丹香冠心注射液的細菌內毒素檢查法的建立及探討

李秀珍，劉風琴，呂光宇，李 文

(德州市藥品檢驗所，山東 德州253000)

丹香冠心注射液為丹參、降香中藥提取液的復方制劑，具有活血化瘀、理氣開竅的功用。用于心絞痛及心肌梗死等疾病的治療。已經廣泛應用于臨床。我國現行藥品標準對這種復方針劑藥品的熱原檢查尚無明確要求［1］。但在臨床使用中時有患者出現各種熱原反應，為了控制藥品質量，確保用藥安全，我們通過試驗，建立和探討以細菌內毒素法檢查丹香冠心注射液的可行性?，F報告如下。

1 材料

1.1 儀器 試管恒溫儀(湛江安度斯生物有限公司);漩渦混合器(北京北德科學器材有限公司)。試驗中其他除使用無熱原吸頭外，所用玻璃器皿經250℃烘烤1 h以上。

1.2 試劑與試藥 丹香冠心注射液(上海中西制藥有限公司，批號:0912052，1005050，1011021，規格:2 mL);鱟試劑TAL(批號:1105231，λ =0.25 EU·mL－1，0.1 mL/支，湛江安度斯生物有限公司)，細菌內毒素工作標準品(批號:1108040，10 EU/支，湛江安度斯生物有限公司)，細菌內毒素檢查用水(BET水)(批號:1105160，5 mL/支，湛江安度斯生物有限公司)。

2 方法與結果

2.1 鱟試劑靈敏度復核試驗 按照《中國藥典》2010版(二部)附錄細菌內毒素靈敏度復核項下進行試驗［1］，結果所用鱟試劑靈敏度均在0.5～2.0 λ范圍內，符合要求。

2.2 本品最大有效稀釋倍數(MVD)的計算

2.2.1 細菌內毒素限值(L)的確定 我國靜脈用藥細菌內毒素致熱閾值K=5.0 EU·mL－1，M為人每公斤體重每小時最大劑量，丹香冠心注射液最大劑量16 mL，中國人均體重按60 kg計算，根據公式 L=K/M=5/(16/60)=18.75 EU·mL－1。

2.2.2 MVD 值的計算 MVD=CL/λ，C=1.0 mL·mL－1對應于靈敏度 0.5，0.25，0.125，0.062 5 EU·mL－1的鱟試劑，最大有效稀釋倍數(MVD)分別為 37.5、75、150、300 倍。

2.3 干擾試驗

2.3.1 干擾預試驗 取供試品適量，加BET水分別稀釋成18、37.5、75、150、300 倍稀釋液(為了更加科學嚴謹的分析預試驗結果，加入18倍濃度)，記為NPC液，用上述稀釋液制備含有2 λ濃度細菌內毒素的樣品溶液，記為PPC液，使用0.25 EU·mL－1的TAL試劑，分別與NPC液和PPC液反應，每個濃度重復2管，同時使用BET水制備陰性對照管(NC)和陽性對照管(PC)，結果見表1。

表1 供試品干擾預試驗結果

由表1可知，供試品存在干擾，為抑制作用，經75倍稀釋后可消除干擾。

2.3.2 干擾試驗 取3批樣品用BET水稀釋至75倍，再以該稀釋液和 BET 水分別制備 2.0 λ、1.0 λ、0.5 λ、0.25 λ 4 個濃度的細菌內毒素溶液，每個濃度平行做4管，同時各做2管陰性對照(NC)［2］，結果見表 2。

表2 供試品干擾試驗結果

Es=lg－1(Xs/4)，Et=lg－1(＞Xt/4)，由表2可計算出 Es在0.5 ～2.0 λ 范圍內，且 Et在 0.5 ～2.0 Es之間，表明用細菌內毒素檢查法檢查丹香冠心注射液中的熱原是可行的。

取本品，用BET水至少稀釋75倍后，依法檢查(《中國藥典》2010年版二部，附錄ⅪE)，本品每1 mL中含內毒素的量應小于18.75 EU。

3 討論

丹香冠心注射液的細菌內毒素檢查中L值的計算方法對結果有直接影響，本文按照2010年版藥典的要求［2］，M值采用人用每公斤體重每小時的最大供試品劑量，L=18.75 EU·mL－1，科學合理。試驗結果表明，丹香冠心注射液稀釋75倍后可用靈敏度為0.25 EU·mL－1的鱟試劑進行內毒素檢查，重現性好，結果準確可靠。

［1］國家藥典委員會.國家藥品中藥標準(內科心系分冊)［S］.北京:中華人民共和國衛生部，2002:358.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(二部)［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:附錄99－102.