藏藥七十味珍珠丸對實驗性心肌缺血大鼠的保護作用

吳 穹， 馬祁生， 劉永年

（青海大學醫學院病理生理學教研室，青海 西寧 810001）

七十味珍珠丸(藏文譯音:然那桑培Ran na san pei，RNSP)，收載于18世紀名醫葛瑪·額勒丹增所著的《藥方集萬部》中，其方藥由珍珠、瑪瑙、珊瑚、牛黃、麝香、藏紅花等七十味動、植物和礦物質組成，對高血壓病、腦卒中及其后遺癥、癲癇、腦動脈硬化、腦血栓、心肌梗塞等有確切的療效［1-3］。為此，本實驗從對大鼠實驗性心肌梗死的的保護作用方面探討七十味珍珠丸抗心肌缺血性損傷的作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SD成年雄性大鼠36只，清潔級，體質量(200±20)g，由青海省實驗動物中心提供，合格證號:青醫動管001號，購回后適應性喂養24 h。

1.2 試劑與藥品 藏藥七十味珍珠丸(金訶藏藥生產，批號:080916)，用前研磨成粉，以蒸餾水稀釋為每1 mL溶液含生藥0.5 g；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CK)試劑盒均購自南京建成生物工程研究所；灌注液(碳素墨水與多聚甲醛按6∶1混勻制成)。

1.3 儀器 BL420-E生物信號采集系統(成都泰盟)；Olympus光學顯微鏡；LD4-2A離心機(北京醫用離心機廠)；750型全自動生化分析儀(日本東芝)；HX-300動物呼吸機(成都泰盟)；Motic6.0數碼醫學圖象分析系統(廈門麥克奧迪儀器儀表有限公司)。

2 方法與結果

2.1 分組和給藥 36只大鼠隨機分為3組，每組12只(6只用于血清酶學、SOD活性、MDA水平測定，6只用于大鼠心肌微血管形態學觀察)，即假手術組、模型組、藏藥七十味珍珠丸組(簡稱藏藥組)。造模前7 d，藏藥組大鼠灌胃給予七十味珍珠丸水溶液5 g/kg，模型組及假手術組大鼠給予生理鹽水10 mL/kg。每天1次，共7次，末次給藥30 min后，實施手術。

2.2 模型的制作 參考文獻方法［4］加以改進，大鼠用鹽酸氯胺酮(80 mg/kg)腹腔麻醉，呼吸機輔助呼吸，確定心搏位置，在心搏最明顯處沿胸骨左緣剪開3～5肋骨，打開胸腔，輕輕擠壓胸腔，暴露心臟，剪開心包，于左心耳根部下方2 mm處進針，肺動脈圓錐出針，結扎冠狀動脈左前降支，然后逐層縫合胸壁，開胸前后及時記錄Ⅱ導聯心電圖，以結扎部位以下變白，心電圖出現ST段弓背向上明顯抬高為造模成功，造模后動物單籠飼養。

2.3 統計學處理 應用SPSS13.0軟件進行統計分析。數據均以表示，顯著性檢驗采用方差分析和SNK-q檢驗，顯著性檢驗水準α=0.05。

2.4 血清酶測定 各組大鼠均于缺血24 h后心臟取血，離心后用生化分析儀測定血清LDH和CK。與模型組比較，七十味珍珠丸能顯著降低血清中LDH和CK的釋放(P＜0.05)，結果見表1。

表1 各組大鼠心肌缺血后血清酶LDH、CK的變化(n=6，)

表1 各組大鼠心肌缺血后血清酶LDH、CK的變化(n=6，)

注:與假手術組相比，★P＜0.05；與模型組相比，◇P＜0.05。

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2.5 心肌組織SOD活性和MDA定量的測定 缺血24 h后取出心臟，用冰冷的生理鹽水沖洗后制備成10%和5%的組織勻漿，嚴格按照試劑盒說明測定心肌組織SOD活性及MDA水平。與模型組比較，七十味珍珠丸顯著升高心肌SOD活性，降低MDA水平(P＜0.05)，結果見表2。

表2 各組大鼠心肌缺血后心肌組織SOD、MDA的變化(n=6，)

表2 各組大鼠心肌缺血后心肌組織SOD、MDA的變化(n=6，)

注:與假手術組相比，★P＜0.05；與模型組相比，◇P＜0.05。

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2.6 心肌微血管面密度和面積的定量分析 缺血24 h后進行活體灌注。①迅速夾閉大鼠主動脈，腹主動脈及上、下腔靜脈；②以玻璃注射器抽取配好的灌注液，接上針頭，插入左心室，以均勻恒定壓力緩推注灌注液，待心臟顯黑色，呈充盈狀態，連同玻璃注射器一同放入冰箱中冷藏24 h后取下心臟，取冠狀動脈左前降支供血區心尖部及左室前壁心肌組織(略大于該動脈灌注區)，進行－20℃恒冷箱切片，切片厚度10 μm；③每只動物連續取4張切片，用Motic6.0數碼醫學圖象分析系統對灌注微血管面密度和面積進行定量分析，結果見表3。

表3 心肌微血管面密度及面積百分比的比較(n=6，)

表3 心肌微血管面密度及面積百分比的比較(n=6，)

注:與假手術組相比，★P＜0.05；與模型組相比，◇P＜0.05。

組別 例數 心肌微血管面密度/(個·mm－2)面積百分比/%假手術組6 16.5±1.6 18.4±2.1模型組 6 4.8±1.4★ 3.8±1.0★藏藥組 6 8.5±1.7★◇ 7.3±1.5★◇

3 討論

七十味珍珠丸具有調和氣血，通經活血通絡的功能，能協調各臟腑功能，加強機體氣血運行，改善心血管血液循環［3］；而促進缺血心肌區域側支循環的建立、健全動脈血管的新生，是目前國際心血管病學界的研究熱點。在正常心臟中，存在著冠狀動脈的吻合通路，但其內僅有少量的血液流通，基本上屬于潛在性的吻合:口徑小，流量低。但當局部心肌缺氧和壓力梯度改變時，可刺激側枝血管的構建。冠脈側枝循環的建立能減輕心肌缺血壞死，預防和延緩缺血性心臟病和室壁瘤形成，改善臨床癥狀和預后。血管面密度是直接反映側枝血管形成最可靠的解剖學指標［5］；而心肌缺血患者血清中的CK、LDH水平是反映心肌組織受損情況敏感的生化指標［6］。本實驗結果表明，模型組缺血心肌組織微循環受到嚴重損傷，缺血后24 h血管面密度、面積驟減，而七十味珍珠丸預處理組可起到改善側枝循環的效應，快速建立有效的功能性側枝循環，增加冠脈血流量，升高心肌SOD活性，降低MDA水平，減輕心肌細胞脂質過氧化程度［7-8］，顯著降低冠脈結扎致心肌梗塞大鼠血清中LDH和CK的釋放，說明七十味珍珠丸可通過促進缺血心肌區域側支循環的建立，從而增加心肌供血，增強自由基清除劑的功能，阻止心肌脂質過氧化，減輕心肌損傷的程度。

［1］蘭 科.藏藥七十味珍珠丸治療神經及血管疾病102例療效觀察［J］. 中國民族醫藥雜志，1996，2(3):20-21.

［2］巴依斯合林，胡 輝.藏藥七十味珍珠丸的研究進展［J］.新疆中醫藥，2005，23(5):82-83.

［3］陳惠新，陳秋紅.藏藥七十味珍珠丸對心絞痛療效微循環等的影響［J］. 遼寧中醫雜志，2000，27(3):109.

［4］肖 駿，佘強，羅開良，等.大鼠慢性心肌梗死模型制備的改進［J］.四川動物，2008，27(3):396-39

［5］王大英，李 勇，范維琥.麝香保心丸對心肌梗塞大鼠梗塞面積和血管新生作用［J］. 中成藥，2004，26(11):912-915.

［6］覃秀川，郭新文，睢大員，等.人參Rb組皂苷對急性心肌梗塞大鼠自由基代謝的影響［J］.吉林中醫藥，2002，22(3):52-53.

［7］Zhang G X，Kimura S，Nishiyama A，et al.Cardiac oxidative stress in acute and chronic isoproterenol-infused rats ［J］.Cardiovasc Res，2005，65(1):230-238.

［8］郭 群，陳水英，張作明，等.心肌缺血-再灌注損傷與氧自由基關系的研究［J］. 陜西醫學雜志，2006，35(8):932-941.