響應面法優化纖維素酶提取蘋果渣中水溶性膳食纖維

牟建樓，王 頡*，孫劍鋒

(河北農業大學食品學院，河北 保定 071000)

響應面法優化纖維素酶提取蘋果渣中水溶性膳食纖維

牟建樓，王 頡*，孫劍鋒

(河北農業大學食品學院，河北 保定 071000)

以蘋果渣為原料，研究纖維素酶作用提取蘋果渣中水溶性膳食纖維，通過單因素試驗和響應面優化試驗確定適宜的提取條件。結果表明：在纖維素酶用量0.67%、緩沖液pH5.55、酶解時間1.90h、酶解溫度45℃條件下，水溶性膳食纖維提取率最高，為17.50%。

蘋果渣；纖維素酶；水溶性膳食纖維；響應面

我國是世界上最大的蘋果生產國，蘋果渣是蘋果加工廠的副產物，大部分作為廢棄物丟棄，嚴重地污染了環境，而且還造成極大的資源浪費，蘋果渣含有24%的粗纖維[1]。若將蘋果渣中的纖維提取，可以提高產品的附加值。

水溶性纖維(soluble dietary fiber，SDF)是膳食纖維中具有重要生理功能的組分，水溶性膳食纖維對人體具有多種營養保健功能，而且有利于人體的消化吸收。水溶性膳食纖維的提取方法主要是化學法[2-7]，酸、堿對膳食纖維尤其是水溶性膳食纖維的破壞較大，產品品質較差，而且環境污染大。物理法[8-9]和酶法[10-11]報道比較少，酶法應用于蘋果渣水溶性膳食纖維提取未見報道。

本實驗以纖維素酶提取蘋果渣中水溶性膳食纖維，通過響應面分析方法得到酶法提取的最佳工藝條件。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蘋果渣 河南靈寶飼料有限公司；無水乙醇、醋酸鈉、冰醋酸(均為分析純) 天津天大化工實驗廠；纖維素酶(10000U/g) 北京奧博星公司。

1.2 儀器與設備

電子天平、PB-20酸度計 北京賽多利斯儀器有限公司；水浴鍋 上海東星建材試驗設備有限公司；QE-200g中藥粉碎機 武義縣屹立工具有限公司；DL-101-2電熱鼓風干燥箱 天津市中環實驗電爐有限公司；標準檢驗篩(40目) 浙江上虞市華豐五金儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 工藝流程及操作要點

工藝流程：蘋果渣粉碎→過篩→酶解→過濾→醇沉→過濾→干燥→成品。

操作要點：將蘋果渣粉碎后，過40目篩，待用。準確稱取10.0g，按1:20加入一定pH值的醋酸鹽緩沖液，在一定溫度下加入適量纖維素酶，酶解一段時間后，在80℃條件下保溫10min滅活。濾液冷卻后加入四倍體積的無水乙醇，60℃醇沉1h，抽濾得到沉淀物，在干燥箱中干燥，得蘋果渣水溶性膳食纖維，稱質量計算得率。

1.3.2 蘋果渣水溶性膳食纖維提取單因素試驗

稱取10.0g蘋果渣，按料液比1:20加入一定pH值的醋酸鹽緩沖液，在一定溫度條件下加入一定量的纖維素酶酶解一定時間，然后按照1.3.1節要點操作計算得率。各因素水平為：加酶量0、0.3%、0.6%、0.9%、1.2%、1.5%；pH3.5、4.0、4.5、5.0、5.5；酶解時間0.5、1.0、1.5、2.0、2.5h；酶解溫度40、45、50、55、60℃。每個試驗重復3次。

1.3.3 響應面優化試驗

在單因素試驗的基礎上，以加酶量、pH值、酶解時間，酶解溫度為試驗因素，水溶性膳食纖維得率為響應值，進行響應面優化試驗。采用Design Expert 7.12統計軟件，進行Box-Behnken設計及響應面分析試驗。試驗因素水平表見表1。

表1 Box-Behnken中心組合設計因素及水平表Table 1 Factors and levels of Box-Behnken design

1.4 結果統計分析方法

單因素試驗使用SPSS11.0軟件進行統計分析。響應面試驗采用Design Expert7.12統計軟件，進行響應面分析。

2 結果與分析

2.1 單因素試驗結果

2.1.1 纖維素酶加酶量對SDF得率的影響

圖1 纖維素酶加酶量對SDF得率的影響Fig.1 Effect of enzyme concentration on SDF yield

由圖1可見，隨著加酶量的增加，水溶性膳食纖維得率逐漸增加，當加酶量達到0.6%時其得率最高達14.76%，隨著加酶量的進一步的增加得率反而減少。因為蘋果渣內含有大量不溶性纖維，加酶量過低，不溶性纖維水解不完全，而加酶量過高，使膳食纖維中可溶性纖維素分解，造成提取率降低，這是由于適量的纖維素酶可以使一部分水不溶性半纖維素變成可溶的半纖維素，以及一些不溶性膳食纖維轉變成可溶性的葡聚糖，提高SDF含量。當酶的加入量超過一定值時，可溶性的膳食纖維進一步降解，生成分子質量更低的小分子多糖、低聚糖或者單糖，無法被乙醇沉淀，使得SDF得率反而有所降低。0.6%加酶量的處理組纖維素得率明顯高于其他處理組(P＜0.05)。

2.1.2 溶液pH值對SDF得率的影響

圖2 緩沖液pH值對SDF得率的影響Fig.2 Effect of pH on SDF yield

由圖2可以看出， pH 值由4.0 上升到5.0 SDF得率迅速增加，在pH5.0時，SDF得率達到最高(P＜0.05)，所以選pH5.0的緩沖液作為提取緩沖液。

2.1.3 酶解時間對SDF得率的影響

圖3 酶解時間對SDF得率的影響Fig.3 Effect of extraction time on SDF yield

由圖3可知，隨著酶解時間的延長，膳食纖維的提取率逐漸增加，當酶解時間在2h以后，得率基本不變，處理2h與處理2.5h膳食纖維的提取率差異不顯著(P＞0.05)，這兩個處理的得率明顯高于其他處理(P＜0.05)，從提取效率和生產成本考慮，選擇酶解時間在2h為宜。

2.1.4 酶解溫度對SDF得率的影響

圖4 溫度對得率的影響Fig.4 Effect of temperature on SDF yield

由圖4可知，在未達到酶的最適宜溫度的時候，隨著溫度的升高，膳食纖維的提取率明顯增加，當溫度達到55℃時，提取率達到最高，膳食纖維的提取率與其他4個處理有顯著差異(P＜0.05)，所以選55℃為纖維素酶酶解的適宜溫度。

2.2 響應面分析結果

2.2.1 響應面法的試驗結果及方差分析

表2 蘋果渣SDF提取響應面試驗設計方案及結果Table 2 Experimental design and results for response surface analysis

響應面試驗設計及結果見表2，利用Design Expert 7.12對表2中的試驗數據進行多元回歸擬合及對模型進行方差分析，分析結果如表3所示。

表3 響應面試驗結果方差分析Table 3 Variance analysis for the fitted regression equation

由表3可知，失擬項不顯著(P＝0.1318＞0.05)，而模型的P值為0.0005，小于0.01，表明模型極顯著，模型的確定系數R2＝0.90，模型調整確定系數R2Adj＝0.80，表明模型擬合度較好，能較好地反映各因素與響應值變化的關系，可用于預測可溶性膳食纖維得率的實際情況。從表3還可以看出，一次項(X1、X4)對結果影響顯著(P＜0.05)、一次項(X2)、交互項(X3X4)和二次項(X12、X22、X32)對結果影響極顯著(P ＜ 0.01)， X3、X42和交互項(X1X2、X1X3、X1X4、X2X3、X2X4)對結果影響不顯著(P＞0.05)。因此去除交互項X1X2、X1X3、X1X4、X2X3和X2X4，得到SDF得率對加酶量(X1)、pH(X2)、酶解時間(X3)、酶解溫度(X4)的回歸模型為：

利用Design Expert軟件對表2數據進行二次多元回歸，擬合得到二次回歸方程的響應曲面及其等高線。提取溫度和提取時間對SDF得率的影響見圖5。由圖5可見，提取時間保持不變，隨著提取溫度的增加，SDF得率呈現逐漸降低的趨勢；當提取溫度一定時，隨著提取時間的延長，SDF得率呈現先升高后降低的趨勢。在較低溫度水平下，控制提取時間有利于SDF得率的增加。

圖5 酶解溫度與酶解時間等高線及響應面圖Fig.5 Response surface and contour plots for the interactive effects of extraction temperature and time on SDF yield

根據得到的多項式回歸方程，利用Design Expert軟件對響應面立體圖進行分析，對優化后的回歸方程進行求解，得出水溶性膳食纖維提取最優酶解條件為：加酶量0.67%、緩沖液pH5.55、作用時間1.90h、反應溫度45.00℃，模型預測的得率是17.59%。

2.2.2 提取工藝驗證實驗

為了驗證模型方程的適用性與可靠性，采用上述最佳工藝條件進行膳食纖維提取實驗，重復3次，結果表明，在此條件下，膳食纖維平均提取率為17.50%，與預測值基本相符，可見該模型能較好地預測實際可溶性膳食纖維的提取情況。

3 結 論

纖維素酶法提取蘋果渣中水溶性膳食纖維，纖維素酶可以酶解不溶性纖維素得到半纖維素、聚葡萄糖等可溶性多糖，同時大分子被分解后，使可溶性的分子較小的膳食纖維得到釋放。由于這兩方面的作用，使酶法提取效率更高。

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Response Surface Methodology for Extraction Optimization of Water Soluble Dietary Fiber from Apple Pomace Using Cellulase

MU Jian-lou，WANG Jie*，SUN Jian-feng
(College of Food Science and Engineering, Agricultural University of Hebei, Baoding 071000, China)

One-factor-at-a-time method and response surface methodology were used to optimize the enzymatic extraction of water soluble dietary fiber from apple pomace with cellulase. The highest extraction rate of water soluble dietary fiber, 17.50%,was obtained under the conditions: enzyme dose 0.67%, buffer pH 5.55, hydrolysis time 1.90 h, and temperature 45 ℃.

apple pomace；cellulase；soluble dietary fiber (SDF)；response surface analysis

TS255.36

A

1002-6630(2012)08-0095-04

2011-04-02

河北省科技計劃項目(11221004D)

牟建樓(1973—)，女，講師，碩士，研究方向為農產品加工及貯藏。E-mail：jianloumu2005@yahoo.com.cn

*通信作者：王頡(1959—)，男，教授，博士，研究方向為農產品加工及貯藏。E-mail：wj591010@163.com