金柑總黃酮解酒功效的體外活性試驗初探

陳則夷，王仁才，黃紅芳，劉吉凱

（湖南農業大學園藝園林學院，湖南 長沙 410128）

利用天然植物活性成分解酒功效的研究在葛花[1-2]、枳椇子[3]、橄欖[4]等先后得到證實，但有關金柑解酒功效的研究尚未見報道。金柑作為傳統的藥食同源果實，具有疏肝醒酒的功效。乙醇脫氫酶（ADH）[5]是參與乙醇在體內代謝的主要酶，在乙醇代謝中具有加快乙醇代謝，降低血醇濃度，減輕其對機體的傷害等重要作用。試驗主要研究了不同成分提取液對金柑總黃酮提取差異，以及金柑總黃酮的劑量對乙醇脫氫酶活性的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料為瀏陽金柑（金彈），采自瀏陽官渡金柑種植園。

1.2 金柑總黃酮的制備

選取20個金柑，清洗干凈，剝皮，將金柑皮放在托盤中，烘箱中50℃烘干，中藥粉碎機打粉。取金柑皮干粉3份，分別稱重5.00 g，用脫脂紙包好置于3個索氏提取器中（編號為A、B、C）。分別加入200 mL分析純石油醚，在80℃下脫脂至無色，過濾，去濾渣，在A中加入200 mL 80%的乙醇溶液，在80℃下回流提取2.5 h，過濾，回收乙醇提取液；在B中加200 mL正丁醇，在80℃下提取2.5 h，過濾，回收正丁醇提取液；在C中加入200 mL乙酸乙酯，在80℃下回流提取2.5 h，回收乙酸乙酯提取液。

1.3 黃酮含量的檢測及金柑黃酮的體外酶激活測定

黃酮含量的檢測：采用紫外分光光度計測定黃酮含量，分別取80%乙醇提取液、正丁醇提取液、乙酸乙酯提取液各20 mL，真空旋干，用10 mL 30%乙醇溶液溶解于25 mL容量瓶中，加5%的NaNO2溶液1.0 mL，搖勻，放置6 min后加入10%的Al（NO3）3溶液 1.0 mL，搖勻，放置 6 min 后加入4%NaOH溶液10.0 mL，用30%乙醇定容，搖勻，以空白為對照，10～15 min后于510 nm處測定吸光度A。

金柑黃酮的體外酶激活測定：采用瓦勒—霍赫（Valle&Hoch）改良法檢測乙醇脫氫酶活性。在帶塞試管中加入焦磷酸鈉緩沖液1.5 mL，NAD+1.0 mL，乙醇0.5 mL，分別加入3種金柑提取液0.1、0.2、0.3、0.4 mL，混合 37℃下加蓋溫育 5 min。溫育后的帶塞試管中立即加入乙醇脫氫酶0.1 mL，對照管中以蒸餾水代替乙醇脫氫酶，搖勻，37℃溫育5 min，用722型分光光度計測定吸光度（A340）值，以后每隔30 s讀數一次，連續測定5 min。以對照管調定零點，計算出每分鐘的平均吸光值ΔA/min。

乙醇脫氫酶活性計算法：

抑制（激活）率計算：

抑制（激活）率（%）=酶活性無藥對照組－酶活性加藥測定組/酶活性無藥×100

2 結果與分析

2.1 標準曲線的確定

蘆丁標樣品的標準曲線方程為y=1.072 3 x－0.010 2，R2=0.999 5，其中 y為吸光度，x為蘆丁標準品濃度，表明蘆丁濃度與吸光度具有良好的線性關系。

圖1 蘆丁標準曲線

2.2 不同溶劑提取的金柑黃酮含量

以1.3方法測得80%乙醇提取液黃酮含量為0.4 mg/mL，正丁醇提取液黃酮含量為0.222 mg/mL，乙酸乙酯提取液黃酮含量為0.135 mg/mL。結果表明，隨著提取溶劑非極性的的增大，提取的金柑黃酮的含量減少。如表1所示，80%乙醇提取液的總黃酮為0.400 mg/mL，正丁醇的為0.222 mg/mL，乙酸乙酯的為0.135 mg/mL。

2.3 不同溶劑提取的金柑黃酮對乙醇脫氫酶活性的影響

從表2中可知，正丁醇提取液和乙酸乙酯提取液對乙醇脫氫酶激活作用并不明顯，在一定含量上具有一定抑制作用。而80%乙醇溶液提取的金柑總黃酮對乙醇脫氫酶的活性激活效果較顯著，且隨黃酮含量的增加激活率上升。

表1 不同提取液的吸光度

表2 3種溶劑提取的金柑黃酮對乙醇脫氫酶活性的影響 （%）

3 討論

（1）金柑總黃酮提取過程中，以80%乙醇水溶液提取液中總黃酮含量最高，由此推斷，金柑總黃酮中主要以極性較大的黃酮類化合物存在。

（2）80%乙醇提取液對乙醇脫氫酶激活作用較顯著，隨著提取液含量的增加激活率上升，一定含量的正丁醇和乙酸乙酯提取液對乙醇脫氫酶具有抑制作用。由此推測，在金柑總黃酮中主要是極性較大的黃酮類化合物對乙醇脫氫酶具有激活作用。結果表明金柑乙醇提取液可以提高乙醇脫氫酶的活性，具有解酒的功效。

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