輻照對鹽酸異丙腎上腺素注射液含量變化的影響

向明鳳，盧 華，管海燕，謝 紅，盧來春

(1.中國人民解放軍第三軍醫大學大坪醫院野戰外科研究所藥劑科，重慶 400042;2.山東省即墨市中醫院婦產科，山東 青島 266000)

鹽酸異丙腎上腺素注射液為無色澄明液體，為β受體激動劑[1]。其注射劑需在遮光、密閉、陰涼處進行保存[2]。近幾年全球頻繁出現核泄漏事件，促使一些地區的自然環境發生了劇烈變化，讓暴露于60Co-γ射線輻照下的生物體受到不可恢復的損失和破壞的威脅增多，同時影響常用藥品中有效物質的物理性能和化學組分等穩定性因素相應增加。因此，考察核輻射環境下藥品的穩定性非常有價值，特別是針對一些常備急救藥品的穩定性研究[2]。由于目前尚未見考察藥品在核輻射下穩定性的相關報道。本試驗中設計以鹽酸異丙腎上腺素注射劑為模型藥物，初步考察其吸收不同輻照劑量后含量變化，為輻照下藥品的存貯提供參考。

1 儀器與試藥

輻照設備(Allanace型γ輻照裝置，60Co-γ射線，第三軍醫大學輻照研究中心提供);Agilent Technologies 1200 series高效液相色譜儀(美國安捷倫公司);Sartorius BT 124S電子分析天平(德國賽多利斯公司)。鹽酸異丙腎上腺素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100341-200702，含量99.2%);鹽酸異丙腎上腺素注射劑(上海禾豐制藥有限公司，規格為5 mL∶0.1 g，批號為100807);甲醇(色譜純);庚烷磺酸鈉為離子對試劑;其他均為分析純。

2 方法與結果

2.1 含量測定方法

2.1.1 色譜條件[2]與系統適用性試驗

色譜柱:Diamonsil Technology C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流動相:0.22%庚烷磺酸鈉溶液(用磷酸調pH至3.0)-甲醇(55∶45);檢測波長:280 nm;柱溫:30℃;流速:1.0 mL/min;進樣量:20μL。該色譜條件下，色譜圖如圖1。可見，陰性對照品溶液對測定無影響，主藥鹽酸異丙腎上腺素能與注射劑中的輔料較好分離。

圖1 高效液相色譜圖

2.1.2 溶液制備

精密稱取鹽酸異丙腎上腺素對照品0.010 0 mg，置100 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，即得質量濃度約為100μg/mL對照品溶液。精密量取鹽酸異丙腎上腺素注射液1 mL，置100 mL容量瓶中，流動相定容，移取1 mL，置100 mL容量瓶中，流動相定容，搖勻，即得10μg/mL的注射液溶液。精密量取輻照后的鹽酸異丙腎上腺素注射液1 mL，按上述注射液溶液配制方法配制，即得10μg/mL的供試品溶液。以流動相為陰性對照品溶液。

2.1.3 方法學考察

線性關系考察:取對照品溶液，配成質量濃度為2.5，5.0，7.5，10.0，12.5 μg/mL 的溶液，分別進樣 20 μL。記錄色譜圖，以質量濃度(C)為橫坐標、峰面積(A)為縱坐標作圖，得回歸方程A=12.412 3C+0.774 6，r=0.999 9(n=5)。結果表明，鹽酸異丙腎上腺素質量濃度在2.5～12.5μg/mL的范圍內與峰面積線性關系良好。

日內精密度考察:取對照品溶液，配成質量濃度為 4，5，6μg/mL的溶液各3份。依法進樣測定，記錄色譜峰面積。結果3個質量濃度的溶液的 RSD分別為0.46%，0.06%，0.19%(n=3)，均小于2%，表明方法日內精密度較好。

日間精密度與穩定性考察:取對照品溶液，配制成質量濃度為4，5，6μg/mL的溶液，密封避光于4℃保存。按2.1項下色譜條件，同一溶液進樣測定5 d，記錄色譜峰面積。結果3個質量濃度的溶液的 RSD分別為1.02%，0.74%，0.70%(n=3)，均小于2%，表明日間精密度較好，密封避光于4℃保存5 d內鹽酸異丙腎上腺素穩定性較好。

回收率試驗:精密移取線性關系考察項下對照品溶液(10μg/mL)，移取1，2，3 mL各3份，分別加入2.2項下腎上腺素注射液溶液3 mL，用流動相定容至 10 mL，配制成質量濃度為 4，5，6μg/mL的溶液，每個質量濃度平行配制3份，依法進樣測定，記錄色譜峰面積。結果3個質量濃度的溶液的回收率分別為99.21%，95.13%，95.66%，總體平均回收率為96.67%，RSD為2.29%，表明方法準確度較好。

2.2 輻照處理

以2010年版《中華人民共和國藥典(二部)》藥品常用輻射滅菌吸收劑量25 kGy為最大輻射吸收劑量[3]。取同一批號鹽酸異丙腎上腺素注射液，分為6組，每組3支，分別在60Co-γ射線放射源中一次性吸收 1，2，4，8，16，25 kGy 的輻照劑量后取出，待含量測定用。

2.3 輻照處理后樣品外觀、澄明度考察

吸收不同強度輻照劑量與未接受輻照處理的鹽酸異丙腎上腺素注射液外觀如圖2。吸收不同輻照劑量后鹽酸異丙腎上腺素注射液經燈檢，其注射液澄明度沒有變化，無沉淀產生;由圖2可知，注射液顏色隨吸收劑量增加而加深，但4 kGy以下時注射液顏色變化不明顯。

圖2 不同強度輻照后鹽酸異丙腎上腺素注射液

2.4 不同強度輻照后樣品含量測定

取輻照前及輻照后的樣品，以流動相配制理論質量濃度約為10μg/mL的待測溶液。分別按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜峰面積，計算含量。結果見表1。可見，隨著輻照強度的增加，含量有逐漸降低的趨勢，一次性吸收 1，2，4，8，16，25 kGy 輻照劑量后含量下降為未輻照前的98.64%，95.59%，95.40%，92.80%，86.03%，79.52%;8 kGy輻照后放置4個月，含量未見下降。

表1 輻照后鹽酸異丙腎上腺素含量(μg/mL，n=3)

將表 1 中一次性吸收 1，2，4，8，16，25 kGy 的輻照劑量的數據，以輻照強度(X)為橫坐標、質量濃度(Y)為縱坐標擬合回歸方程，得回歸方程 Y=-0.078X+9.89，r=0.991 0(n=6)。結果表明，樣品輻照后質量濃度變化呈一定的線性關系。

3 討論

與2010年版《中國藥典(二部)》鹽酸異丙腎上腺素含量測定方法中使用0.22%庚烷磺酸鈉溶液-甲醇=55∶45(用磷酸調pH至3.0)為流動相比較，本試驗含量測定方法中，僅在流動相pH調整順序上進行了改進，將藥典中調整流動相pH改為調整緩沖液pH，經方法學驗證，此方法能使鹽酸異丙腎上腺素與注射劑中其余輔料成分較好分離，方法精密度、準確度均較好，且減少檢測步驟及節省試劑，可有效提高效率、降低檢測成本。

本試驗結果顯示，鹽酸異丙腎上腺素注射液吸收不同強度的輻照劑量后，主藥含量隨吸收輻照劑量的增加而下降，且下降趨勢具有一定的線性特征;SPSS統計可知，輻照1 kGy對含量具有顯著影響，2，4，8，16，25 kGy 對含量影響極顯著，但吸收 8 kGy 輻照劑量以下的藥物含量下降幅度未至10%，在標示量的85%～110%之內[3]。試驗結果雖然在統計學上有顯著性差異，但注射劑質量在合格范圍之內，因此初步認為，吸收小于8 kGy的輻照劑量對鹽酸異丙腎上腺素注射液含量沒有顯著影響。鹽酸異丙腎上腺素注射液在吸收8 kGy輻照劑量后外觀變化不明顯，但含量下降至近標示量的85%，吸收大于8 kGy的輻照劑量后含量變化更顯著。因此，在吸收大于或等于8 kGy輻照劑量鹽酸異丙腎上腺素極度不穩定，應注意累積吸收在此輻照劑量之上對鹽酸異丙腎上腺素注射液進行防輻射貯存。

8 kGy輻照處理后放置4個月，與8 kGy輻照處理后立即測定含量比較，雖然統計結果顯示含量變化具有顯著性差異，但放置后含量沒有下降趨勢，反而為放置前含量的100.99%。因此，初步認為一次性吸收一定輻照劑量后，鹽酸異丙腎上腺素注射液放置過程中的含量沒有變化，但還需進一步考察長期放置影響，以進一步探究一次性吸收一定輻照劑量后其放置過程中的含量變化情況。

鹽酸異丙腎上腺素注射液經輻照后顏色發生了變化，根據圖1C中以及測定輻照1～25 kGy后藥物含量數據可知，自2 kGy輻照處理后主藥含量下降，注射劑顏色加深，說明因射線的能量使鹽酸異丙腎上腺素分解、組合成了某種物質，而導致了注射液顏色的變化，對此的研究還有待進一步深入。

[1]段 霖，王峰偉，黃海生.微量泵靜脈注射異丙腎上腺素搶救阿-斯綜合征臨床觀察[J].臨床誤診誤治，2007，20(5):18.

[2]徐 靖，盧 華，管海燕，等.輻照對呋塞米注射液含量的影響考察[J]. 中國藥房，2012，2(5):440-442.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:701-702，附錄191.