分散粒劑95、190、380g／hm2噴霧處理4葉期煙苗會產生嚴重的藥害，癥狀主要表現為：葉片變黃，葉緣枯死，煙苗矮化、發育遲緩。隨著藥劑濃度的增加，藥害程度逐漸加重。藥后30d煙苗的農藝性狀如圖2、3所示，50%苯并噻二唑水分散粒劑0、95、190g／hm2和380g／hm2處理煙苗的平均鮮重分別為15.98、8.49、5.36g／株和4.56g／株，莖圍分別為1.83、1.57、1.44cm 和1.07cm，隨著苯并噻二唑藥劑濃度的增加，煙苗的鮮重和莖圍均逐漸降低，各處理間存在顯著差異；在漂浮育苗情況下，苯并噻二唑不同濃度噴霧處理在煙苗根長上不存在差異。

圖3 50%苯并噻二唑水分散粒劑不同濃度處理對煙苗農藝性狀的影響

3 討論與結論

已有的研究表明，苯并噻二唑25μg／mL處理離體煙草能夠誘導煙草抵抗青枯病，150μg／mL的處理會對煙苗造成藥害［7］；同時發現該藥劑150μg／mL噴霧處理十字期煙苗，可以推遲盆栽煙草普通花葉病的顯癥發生，并減輕病害程度［8］；Cole研究表明苯并噻二唑有效劑量0.05～0.1g／m2噴霧處理煙苗可以減輕煙草火疫病（Pseudomonas syringae Van hall）的危害，也可以誘導煙草對葉斑?。跿hanatephorus cucumeris（Frank）Donk］和蛙眼病（Cercospora nicotianae Ell.et Ev.）產生抗性，同時也發現輕微藥害現象［9］；Nischwitz和 Mandal等研究發現苯并噻二唑可以誘導烤煙對番茄斑萎病毒的抗性［10－11］。本研究進一步證實了苯并噻二唑能夠誘導煙苗產生抗性，并補充了其防治煙草白粉病的生物活性，研究結論同以上報道類似。然而，其能否在大田自然條件下誘發煙草產生系統抗性以及這種系統抗性在田間預防白粉病的效果還有待進一步研究。除煙草之外，苯并噻二唑還可誘發擬南芥、黃瓜、番茄、棉花、玉米、大麥、水稻等多種雙子葉和單子葉植物產生對真菌、細菌和病毒病害的系統抗性，且對植物本身毒性較低，因而已經作為一種農藥產品（商品名為Bion）投放市場已有多年［12－15］。

本研究采用煙草漂浮育苗的試驗表明，苯并噻二唑噴霧處理4葉期煙苗可以誘導煙苗對煙草白粉病菌產生抗性，且具有30d以上的持效期，它具有同10%苯醚甲環唑水分散粒劑45g／hm2處理同樣優秀的防治效果；苯并噻二唑可以很好地被煙草葉片吸收，輸送到煙草生長點和新生煙草葉片內，這進一步證實了該藥劑對植物的系統誘導活性［16－17］；在本試驗劑量范圍內，50%苯并噻二唑水分散粒劑在＞95g／hm2使用劑量下會對煙苗產生藥害，影響煙苗發育，因此，苯并噻二唑在烤煙漂浮育苗上的安全使用劑量為47g／hm2，它可以預防苗期煙草白粉病的危害。

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