血清CXCL16濃度與腦卒中患者頸動脈粥樣硬化的相關性研究

王克迪 劉志忠 王瑞珉 康熙雄*

(1.首都醫科大學附屬北京友誼醫院臨床檢驗中心，北京 100050;2.首都醫科大學附屬北京天壇醫院實驗診斷中心，北京 100050)

動脈粥樣硬化不僅僅是脂質的堆積，而是一種炎性反應性疾病。趨化因子(chemokine)與炎性反應細胞表面受體相互作用，在炎性反應細胞定向遷移至炎性反應部位中發揮了關鍵作用。趨化因子CXC配體16(CXC ligand 16，CXCL16)是2000年發現的一種趨化因子［1-3］，能激活其唯一受體CXCR6，從而介導T細胞活化，同時，作為清道夫受體，具有結合氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein，Ox-LDL)和磷脂酰絲氨酸的作用。頸動脈粥樣硬化是全身血管硬化的一個反映，同時與缺血性腦卒中的發生發展密切相關［4-5］。本研究對急性動脈粥樣硬化性腦卒中患者行頸部血管超聲檢查，用頸動脈內-中膜厚度(intimamedian thickness，IMT)、斑塊穩定性和斑塊面積(carotid plaque area，CPA)評價頸動脈硬化情況，探討血清CXCL16濃度與頸動脈粥樣硬化的相關性。

1 材料與方法

1.1 研究對象

自2008年9月到2009年4月在首都醫科大學附屬北京天壇醫院神經內科住院的患者，共135名，其中男性85例，女性50例，年齡在40～70歲之間，平均年齡(58.90±10.40)歲。診斷標準參照中華醫學會第四屆腦血管病會議修訂的各類腦血管疾病診斷要點［6］，均經臨床和影像學(CT和/或MRI)、超聲等輔助檢查確診，符合動脈粥樣硬化性腦卒中。排除患有其他原因所致的各類腦梗死、既往有腦出血病史者，無嚴重心、肺、腦疾病、惡性腫瘤及炎性反應性疾病。

1.2 方法

1)標本采集:取入組者晨起空腹靜脈血2～3 mL，離心分離血清，采用生物化學法測定血糖、血脂和肝腎功能。

2)血清CXCL16濃度測定:采用美國R＆D公司生產的人CXCL16定量測定試劑盒，操作嚴格按照試劑盒說明進行。

3)頸部血管超聲:受檢者取仰臥位，頸下墊薄枕，頭部偏向檢查對側，充分暴露頸部，依次檢查右側和左側頸動脈，記錄頸動脈長軸和短軸圖像，觀察頸動脈內膜是否光滑、有無增厚、斑塊部位、斑塊大小和回聲特點。測量指標包括IMT、斑塊穩定性和CPA。本實驗中IMT為左右兩側頸總動脈IMT中的較大值，以1.0 mm作為臨界值，IMT＞1.0 mm者為IMT增厚組，IMT≤1.0 mm者為IMT正常組。斑塊穩定性評價參照美國心臟病協會 (American Heart Association，AHA)標準［7］，分為無斑塊組、穩定斑塊組和不穩定斑塊組。CPA定義為頸動脈(包括頸總動脈、頸內動脈、頸外動脈和球部)所有斑塊的橫截面積之和，依CPA四分位數間距值分為4組。

1.3 統計學方法

采用SPSS 13.0軟件進行數據分析。應用onesample Kolmgorov-Smirnov檢驗所有計量數據是否服從正態性分布，服從正態性分布者，以均數±標準差(±s)表示，兩均數的比較采用t檢驗分析，多組均數比較采用one-way ANOVA;不服從正態分布者，采用中位數(四分位數間距)［M(Q)］表示。計數資料采用χ2檢驗。以Logistic進行相關性分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 研究對象臨床資料

研究對象的年齡、性別，有無高血壓、糖尿病、吸煙、飲酒史等及生化測量指標如血糖、血脂等資料，詳見表1。

表1 研究對象臨床資料Tab.1 Clinical characteristics of the study population

2.2 IMT、頸動脈斑塊穩定性和CPA與血清 CXCL16濃度的相關性

與正常IMT組相比較，IMT增高組血清CXCL16濃度顯著升高，差異有統計學意義(P＜0.05);不穩定斑塊組中血清CXCL16濃度顯著高于穩定斑塊組和無斑塊組;依據 CPA四分位數間距分為4組:0.00 ～0.140 cm2(n=34)，0.141 ～ 0.512 cm2(n=33)，0.513 ～1.126 cm2(n=35)和 1.127 ～5.148 cm2(n=33)。4 組中 M(Q)值分別為 0(0)，0.337(0.245)，0.736(0.301)和 1.671(1.177)cm2，血清CXCL16水平與CPA密切相關，詳見表2。

2.3 血清CXCL16濃度與頸動脈粥樣硬化危險因素的相關性

以IMT、斑塊穩定性和CPA分別作為因變量，年齡、性別、三酰甘油(triglyceride，TG)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)、空腹血糖、高血壓病史、2型糖尿病病史、吸煙史和飲酒史作為自變量，進行Logistic回歸分析，結果顯示高水平CXCL16是高IMT、不穩定性斑塊和高CPA的獨立危險因素，詳見表3。

3 討論

本研究結果表明，高水平CXCL16是高IMT、不穩定斑塊和高CPA的獨立危險因素，其與腦卒中患者頸動脈粥樣硬化程度密切相關。

目前，關于血清CXCL16濃度與頸動脈粥樣硬化相關性研究報道甚少，但有研究［8-9］表明CXCL16及其受體CXCR6基因表達濃度與頸動脈粥樣硬化密切相關，應用定量rt-PCR檢測到頸動脈硬化斑塊中CXCL16 mRNA大量表達，而肉眼觀察未見病變的血管顯示CXCL16的低轉錄，免疫組化染色顯示CXCL16和CXCR6蛋白存在于單核細胞、T細胞富集區及平滑肌細胞，與本實驗結果一致，提示CXCL16與動脈粥樣硬化密切相關。

表2 IMT、頸動脈斑塊穩定性和CPA與血清CXCL16濃度的相關性Tab.2 Relationship of the stability of carotid plaque，IMT，carotid plaque area and serum CXCL16 concentration

表3 血清CXCL16濃度與頸動脈粥樣硬化危險因素的相關性Tab.3 The relationship between serum CXCL16 concentration and carotid atherosclerosis risk factors

然而，Aslanian和Charo應用雙重標記免疫組織化學方法研究LDL受體缺陷(LDLR－/－)和cxcl16基因敲除(CXCL16－/－)小鼠，發現與單純LDLR－/－的小鼠相比，CXCL16－/－LDLR－/－的小鼠主動脈弓部及根部有更大的動脈粥樣硬化斑塊，且斑塊區凋亡細胞數量增加，伴有CD68、CCL2、γ-干擾素 mRNA表達增加，CXCR6+細胞數有減少趨勢。可見，cxcl16基因缺陷并沒有減輕As，反而伴有As的加重。此外一項研究［10］表明，單核細胞結合和攝取OxLDL的能力在CXCL16表達缺陷的小鼠較野生型下降，上述研究進一步表明了CXCL16的動脈硬化保護作用，推測可能與CXCL16作為清道夫受體，可以從血管壁清除有害物質，起到血管保護作用相關。當然，上述研究僅提示膜結合型CXCL16可能的動脈粥樣硬化保護作用，而分泌型CXCL16與膜結合型CXCL16的功能不完全一致，因此，與本實驗結果并不矛盾。

頸動脈粥樣硬化是全身動脈粥樣硬化的可靠標志，且與腦卒中的發生密切相關，多項臨床指南［11］已經將高IMT和不穩定斑塊作為腦卒中的危險因素。分泌型CXCL16在動脈粥樣硬化斑塊中高表達，可趨化炎性反應細胞向斑塊遷移，加速前炎性反應因子，如γ-干擾素的合成、分泌，而γ-干擾素是CXCL16最有效的誘導物，可以增加 CXCL16及其受體的表達［12-13］，如此形成一個正反饋調節，加劇斑塊的不穩定性。此外，CXCL16作為血管生成因子［14］，誘導血管形成，而新生血管在斑塊破裂中是一個核心事件。可見，CXCL16與動脈粥樣硬化斑塊的發生和不穩定性密切相關。

本文也存在一定的局限性，樣本量較小，統計學效力不足，另外尚有一些動脈粥樣硬化相關因素未考慮，應在進一步試驗中積極完善。

［1］Shimaoka T，Kume N，Minami M，et al.Molecular cloning of a novel scavenger receptor for oxidized low density lipoprotein，SR-PSOX，on macrophages［J］.J Biol Chem，2000，275(52):40663-40666.

［2］Matloubian M，David A，Engel S，et al.A transmembrane CXC chemokine is a ligand for HIV-coreceptor Bonzo［J］.Nat Immunol，2000，1(4):298-304.

［3］Wilbanks A，Zondlo S C，Murphy K，et al.Expression cloning of the STRL33/BONZO/TYMSTR ligand reveals elements of CC，CXC，and CX3C chemokines［J］.J Immunol，2001，166(8):5145-5154.

［4］Nowaczenko M，Sarzynska-Dlugosz I，Czlonkowska A.Prevalence of carotid arteries atherosclerotic changes in ischemic stroke patients［J］.Neurol Neurochir Pol，2003，37(1):27-36.

［5］李晶瑋，杜鳳和，徐秀英.老年高血壓患者頸動脈粥樣硬化與超敏C反應蛋白的關系［J］.首都醫科大學學報，2010，31(2):268-271.

［6］陳清棠.腦卒中患者臨床神經功能缺損程度評分標準(全國第四屆腦血管病學術會議通過)［J］.中華神經科雜志，1996，29(6):381-383.

［7］Stary H C，Chandler A B，Dinsmore R E，et al.A definition of advanced types of atherosclerotic lesions and a histological classification of atherosclerosis:a report from the Committee on Vascular Lesions of the Council on Arteriosclerosis，American Heart Association［J］.Circulation，1995，15(9):1512-1531.

［8］呂永青，卜培莉.CXCL16與動脈粥樣硬化的關系研究［J］.中國實用醫藥，2009，4(9):60-62.

［9］Wuttge D M，Zhou X，Sheikine Y，et al.CXCL16/SRPSOX is an interferon-gamma-regulated chemokine and scavenger receptor expressed in atherosclerotic lesions［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2004，24(4):750-755.

［10］Aslanian A M，Charo I F.Targeted disruption of the scavenger receptor and chemokine CXCL16 accelerates atherosclerosis［J］.Circulation，2006，114(6):583-590.

［11］Blaser T，Hofmann K，Buerger T，et al.Risk of stroke，transient ischemic attack，and vessel occlusion before endarterectomy in patients with symptomatic severe carotid stenosis［J］.Stroke，2002，33(4):1057-1062.

［12］Chandrasekar B，Bysani S，Mummidi S.CXCL16 signals via Gi，phosphatidylinositol3-kinase，Akt，I kappaB kinase，and nuclear factor－kappa B and induces cell－cell adhesion and aortic smooth muscle cell proliferation［J］.J Biol Chem，2004，279(5):3188-3196.

［13］Ludwig A，Weber C.Transmembrane chemokines:versatile‘special agents’in vascular inflammation［J］.Thromb Haemost，2007，97(5):694-703.

［14］Zhuge X，Murayama T，Arai H，et al.CXCL16 is a novel angiogenic factor for human umbilical vein endothelial cells［J］.Biochem Biophys Res Commun，2005，331(4):1295-1300.