生脈丹咀嚼片對大鼠急性心肌缺血的影響△

鄧奕,曹亮,丁崗,2,3,王振中.2.3,蕭偉,2,3*

(1.江蘇康緣藥業股份有限公司，江蘇 連云港 222001；2.中藥制藥過程新技術國家重點實驗室,江蘇 連云港 222001；3.江蘇省企業院士工作站,江蘇 連云港 222001)

生脈丹咀嚼片對大鼠急性心肌缺血的影響△

鄧奕1,曹亮1,丁崗1,2,3,王振中1.2.3,蕭偉1,2,3*

(1.江蘇康緣藥業股份有限公司，江蘇 連云港 222001；2.中藥制藥過程新技術國家重點實驗室,江蘇 連云港 222001；3.江蘇省企業院士工作站,江蘇 連云港 222001)

目的觀察生脈丹咀嚼片對冠脈結扎及垂體后葉素致大鼠心肌缺血模型的影響。方法給予生脈丹咀嚼片7 d后，采用結扎左冠狀動脈復制大鼠急性心肌梗死模型，TTC染色后計算梗死心肌占心室的百分比；采用垂體后葉素注射致大鼠急性心肌缺血模型，觀察給予生脈丹咀嚼片7 d后對造模后心電圖ST、T波的影響。結果生脈丹咀嚼片各劑量組均可以不同程度地降低心肌梗死范圍，差異具有統計學(P<0.05)；生脈丹咀嚼片各劑量組能減少大鼠心電圖的T波和ST段在給予垂體后葉素30 s內的上抬幅度，和模型組比較具有統計學差異(P<0.05，P<0.01)。結論生脈丹咀嚼片對大鼠急性心肌缺血具有一定的保護作用。

生脈丹咀嚼片；心肌缺血；心肌梗死；心電圖ST

冠心病心絞痛相當于中醫胸痹心痛的范疇，早在《內經·素問》中就有對此病的描述、預后分析及治療的記載。張仲景《金匱要略》列專篇對其論述，并創立了治療心絞痛的治療體系。近年來的研究提示中醫藥在治療冠心病心絞痛方面具有速效、療效穩定、毒副作用小等優點，在中成藥的研究開發等方面亦進行了大量的工作，為冠心病的防治做出了突出的貢獻。然而，當前的國內中成藥市場上中成藥的功能比較單一，或者以活血化瘀止痛為主，或者以芳香開竅急救為主；或者以益氣、養陰培本為主；尚缺乏針對氣陰兩虛、瘀阻心脈型胸痹的藥物。而我們在臨床實踐中觀察到，胸痹心痛(冠心病心絞痛)往往由多種危險因素長期作用于人體后發生，多發于40歲以上的中老年人，其證往往虛實夾雜，本虛標實。單純實證或虛證非常少見。根據這一臨床實際，我們以古典名方“生脈散”和“丹參散”為基礎，結合臨床病癥特點和多年診治冠心病的經驗，配伍組合為生脈丹咀嚼片，既針對患者氣陰不足的本虛，又充分考慮病發時瘀血痹阻的標實，經過數年臨床實踐，證實生脈丹咀嚼片療效較單用益氣養陰或活血化瘀治法為優。

生脈丹咀嚼片由紅參、麥冬、五味子和丹參等藥物組成，具有益氣養陰、活血化瘀、通脈止痛的功能。對單味藥的研究文獻表明，人參具有抗缺氧和保護心臟的作用，麥冬具有改善急性心肌缺血、心臟血流動力學的作用，五味子能顯著提高耐缺氧能力，并具有增強抗氧化酶活性的作用，丹參對心血管系統的影響可表現為擴張冠脈、改善微循環等，并能縮小實驗動物心肌梗死面積[1-2]。

我們通過一系列藥效模型，驗證了生脈丹復方制劑在實驗性心肌缺血模型中的藥效作用，本文主要采用結扎冠狀動脈致心肌缺血及垂體后葉素致心肌缺血的方法，研究生脈丹咀嚼片對大鼠急性心肌缺血的影響。

1 材料

1.1 藥品與試劑

生脈丹咀嚼片為薄膜衣片，為異型片，除去包衣后，顯淡棕色，味酸甜，微苦，口服給藥，每片含浸膏0.338 g，1 g浸膏含3.7 g飲片，擬臨床人日用量為11.25 g 飲片·(60 kg)-1(江蘇康緣藥業股份有限公司，批號：20050310)；垂體后葉素注射液(南京新百藥業有限公司，批號：030902)；硝酸異山梨酯片(南京白敬宇制藥廠，批號：20040301)；丹參片(上海雷允上藥業有限公司，批號：0404031)；水合氯醛(國藥集團化學試劑有限公司，批號：20040420)；0.9%氯化鈉注射液(南京小營制藥廠，批號：2005052505)；其余試劑均為分析純。

1.2 儀器

RM-6000八道生理記錄儀及附件(日本NIHON KOHDEN公司)；8s型PowerLab生命信息處理系統和Chart v5.2軟件(澳大利亞ADInstruments公司)；DH140人工呼吸器(浙江醫科大學醫學儀器實驗廠)；LDZ5-2型離心機(北京醫用離心機廠)；KHW-501型恒溫水槽(江蘇省昆山市淀山湖檢測儀器廠)；JA1003上皿電子天平(上海精科電子天平廠)；MELLTER-AE240電子天平(奧賽斯國際貿易上海有限公司)；DGF30/23-ⅢA型電熱鼓風干燥箱(南京實驗儀器廠)。

1.3 動物

清潔級SD大鼠，雄性，體重180～220 g，由南京軍區南京總醫院提供，生產許可證：SCXK(蘇)2003-0004，使用許可證號：SYXK(蘇)2003-0029。

2 方法

2.1 對大鼠冠脈結扎的影響

SD大鼠60只，隨機分為6組，每組10只。即正常對照組，模型組，陽性藥組和生脈丹咀嚼片小、中、大劑量組。陽性藥組灌胃給予丹參片1.0 g飲片·kg-1，生脈丹咀嚼片小、中、大劑量組分別灌胃給予生脈丹咀嚼片0.5 g飲片·kg-1、1.0 g飲片·kg-1、2.0 g飲片·kg-1，給藥容積為10 mL·kg-1，正常對照組和模型組灌胃給予等容積蒸餾水，連續給藥7 d。

給藥7 d后1 h，水合氯醛(350 mg·kg-1)腹腔注射麻醉，仰臥固定于手術臺，氣管插管連接到呼吸機，進行人工呼吸。胸部去毛、消毒，沿左鎖骨中線縱行切開皮膚約2 cm，自左側4～5肋間鈍性分離肌肉，打開胸腔，剪開心包，輕壓右側胸廓，擠出心臟。在動脈圓錐與左心耳之間用5/0縫合線結扎左冠狀動脈(LAD)后，迅速將心臟送回胸腔，立即縫合胸壁[1]，停止人工呼吸。結扎LAD 24 h后，脫頸椎處死大鼠，同時開胸取心臟，再沿冠狀溝去除心房組織，稱心室濕重。平行房室溝將心室橫切5片，放置于37 ℃的0.5%TTC磷酸鹽緩沖液中染色。分離心肌中梗死區(不染色者)并稱量其濕重。計算梗死心肌占心室的百分比[3-5]。

2.2 對垂體后葉素致心肌損傷的影響

挑選心電圖合格的SD大鼠60只，隨機分為6組，每組10只。即正常對照組，模型組，陽性藥組和生脈丹咀嚼片小、中、大劑量組。陽性藥組灌胃給予硝酸異山梨酯片5 mg·kg-1，生脈丹咀嚼片小、中、大劑量組分別灌胃給予生脈丹咀嚼片0.5 g飲片·kg-1(臨床等效劑量1/2倍)、1.0 g飲片·kg-1(臨床等效劑量)、2.0 g飲片·kg-1(臨床等效劑量2倍)，給藥容積為10 mL·kg-1，正常對照組和模型組灌胃給予等容積蒸餾水，連續給藥7 d。

第7日給藥1 h后，水合氯醛麻醉(350 mg·kg-1，腹腔注射)，測定一段時間正常心電圖舌靜脈給予垂體后葉素(0.5 U·kg-1)，5～10 s內給完，測定給藥后5 s、10 s、20 s、30 s、1 min、5 min、10 min時的心電圖，觀察藥物對給予垂體后葉素后心電圖ST、T波的影響[5-6]。

2.3 統計方法

3 結果

3.1 生脈丹咀嚼片對大鼠冠脈結扎的影響

正常對照組大鼠心肌無梗死，模型組大鼠出現明顯的心肌梗死，生脈丹咀嚼片各劑量組均可以不同程度地降低心肌梗死范圍，具有統計學差異(P<0.05)。表明生脈丹咀嚼片對大鼠心肌缺血具有一定的保護作用。結果見表1。

表1 生脈丹咀嚼片對大鼠冠脈結扎心肌梗死范圍的影響

注：與模型組比較，*P<0.05

3.2 生脈丹咀嚼片對垂體后葉素致心肌損傷的影響

模型組大鼠心電圖的T波和ST段在給予垂體后葉素30 s內顯著上抬，出現第一期心電圖的變化，30 s后出現T波低平、雙向、倒置P-R及Q-T間期延長等第二期心電圖變化；給藥各組動物心電圖的T波和ST段在給予垂體后葉素30 s內也呈上升趨勢，但和模型組比較，上抬幅度顯著降低，具有統計學差異(P<0.05，P<0.01)。結果見表2、3。

表2 生脈丹咀嚼片對垂體后葉素致心肌損傷大鼠心電圖ST段的影響 /mv

注：與正常對照組比較，△P<0.05，△△P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；下同。

表3 生脈丹咀嚼片對垂體后葉素致心肌損傷大鼠心電圖T波的影響 /mv

4 討論

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)是心血管疾病的重要死亡病因，也是臨床猝死的常見癥狀之一。心肌梗死大多是在冠狀動脈長期和急劇病變的基礎上，冠狀動脈的血流急劇減少或中斷，使相應的心肌出現嚴重而持久的急性缺血，最終導致心肌的缺血性壞死[7]。本文采用大鼠冠脈結扎建立急性心肌梗死模型，經過TTC染色后計算梗死心肌占心室的百分比，從數據中可以得出模型組大鼠出現明顯的心肌梗死，生脈丹咀嚼片高、中、低劑量組均能較好地保護心肌組織，減少心肌缺血模型大鼠心肌梗死范圍。

冠脈痙攣是導致心肌急性缺血的主要原因之一，垂體后葉素(Pit)包含加壓素和催產素，可作用于加壓素V1受體，促使全身血管(包括冠脈) 收縮，冠脈流量減少，心電圖改變，與臨床上變異性心絞痛的發病過程十分相似，是誘導大鼠急性心肌缺血的經典模型[8]。Pit通過誘發冠狀動脈痙攣而致急性心肌缺血，出現異常心電圖改變，主要反映在ST段、T波異常以及出現心律失常。正常大鼠注射Pit后心電圖變化(Ⅱ導聯) 分為兩期，第1期：注射Pit后即刻至30 s，T 波升高、ST段抬高0.l mv以上；第2期：注射后30 s至數分鐘，T波低平、雙向、倒置，心率變慢，P-R及Q-T間期延長[9]。能防止或減輕第1期或第2期心電圖變化的藥物，可以認為對該模型有效。

本試驗中給予Pit后，模型組大鼠心電圖的T波和ST段在給予垂體后葉素30 s內顯著上抬，出現第1期心電圖的變化，30 s后出現第2期心電圖變化；給藥各組動物心電圖的T波和ST段在給予垂體后葉素30 s內也呈上升趨勢，但和模型組比較，上抬幅度顯著降低，說明生脈丹咀嚼片對垂體后葉素導致的大鼠心肌缺血有一定的改善作用。

本實驗從缺血面積、心電圖方面證實了生脈丹咀嚼片對大鼠心肌缺血模型具有確切的保護作用，其效果明顯，值得進一步開發應用。

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[2] 楊英.丹參提取物對麻醉大鼠血流動力學的影響[J].中華醫護雜志，2007，4(4)：292-293.

[3] 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學[M].第二版.北京：人民衛生出版社，2002：1201-1203.

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[7] 陳修，陳維洲，曾貴云，等.心血管藥理學[M].北京：人民衛生出版社，1997：397-406.

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[9] 吳偉康，侯 燦，羅漢川，等.垂體后葉素心肌缺血模型再探[J].中國病理生理雜志，1993，9(2)：124.

EffectofShengmaidanChewableTabletsonBloodLipidandHemorheologyinHyperlipedemiaModelRats

DENG Yi1，CAO Liang1，DING Gang1,2,3，WANG Zhen-zhong1,2,3，XIAO Wei1,2,3

(1.JiangsuKanionPharmarceutical，Ltd.，Lianyungang222001，China；2.StateKeyLaboratoryofPharmaceuticalProcessNew-techforChineseMedicine，Lianyungang222001，China；3.EnterprisesAcademicianWorkstationsinJiangsuProvince，Lianyungang222001，China)

Objective：To observe the cardioprotective effect of Shengmaidan Chewable tablets on rats with acute myocardial ischemia induced.MethodsThe acute myocardial ischemia model was induced by ligation of left anterior descending coronary artery at the distal one third segment in opened chest rats.The infarct area showed by TTC stain after ligation.The Ⅱ-lead electrocardiogram examined the myocardial injury model induced by pituitrin.ResultsCompared with model group，all groups using different dosage Shengmaidan Chewable tablets could reduce the area of myocardial infarction(P<0.05).Furthermore，three dosage of Shengmaidan Chewable tablets lowered the elevation of S-T segment and the amplitude of T wave in the electrocardiograms of rats.ConclusionShengmaidan Chewable tablets has obvious protective effect against acute myocardial ischemia in rats.

Shengmaidan Chewable tablets；Myocardial ischemia；Pituitrin；Coronary artery ligation

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中藥治療心腦血管疾病有效成分組(群)的創新藥物孵化基地(2011ZX09401-014)

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蕭偉，E-mail：qly099@hotmail.com

2012-05-15)