轉錄因子Twist及其相關因子N-cadherin在胰腺癌中的表達及意義

張喆 陳少夫

·論著·

轉錄因子Twist及其相關因子N-cadherin在胰腺癌中的表達及意義

張喆 陳少夫

目的探討轉錄因子Twist及其下游相關因子N-cadherin在人胰腺癌組織中的表達及與腫瘤臨床病理特征、患者預后的關系。方法采用免疫組化MaxVision兩步法分別檢測62例胰腺癌組織和10例正常胰腺組織中Twist及N-cadherin的表達，分析二者表達與臨床病理特征及患者預后的相關性。結果Twist在胰腺癌組織的陽性表達率明顯高于正常胰腺組織(96.8%比30.0%,P<0.01)，N-cadherin在胰腺癌組織的陽性表達率也明顯高于正常胰腺組織(75.8%比0,P<0.01)，但兩者的表達無明顯相關性(r=0.100，P=0.441)。Twist及N-cadherin表達與胰腺癌TNM分期、淋巴結轉移、門靜脈或神經浸潤、腫瘤部位均密切相關(P值均<0.05)，與患者年齡、性別及腫瘤分化程度均無明顯相關性(P值均>0.05)。胰腺癌患者術后生存期隨Twist表達的增強而縮短，但與N-cadherin表達強度無明顯相關性。TNM分期、Twist表達強度是影響胰腺癌患者預后的獨立因素。結論胰腺癌組織Twist及N-cadherin均高表達，其表達與胰腺癌的惡性生物學行為相關，Twist的異常表達可能是評估胰腺癌患者預后的潛在指標。

胰腺腫瘤； Twist轉錄因子； N-cadherin

上皮-間質間轉化(epithelial-to-mesenchymal transition, EMT)和癌細胞脫離原發灶是惡性腫瘤完成轉移的關鍵步驟[1-2]。EMT過程中所表現出的細胞極性紊亂、細胞間黏附力降低以及細胞遷徙能力增強等特征與N-cadherin表達增加相關[3]。N-cadherin的異常表達還與調節腫瘤的抗凋亡信號轉導有關[4]。近年來研究表明，轉錄因子Twist參與了腫瘤的形成、侵襲及轉移的過程[5]，還與惡性腫瘤的耐藥密切相關[6]。本研究檢測胰腺癌組織Twist、N-cadherin的表達，探討其與胰腺癌臨床病理特征及患者預后的關系。

材料與方法

一、研究對象

收集中國醫科大學附屬盛京醫院2008年1月至2010年6月胰腺癌手術切除后石蠟包埋標本62例，均經病理證實為胰腺導管腺癌。患者術前未接受任何抗癌治療。另選取十二指腸腫物切除術所獲得的10例正常胰腺組織作為對照。隨訪至2011年12月31日，至截止隨訪日期，共病死57例，存活5例，無失隨訪者，生存期從術后算起。

二、Twist、N-cadherin蛋白檢測

采用快捷免疫組化MaxVision兩步法檢測，試劑盒購自福州邁新生物技術開發有限公司，按說明書操作。兔抗人SC-15393 Twist(H-81)多抗購自美國SantaCruz生物技術公司，鼠抗人N-cadherin(ZM-0094)單抗購自北京中杉金橋生物技術公司。工作濃度均為1∶100。

Twist陽性表達于細胞質或細胞核，呈淺黃到棕褐色。N-cadherin陽性表達于細胞質或細胞膜，呈棕黃色到棕褐色。每張切片隨機選取10個400倍視野，每個視野計數100個細胞，計算陽性細胞比例，陽性細胞占0、1%～49%、50%～70%、>70%分別計為0～3分，即-、+、++、+++。

三、統計學處理

數據采用SPSS13.0統計軟件分析。計數資料采用χ2檢驗和Fisher精確概率法，陽性表達與腫瘤臨床病理特征間的相關性分析采用Spearman等級相關分析。單因素生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-rank檢驗。多因素生存分析采用Cox比例風險模型。P<0.05為差異具有統計學意義。

結 果

一、Twist、N-cadherin在胰腺癌及正常胰腺組織的表達

Twist在胰腺癌組織的陽性表達率為96.8%(60/62)，其中表達+、++、+++者分別為30、26、4例；在正常胰腺組織的陽性表達率為30%(3/10)，其中表達+、++、+++者分別為2、1、0例，二者差異具有統計學意義(χ2=35.265，P<0.01，圖1)。N-cadherin在胰腺癌組織的陽性表達率為75.8%(47/62)，其中表達+、++、+++者分別為25、16、6例；在正常胰腺組織中均為陰性表達(0/10)，二者差異具有統計學意義(χ2=21.832，P<0.01，圖1)。

胰腺癌組織Twist與N-cadherin的表達無明顯相關性(r=0.100，P=0.441，表1)。

圖1Twist、N-cadherin在正常胰腺組織(a、b)及胰腺癌組織(c、d)的表達(×100、200)

表1 胰腺癌組織Twist表達與N-cadherin表達的相關性

二、Twist、N-cadherin表達與臨床病理特征的關系

Twist蛋白表達與胰腺癌TNM分期、淋巴結轉移、門靜脈或神經浸潤、腫瘤發生部位密切相關(P值均<0.05)。N-cadherin蛋白表達也與TNM分期、淋巴結轉移、門靜脈或神經浸潤、腫瘤發生部位密切相關(P值均<0.05)。兩種表達與患者年齡、性別及腫瘤分化程度均無明顯相關性(P值均>0.05，表2)。

三、Twist、N-cadherin表達與患者術后生存期的關系

Twist-、+、++、+++表達組患者的術后平均生存期分別為24、13.6、4.1、3.3個月，中位生存期分別為24、14、4.3、3.7個月，患者生存期隨Twist表達的增強而縮短(P<0.05)。N-cadherin表達-、+、++、+++患者的平均生存期分別為10.2、9.6、7.9、8.0個月，中位生存期分別為8.5、10.3、6.3、11.0個月，患者術后生存期與N-cadherin表達強度無明顯相關性(P>0.05)。

經單因素分析，胰腺癌腫瘤部位、TNM分期、淋巴結轉移、遠處臟器轉移、門靜脈或神經浸潤、Twist表達強度、切緣陽性與胰腺癌患者術后生存率均顯著相關(P值均<0.05)。將以上7個指標納入Cox比例風險模型進行多因素回歸分析，影響胰腺癌患者預后的獨立因素是TNM分期、Twist表達強度(P值均<0.05，圖2，表3)。

表2 胰腺癌Twist、N-cadherin表達與臨床病理特征的關系

圖2 各病理參數對患者術后生存期的影響

參數單因素分析P值多因素分析P值RR95%CI年齡0．2880．4251．2900．691～2．410性別0．5540．3111．3450．758～2．387腫瘤部位0．0070．8971．0440．542～2．011TNM分期0．0000．0141．7401．121～2．701淋巴結轉移0．0060．8871．0520．520～2．128切緣癌細胞殘留0．0400．8790．9020．239～3．410門靜脈或神經浸潤0．000分化程度0．9880．7500．9230．564～1．511Twist表達0．0000．00033．2506．377～173．358N?cadherin表達0．0950．5890．8320．428～1．618遠處轉移0．0060．7721．3790．157～12．111

討 論

EMT與乳腺癌、胃癌、大腸癌等多種惡性腫瘤的侵襲、轉移及預后密切相關[7-9]。EMT的重要特征之一是作為間質標志的N-cadherin表達上調[10]。本研究結果顯示，胰腺癌組織N-cadherin陽性表達率較正常胰腺組織明顯升高，其高表達與胰腺癌的TNM分期、淋巴結轉移、門靜脈或神經浸潤等密切相關，提示N-cadherin不僅與胰腺癌的發生有關，而且在胰腺癌侵襲轉移過程中起重要作用。但N-cadherin的表達與胰腺癌患者術后生存率無關，提示N-cadherin在胰腺癌的浸潤轉移過程中可能并非起主導作用。

Twist在惡性腫瘤的侵襲轉移過程中起重要作用[11]。有研究表明，胃癌組織中Twist的陽性表達率較正常胃黏膜組織明顯升高[8]。本研究結果顯示，Twist在胰腺癌組織的陽性表達率較正常胰腺組織明顯升高，其表達與胰腺癌TNM分期、淋巴結轉移、門靜脈或神經浸潤等密切相關，其陽性表達強度與胰腺癌患者術后生存期密切相關，提示Twist表達的上調不僅與胰腺癌的發生密切相關，還可以使胰腺癌細胞獲得更為惡性的生物學行為，促進腫瘤的播散和轉移。

N-cadherin是Twist的下游相關因子，Twist的過量表達可上調N-cadherin的表達[7]。但有研究報道，浸潤性乳腺癌組織中Twist與N-cadherin表達呈顯著負相關[12]。本研究結果顯示，胰腺癌組織Twist與N-cadherin的表達無顯著相關性，說明Twist與N-cadherin表達的相關性在不同組織中是不一致的，其原因有待于進一步探討。

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ExpressionandroleofTwistandN-cadherininpancreaticcancer

ZHANGZhe,CHENShao-fu.

TheSecondDepartmentofGastroenterology,ShengjingHospital,ChinaMedicalUniversity,Shenyang110004,China

Correspondingauthor:CHENShao-fu,Email:csf196211@yahoo.com.cn

ObjectiveTo investigate the expression of Twist and N-cadherin in pancreatic cancer, and to study its relationship with clinicopathological parameters and patients′ prognosis.MethodsThe expression of the Twist and N-cadherin in 62 tissue samples from patients with pancreatic ductal adencocarcinoma and 10 normal pancreatic tissue samples was determined by using immunohistochemistry MaxVision two step method,and the relationship with clinicopathological parameters and patients′ prognosis was analyzed.ResultsThe positive expression rate of Twist in pancreatic cancer was higher than that of normal pancreatic tissues (96.8%vs. 30%,P<0.01), and the positive expression rate of N-cadherin was higher than that of normal pancreatic tissues (75.8%vs. 0,P<0.01), but there was no correlation between them (r=0.100，P=0.441). The expressions of Twist and N-cadherin was significantly correlated with TNM stage, lymph node metastasis, infiltration of portal vein or nerves and tumor location (P<0.05), but not with age, gender and degree of differentiation (P>0.05). The post-operative survival of patients decreased with the increasing Twist expression, but the survival was not associated with the expression of N-cadherin. TNM stage, the expression of Twist was independent predictive factors of prognosis for pancreatic cancer patients.ConclusionsTwist and N-cadherin are highly expressed in pancreatic cancer, and the expression was associated malignant behavior of pancreatic cancer. The abnormal expression of Twist may be a potential marker for prognosis evaluation of pancreatic cancer patients.

Pancertic neoplasms; Twist transcription factor; N-cadherin

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2012.04.007

110004 沈陽，中國醫科大學附屬盛京醫院第二消化內科

陳少夫，Email:csf196211@yahoo.com.cn

2012-03-23)

(本文編輯：屠振興)