高效液相色譜法測定轉化糖電解質注射液中轉化糖含量

咸瑞卿，陳德俊，徐玉文

(山東省食品藥品檢驗所，山東 濟南 250101)

轉化糖電解質注射液是由葡萄糖與果糖等分子混合制成的同時含有電解質的復方制劑，適用于臨床需要非口服途徑補充水分或能源及電解質患者的補液治療，尤其適用于作為糖尿病患者的能量及電解質補充劑，燒、創傷，術后及感染等胰島素抵抗患者的能量及電解質補充劑[1-2]。目前YBH05732005，YBH21112005、第34版《美國藥典》[3]測定轉化糖含量的方法是利用果糖和葡萄糖的還原性，定量地將堿性酒石酸銅還原成氧化亞銅，從而通過測定生成的氧化亞銅質量計算出轉化糖的含量。但該方法不能分別測定兩種單糖的含量，而且操作煩瑣，重現性差。筆者采用高效液相色譜-紫外光檢測器(HPLC-UV)法同時測定葡萄糖和果糖的含量，簡便快速，分離效果、重現性、精密度良好，在常規質量分析中能更好地控制該制劑的質量，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀;CP225D型電子天平。D-無水葡萄糖對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號為110833-200904，含量100.0%);果糖對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號為100231-200904，含量100.0%);磷酸為色譜純，水為純化水;轉化糖電解質注射液(規格為250 mL:果糖6.25 g葡萄糖6.25 g，青島華仁藥業有限公司，批號分別為B1104001，B1104002，B1104003)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Sugar SH1011柱(8.0 mmID×300 mL);流動相:0.04 mol/L的磷酸溶液;流速:0.5 mL/min;檢測波長:195 nm;進樣量:20μL;柱溫:50℃。在此條件下，色譜圖見圖1。空白對照品溶液色譜圖在對照品溶液峰位置無干擾峰，葡萄糖與果糖分離度良好(大于1.9)，保留時間葡萄糖約為13.54 min、果糖約為14.47 min，理論板數均達15 000，表明該系統適用性良好。

2.2 溶液制備

分別精密稱取 D-無水葡萄糖、果糖對照品49.98 mg和50.05 mg，置10 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取樣品適量(約相當于轉化糖100 mg)，置10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取輔料適量，按處方比例配制，按供試品溶液制備方法制備空白對照品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察:精密量取對照品溶液 5，10，15，20，30，40，50μL進樣。以進樣量為橫坐標、峰面積為縱坐標作圖，用最小二乘法進行線性回歸。結果表明，葡萄糖進樣量在24.99～249.90μg范圍內，果糖在25.25～252.50μg范圍內分別與相應峰面積呈良好線性關系。葡萄糖和果糖的回歸方程分別為Y1=8.665X1+6.366(r1=1.000 0)和Y2=43.963X2+17.547(r2=1.000 0)。

加樣回收試驗:精密量取已知準確含量的同一樣品適量(約相當于轉化糖50 mg)，共取9份，分成3組，分別置10 mL量瓶中;另分別精密稱取 D-無水葡萄糖和果糖對照品0.501 0，0.504 8 g，置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取3，5，7 mL，各3份，置樣品的量瓶中加流動相稀釋至刻度，搖勻。進樣20μL，按外標法測定含量，計算回收率。結果見表1。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別在 0，1，2，5，10 h時進樣，依法測定。結果葡萄糖與果糖峰面積的 RSD分別為0.52%和0.68%，表明供試品溶液在10 h內穩定。

表1 加樣回收試驗測定結果(n=9)

精密度試驗:取同一對照品溶液，連續進樣6次。結果葡萄糖與果糖峰面積的 RSD分別為0.72%和0.57%，表明儀器精密度良好。

重復性試驗:取同一批樣品適量(約相當于轉化糖100 mg，批號為B1104001)共6份，分別置10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，依法測定。結果葡萄糖與果糖峰面積的 RSD分別為0.44%和0.42%，表明分析方法重復性良好。

2.4 樣品含量測定

取樣品3批，分別按2.2項下方法制備供試品溶液，精密量取對照品溶液和供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，依法測定。結果見表2。

3 討論

國內標準YBH05732005和YBH21112005參照第34版《美國藥典》[3]采用重量法測定轉化糖的含量，不能分別測定果糖與葡萄糖的含量，且過濾需用的G4垂熔坩堝(國內市售)不耐堿，導致回收率、重現性差。另采用高效液相色譜-蒸發光散射檢測法[4]、高效液相色譜-示差折光檢測法[5]等方法雖能分別測定葡萄糖和果糖的含量，但存在儀器昂貴、適用性不強等問題。

采用高效液相色譜-紫外光檢測器(HPLC-UV)法分別測定轉化糖電解質注射液中葡萄糖和果糖的含量，方法學考察結果表明，方法的重現性好，測定結果準確，為該制劑的質量控制與檢測提供了一種更加準確、方便、科學的方法。

表2 樣品含量測定結果(%)

[1]王歐明.含果糖制劑的臨床合理應用[J].中國醫院藥學雜志，2009，29(4):330-331.

[3]Multiple Electrolytes and Invert Sugar Injection.《美國藥典》[M].第34版.2011:2 674-2 677.

[4]楊 俊，劉江生，蔡繼寶，等.高效液相色譜-蒸發光散射檢測法測定煙草中的水溶性糖[J].分析化學研究簡報，2005，33(11):1 596-1 598.

[5]孫守兵.高效液相色譜法測定轉化糖電解質注射液中果糖和葡萄糖的含量[J].中國新藥與臨床雜志，2010，29(12):916-918.