利用氣相色譜法同步測(cè)定飼料香味劑中四種成分的研究

李會(huì)榮

（山東省飼料質(zhì)量檢驗(yàn)所 濟(jì)南 250022）

飼料香味劑作為誘食劑，能把動(dòng)物吸引到飼料周?chē)?，并使之產(chǎn)生饑餓感、自在感，刺激唾液和消化液的分泌；能提高適口性，保證動(dòng)物在高溫、斷奶、運(yùn)輸、疾病等應(yīng)激狀態(tài)下的采食量；能有效掩蓋飼料中的不良味道，使飼料充滿(mǎn)香甜氣味；能產(chǎn)生均一的氣味，使畜禽順利適應(yīng)飼料配方和飼料原料的改變，促進(jìn)幼齡動(dòng)物提前斷奶，提早采食；還可以作為一種產(chǎn)品標(biāo)記，使飼料產(chǎn)品更具競(jìng)爭(zhēng)力。

國(guó)內(nèi)外香味劑的檢測(cè)，主要是以氣相色譜或液相色譜為核心的檢測(cè)技術(shù)，近幾年我國(guó)食品行業(yè)也相繼發(fā)布了一些單一香味劑的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)及檢測(cè)方法。我國(guó)市場(chǎng)上銷(xiāo)售的飼料香味劑種類(lèi)眾多，但目前尚無(wú)單一飼料香味劑的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)及檢測(cè)方法，更沒(méi)有飼料香味劑中多種成分同步檢測(cè)的方法。本研究針對(duì)飼料香味劑添加成分繁多復(fù)雜的特性，參照食品中單一香味劑的檢測(cè)方法，建立了氣相色譜法同步檢測(cè)飼料香味劑中乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯的方法，同時(shí)對(duì)方法的檢出限、準(zhǔn)確度和精密度等進(jìn)行了試驗(yàn)驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 分析純無(wú)水乙醇。

1.1.2 儀器和設(shè)備 分析天平（感量0.1mg）；Agilent6890N氣相色譜儀（具有FID檢測(cè)器和可程序升溫的柱溫箱）。

1.1.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯標(biāo)準(zhǔn)品純度大于98%。（1）乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯混合標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取乙基香蘭素0.1000g、乙基麥芽酚0.1000g于10ml棕色容量瓶中，加5ml無(wú)水乙醇溶解后，再準(zhǔn)確量取椰子醛0.10ml、乙酸異戊酯0.10ml，用無(wú)水乙醇定容。該溶液中乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯的濃度均為10mg/ml。2～8℃保存，保質(zhì)期1個(gè)月。（2）乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液：準(zhǔn)確移取乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯混合標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液1ml，置于10ml棕色容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容。該溶液中乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯的濃度均為1mg/ml。2～8℃保存，保質(zhì)期1周。（3）乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確移取適量乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯混合標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液（1）和混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（2），分別配制成濃度為0.01、0.10、0.20、0.50、1.00和2.00mg/ml的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2 方法

1.2.1 氣相色譜參考條件 色譜柱：HP-5或同等效果的柱子，30m×0.25μm；進(jìn)樣口溫度：240℃；不分流進(jìn)樣；載氣流速：8.0ml/min；柱溫箱溫度：起始60℃，保持2min，以30℃/min的速率升溫至200℃，保持2min；檢測(cè)器溫度：260℃。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1。結(jié)果表明：該色譜條件均能滿(mǎn)足色譜分析的需要。

圖1 乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯混合標(biāo)樣圖譜

1.2.2 提取條件的確定 由于檢測(cè)的四種物質(zhì)均能溶解于無(wú)水乙醇[1-5]，因此選用無(wú)水乙醇作為提取劑。用空白的載體，添加不同濃度的乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯，選用振蕩器、旋渦混合器和手動(dòng)振搖三種不同的方法提取后，上機(jī)測(cè)定其回收率。由于不同提取方式的回收率幾乎相同，且考慮到檢測(cè)的這四種物質(zhì)均有揮發(fā)性，處理的步驟越簡(jiǎn)單越好。因此，選用處理簡(jiǎn)單且不需要其它輔助設(shè)備的手動(dòng)振搖提取方式。即準(zhǔn)確稱(chēng)取試樣適量（精確至0.0002g）（使待測(cè)溶液中所測(cè)物的含量控制在0.01～2.00mg/ml之間），置于10ml棕色容量瓶中，加5ml無(wú)水乙醇，振蕩混勻，用無(wú)水乙醇定容至刻度。混勻后靜置。取上清溶液，溶液過(guò)0.45μm的微孔濾膜，供上機(jī)測(cè)定。

2 結(jié)果

2.1 方法的線(xiàn)性范圍

將標(biāo)準(zhǔn)工作溶液依次從低濃度到高濃度進(jìn)樣，每一濃度進(jìn)樣三針，按其所得峰面積的平均值與對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（mg/ml）作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算出回歸方程和相關(guān)系數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2。結(jié)果表明：乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液在0.01～2.00MG/ML濃度范圍內(nèi)有良好的線(xiàn)性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均達(dá)到0.99以上。

圖2 乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)性

用1.00mg/ml乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液連續(xù)進(jìn)樣6次。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明：同一濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液有較好的重復(fù)性，其RSD%均小于5.0%。

表1 混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液重復(fù)性檢測(cè) （%）

2.3 最低定量限的確定

在空白載體中分別添加乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯各100mg/kg，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖3和表2。結(jié)果表明：在添加量為100mg/kg時(shí)，其回收率為80%以上，而添加量為100mg/kg以上其它濃度的回收率也均在80%以上。由于該方法中采用程序升溫的色譜條件，當(dāng)添加量小于100mg/kg時(shí)，其信噪比不能滿(mǎn)足定量的要求，所以，將該方法的最低定量限定為100mg/kg。目前市場(chǎng)上常見(jiàn)的飼料香味劑中乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯的配方含量在2～100g/kg之間。所以，該定量限完全可以滿(mǎn)足實(shí)際生產(chǎn)中產(chǎn)品含量檢測(cè)的要求。

圖3 空白載體中添加乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯100mg/kg色譜圖

表2 方法最低定量限確定的檢測(cè)結(jié)果回收率 （%）

2.4 方法的準(zhǔn)確度和精密度的測(cè)定

在空白載體中分別添加各100mg/kg、1000mg/kg、2000mg/kg、3000mg/kg、4000mg/kg、5000mg/kg和10000mg/kg濃度的乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯，每個(gè)濃度做4次重復(fù)，分別計(jì)算回收率。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。在添加不同濃度的乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯時(shí)，不同的添加濃度均可得到較高的回收率，且相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于10%。

2.5 方法的適用范圍

為考察本方法的適用性，從市場(chǎng)上收集了3個(gè)生產(chǎn)廠(chǎng)家的6個(gè)飼料香味劑樣品，其中2個(gè)果香型，2個(gè)奶香型，但這4個(gè)樣品無(wú)具體的含量規(guī)定；另2個(gè)樣品有標(biāo)簽，測(cè)定結(jié)果均大于樣品添加含量的標(biāo)示量。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果表明：不同的生產(chǎn)廠(chǎng)家、不同成分的香味劑均可用該方法檢測(cè)。

表3 空白載體中添加回收的檢測(cè)結(jié)果 （%）

表4 方法適用范圍的驗(yàn)證含量 （mg/kg）

2.6 干擾試驗(yàn)

為考察其它香味劑是否對(duì)該方法有干擾，分別用濃度為2.00mg/ml桃醛（丙位十一內(nèi)酯）和丁位葵內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，在與乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯相同的提取和色譜條件下上機(jī)測(cè)定，各種香味劑的出峰時(shí)間見(jiàn)表5，桃醛和丁位葵內(nèi)酯的圖譜見(jiàn)圖4和圖5。試驗(yàn)顯示，乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯與桃醛和丁位葵內(nèi)酯的色譜峰有很好的分離，且對(duì)其定量無(wú)影響。結(jié)果表明：桃醛和丁位葵內(nèi)酯對(duì)乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯的測(cè)定均無(wú)干擾。

表5 各種香味劑及出峰時(shí)間

圖4 桃醛（丙位十一內(nèi)酯）圖譜

圖5 丁位葵內(nèi)酯圖譜

3 結(jié)論

以上試驗(yàn)結(jié)果表明：本研究建立的飼料香味劑中乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯同步檢測(cè)方法，色譜條件易于掌握，儀器性能穩(wěn)定，測(cè)試數(shù)據(jù)重復(fù)性好，回收率高，精密度和準(zhǔn)確度均能滿(mǎn)足分析要求，且具有較好的定量限。