L-肉毒堿對(duì)慶大霉素引起的急性腎衰竭的保護(hù)作用研究

徐應(yīng)臣 張 旭 張翠薇 伍 洋

1.四川省瀘州市人民醫(yī)院急診科，四川瀘州 646000；2.瀘州醫(yī)學(xué)院病理教研室，四川瀘州 646000；3.瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院急診科，四川瀘州 646000

急性腎衰竭是指由各種原因引起的腎功能在短時(shí)間（幾小時(shí)至幾天）內(nèi)突然下降而出現(xiàn)的臨床綜合征，其機(jī)制主要為各種原因?qū)е履I小管急性壞死[1]。有研究證明[2]慶大霉素類(lèi)抗生素能導(dǎo)致急性藥源性腎功能衰竭，因此，對(duì)于使用這類(lèi)抗生素導(dǎo)致的急性腎衰竭患者來(lái)說(shuō)，找到一種可以抑制或緩解腎毒性的藥物意義重大。左旋肉毒堿（也稱(chēng)L-肉毒堿），于1958年Fritz首次發(fā)現(xiàn)并證實(shí)L-肉毒堿能促進(jìn)線(xiàn)粒體對(duì)脂肪的代謝速率，明確了其在脂肪氧化中的重要作用，從此L-肉堿的作用越來(lái)越受到重視。臨床上L-肉毒堿相關(guān)的研究主要是用于慢性腎衰竭的貧血癥狀的緩解治療[3]，而用于急性腎衰竭的相關(guān)研究較少，由于它具有轉(zhuǎn)運(yùn)長(zhǎng)鏈脂肪酸、抗氧化應(yīng)激的功能，若將其作用于急性腎衰竭模型，可能會(huì)對(duì)腎臟有保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和試劑

成年雄性SD大鼠40只（購(gòu)自瀘州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心），8周齡大小，體重180～200 g，慶大霉素注射液，L-肉毒堿注射液（購(gòu)自西安瑞迪生物有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕⒓皠?dòng)物分組 將所有SD大鼠隨機(jī)分為4組，先飼養(yǎng)1周左右適應(yīng)環(huán)境。然后各組連續(xù)8 d腹腔內(nèi)注射等量藥物：A組注射生理鹽水，B組注射慶大霉素[80mg/（kg·d）]，C 組注射 L-肉毒堿[200 mg/（kg·d）]，D 組依次注射 L-肉毒 堿[200 mg/（kg·d）]和慶大霉素[80 mg/（kg·d）]，兩次給藥時(shí)間間隔1 h。各組大鼠于注射后第9天行膀胱穿刺取尿，再抽取尾部靜脈血后處死，留取腎臟組織。

1.2.2腎功能檢測(cè) 利用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)各組大鼠血液中血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）的含量，并判定腎功能情況。

1.2.3 尿總量收集及尿蛋白定量 通過(guò)收集24 h尿液并檢測(cè)各組大鼠尿液中尿蛋白的相對(duì)含量。

1.2.4 腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察 將腎組織用4%中性甲醛固定，石蠟包埋，制成4 μm厚的腎組織切片，HE染色，在光鏡下觀察腎臟皮質(zhì)區(qū)和皮髓交界區(qū)腎小管及間質(zhì)結(jié)構(gòu)的病理變化。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩兩比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清尿素氮、肌酐的結(jié)果比較

B組與A組相比血清尿素氮、肌酐明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。C、D組與B組相比肌酐明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血清尿素氮、肌酐的結(jié)果比較（±s）

表1 各組大鼠血清尿素氮、肌酐的結(jié)果比較（±s）

注：與 A 組比較，※P<0.01；與 B 組比較，▲P<0.05

組別 只數(shù) BUN（μmol/L） Cr（μmol/L）A組B組C組D組10 10 10 10 5.3±1.2 30.5±2.5※6.0±1.9▲10.6±3.5▲45.6±13.6 245.5±50.5※55.5±20.5▲85.5±15.5▲

2.2 各組大鼠尿液總量以及尿蛋白含量的比較

B組與A組大鼠相比，24 h尿液總量明顯減少，尿蛋白含量明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；C、D組與B組相比，尿液總量明顯增多，尿蛋白含量明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）。 見(jiàn)表 2。

表2 各組大鼠尿液總量與尿蛋白含量測(cè)定比較（±s）

表2 各組大鼠尿液總量與尿蛋白含量測(cè)定比較（±s）

注：與 A 組比較，※P<0.01；與 B 組比較，▲P<0.05

組別 只數(shù) 尿液總量（mL） 尿蛋白（g/L）A組B組C組D組10 10 10 10 12.3±1.9 4.5±0.5※10.0±1.3▲7.6±1.7▲1.6±0.6 6.5±1.5※2.5±0.5▲3.5±1.5▲

2.3 腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察

給藥后第9天，A組和C 組大鼠可見(jiàn)腎臟腎小管結(jié)構(gòu)完整，小管間排列緊密，腎小管上皮細(xì)胞無(wú)異常改變；B組大鼠大量腎小管上皮細(xì)胞腫脹壞死、脫落，間質(zhì)水腫，大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；D組大鼠以腎小管上皮細(xì)胞變性為主，伴少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及灶狀壞死。

3 討論

急性腎衰竭是一種臨床綜合征，主要表現(xiàn)為氮質(zhì)廢物血肌酐和尿素氮的升高，水、電解質(zhì)和酸堿平衡紊亂，以及全身各系統(tǒng)并發(fā)癥[4]。如果不及時(shí)治療，容易危及生命。目前筆者認(rèn)為狹義的急性腎衰竭就是急性腎小管的壞死[5]。以慶大霉素作為氨基糖苷類(lèi)抗生素的代表目前所引起的急性腎衰竭越來(lái)越受到重視。尋找合適的藥物抑制或者緩解引起的腎衰竭勢(shì)在必行。

左旋肉毒堿又稱(chēng)L-肉毒堿，機(jī)體內(nèi)主要產(chǎn)生器官是腎臟和肝臟。它在脂肪代謝中的機(jī)制主要是將長(zhǎng)鏈脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)至線(xiàn)粒體進(jìn)行氧化并產(chǎn)生能量。在急性腎衰竭的機(jī)體中，由于急性腎小管的壞死，可能導(dǎo)致肉毒堿的缺乏。臨床研究證實(shí)補(bǔ)充左旋肉毒堿對(duì)于慢性腎衰竭患者的貧血癥狀有較好的療效[6]。同時(shí)體外研究證實(shí)，L-肉毒堿作為一種有效的氧自由基清除劑，在緩解氧化應(yīng)激、減少脂質(zhì)過(guò)氧化中均具有明顯的保護(hù)作用，它主要通過(guò)阻止花生四烯酸介導(dǎo)的NADPH氧化激活，抑制蛋白激酶 C途徑，從而阻止超氧陰離子生成[7]。在腎臟的毒性損傷中，左旋肉毒堿可能通過(guò)減輕內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激，對(duì)抑制急性腎衰竭患者的腎小管損傷有積極的作用。

本實(shí)驗(yàn)中通過(guò)利用慶大霉素誘導(dǎo)大鼠急性腎衰竭模型，并給予L-肉毒堿干預(yù)，發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充L-肉毒堿的大鼠組血清肌酐、尿素氮、尿蛋白都明顯低于慶大霉素組，而尿總量多于慶大霉素組。說(shuō)明L-肉毒堿對(duì)急性腎衰竭有保護(hù)作用。其機(jī)制可能為：慶大霉素導(dǎo)致的急性腎小管壞死，一方面引起腎小球率過(guò)濾降低，導(dǎo)致尿量減少，血中肌酐、尿素氮等含氮廢物的增加；另一方面，由于腎小管的壞死引起局部細(xì)胞缺氧作用，使腎組織中線(xiàn)粒體腫脹，能量代謝異常，其內(nèi)的乙酰輔酶A、總一氧化氮、硫代巴比妥酸反應(yīng)產(chǎn)物增加。在慶大霉素的持續(xù)作用下，肉毒堿可能耗盡，導(dǎo)致進(jìn)行性的血清肌酐、尿素氮含量增加，線(xiàn)粒體內(nèi)CoA-SH和ATP下降；相反地，補(bǔ)充L-肉毒堿有緩解血清肌酐、尿素氮含量的增加，對(duì)腎功能有保護(hù)作用。此外，腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察也證實(shí)，L-肉毒堿對(duì)慶大霉素誘導(dǎo)的急性腎衰竭具有保護(hù)作用，說(shuō)明左旋肉毒堿可能在急性腎衰竭的發(fā)生過(guò)程中，通過(guò)轉(zhuǎn)運(yùn)長(zhǎng)鏈脂肪酸到線(xiàn)粒體，補(bǔ)充腎小管上皮氧化需要的能量，從而抑制急性腎小管的壞死，達(dá)到保護(hù)腎臟的作用。當(dāng)然，其具體機(jī)制還需要進(jìn)一步的研究及檢測(cè)加以證實(shí)。

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