半自動(dòng)生化分析儀測(cè)定總蛋白試劑盒(雙縮脲法)通用性研究

王剛林，陳海燕

(重慶醫(yī)療器械質(zhì)量檢驗(yàn)中心·重慶市醫(yī)療器械質(zhì)量與安全控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401147)

體外診斷試劑(盒)的臨床應(yīng)用越來越廣泛，所檢測(cè)出的結(jié)果已成為臨床醫(yī)生診斷疾病的輔助依據(jù)，有時(shí)甚至成為確診疾病的重要依據(jù)。目前，體外診斷試劑大多歸口于醫(yī)療器械管理，由于沒有統(tǒng)一的國家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，沒有統(tǒng)一的國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，質(zhì)量監(jiān)督管理部門難以對(duì)其產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控。筆者從檢測(cè)原理角度分析認(rèn)為，采用紫外分光光度法[1]測(cè)定的臨床生化類體外診斷試劑可以按產(chǎn)品執(zhí)行統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。為了考察分析的正確性，筆者選取常用的總蛋白試劑盒進(jìn)行驗(yàn)證，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

BASIC半自動(dòng)生化分析儀(法國Secomam公司);KHB Biohit可調(diào)移液器(芬蘭百得實(shí)驗(yàn)室儀器＜中國＞有限公司);HSG-ⅡC-4型恒溫水浴鍋(江蘇金壇中大儀器廠)?？偟鞍自噭┖?四川邁克科技有限責(zé)任公司，批號(hào)為1011071;中生北控生物科技股份有限公司，批號(hào)為110411;上海榮盛生物科技有限公司，批號(hào)為20110825;重慶百克生物科技有限公司，批號(hào)為20110601);70.0 g/L總蛋白標(biāo)準(zhǔn)液(四川邁克科技有限責(zé)任公司，批號(hào)為1011071;中生北控生物科技股份有限公司，批號(hào)為110411;上海榮盛生物科技有限公司，批號(hào)為20110825;重慶百克生物科技有限公司，批號(hào)為20110601);質(zhì)控血清(中生北控生物科技股份有限公司，批號(hào)為022541)。

1.2 試驗(yàn)方法

總蛋白試劑盒(雙縮脲法)由硫酸銅、碘化鉀、氫氧化鈉和酒石酸鉀鈉4種成分組成，臨床主要用于測(cè)定人血清中總蛋白的濃度。在堿性溶液中，肽鍵與銅離子結(jié)合，生成藍(lán)紫色化合物，在540 nm波長(zhǎng)處的吸光度與肽鍵的數(shù)量呈正比關(guān)系，可以據(jù)此計(jì)算蛋白質(zhì)含量[2]。采用半自動(dòng)生化分析儀，以質(zhì)控血清(或血清)測(cè)定不同廠家生產(chǎn)的總蛋白試劑盒。

2 結(jié)果

2.1 質(zhì)控血清測(cè)定

采用中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)的質(zhì)控血清(質(zhì)控血清總蛋白X±2 SD范圍為52.6～61.6 g/L)，分別取上述4個(gè)廠家生產(chǎn)的總蛋白試劑盒，按其相應(yīng)的使用說明書進(jìn)行試驗(yàn)，平行測(cè)定5次，取平均值。由表1可見，4個(gè)廠家的產(chǎn)品測(cè)定均值均在質(zhì)控血清值范圍內(nèi)。

表1 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

2.2 線性關(guān)系考察

取上述4個(gè)廠家的總蛋白試劑盒，分別用與試劑盒配套的標(biāo)準(zhǔn)品按其使用說明書進(jìn)行試驗(yàn)。取6支試管，其中1支為空白管，另5支為樣品管，按說明書要求分別加入不同量的總蛋白標(biāo)準(zhǔn)液、生理鹽水和雙縮脲試劑，混勻，置37℃反應(yīng)10 min。在540 nm波長(zhǎng)處以空白管調(diào)零，分別測(cè)定各管的吸光度，計(jì)算出相應(yīng)的 r值。結(jié)果見表1。

2.3 精密度試驗(yàn)

取4個(gè)廠家生產(chǎn)的總蛋白試劑盒，分別按其相應(yīng)的使用說明書中操作方法進(jìn)行操作，同時(shí)測(cè)定同一份血清標(biāo)本，測(cè)定20次，計(jì)算批內(nèi)精密度。結(jié)果見表1。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確度試驗(yàn)

以中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)的總蛋白標(biāo)準(zhǔn)液(70.0 g/L)作為標(biāo)準(zhǔn)品，以上述另外3個(gè)廠家生產(chǎn)的總蛋白標(biāo)準(zhǔn)液作為樣品，分別按標(biāo)準(zhǔn)品使用說明書進(jìn)行操作，平行測(cè)定5次，取平均值。結(jié)果見表1。

3 討論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，采用同一質(zhì)控血清測(cè)定不同廠家的總蛋白試劑盒，測(cè)定值均在質(zhì)控血清值范圍內(nèi)，且結(jié)果比較集中、偏差不大，線性關(guān)系良好，樣品的批內(nèi)精密度均小于1%。以中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)的總蛋白標(biāo)準(zhǔn)液為標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定的準(zhǔn)確度結(jié)果較好，能滿足體外診斷試劑不準(zhǔn)確性的要求。

對(duì)4個(gè)廠家同一產(chǎn)品的試驗(yàn)結(jié)果表明，采用半自動(dòng)生化分析儀測(cè)定不同廠家的總蛋白試劑盒，方法可行。同時(shí)，本試驗(yàn)也為該類產(chǎn)品制訂統(tǒng)一的國家質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:附錄ⅣA.

[2]中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].第3版.南京:東南大學(xué)出版社，2006:337.