半自動生化分析儀測定總蛋白試劑盒(雙縮脲法)通用性研究

王剛林，陳海燕

(重慶醫療器械質量檢驗中心·重慶市醫療器械質量與安全控制工程技術研究中心，重慶 401147)

體外診斷試劑(盒)的臨床應用越來越廣泛，所檢測出的結果已成為臨床醫生診斷疾病的輔助依據，有時甚至成為確診疾病的重要依據。目前，體外診斷試劑大多歸口于醫療器械管理，由于沒有統一的國家標準或行業標準，沒有統一的國家標準物質，質量監督管理部門難以對其產品進行質量監控。筆者從檢測原理角度分析認為，采用紫外分光光度法[1]測定的臨床生化類體外診斷試劑可以按產品執行統一的質量標準。為了考察分析的正確性，筆者選取常用的總蛋白試劑盒進行驗證，報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

BASIC半自動生化分析儀(法國Secomam公司);KHB Biohit可調移液器(芬蘭百得實驗室儀器＜中國＞有限公司);HSG-ⅡC-4型恒溫水浴鍋(江蘇金壇中大儀器廠)。總蛋白試劑盒(四川邁克科技有限責任公司，批號為1011071;中生北控生物科技股份有限公司，批號為110411;上海榮盛生物科技有限公司，批號為20110825;重慶百克生物科技有限公司，批號為20110601);70.0 g/L總蛋白標準液(四川邁克科技有限責任公司，批號為1011071;中生北控生物科技股份有限公司，批號為110411;上海榮盛生物科技有限公司，批號為20110825;重慶百克生物科技有限公司，批號為20110601);質控血清(中生北控生物科技股份有限公司，批號為022541)。

1.2 試驗方法

總蛋白試劑盒(雙縮脲法)由硫酸銅、碘化鉀、氫氧化鈉和酒石酸鉀鈉4種成分組成，臨床主要用于測定人血清中總蛋白的濃度。在堿性溶液中，肽鍵與銅離子結合，生成藍紫色化合物，在540 nm波長處的吸光度與肽鍵的數量呈正比關系，可以據此計算蛋白質含量[2]。采用半自動生化分析儀，以質控血清(或血清)測定不同廠家生產的總蛋白試劑盒。

2 結果

2.1 質控血清測定

采用中生北控生物科技股份有限公司生產的質控血清(質控血清總蛋白X±2 SD范圍為52.6～61.6 g/L)，分別取上述4個廠家生產的總蛋白試劑盒，按其相應的使用說明書進行試驗，平行測定5次，取平均值。由表1可見，4個廠家的產品測定均值均在質控血清值范圍內。

表1 驗證試驗結果

2.2 線性關系考察

取上述4個廠家的總蛋白試劑盒，分別用與試劑盒配套的標準品按其使用說明書進行試驗。取6支試管，其中1支為空白管，另5支為樣品管，按說明書要求分別加入不同量的總蛋白標準液、生理鹽水和雙縮脲試劑，混勻，置37℃反應10 min。在540 nm波長處以空白管調零，分別測定各管的吸光度，計算出相應的 r值。結果見表1。

2.3 精密度試驗

取4個廠家生產的總蛋白試劑盒，分別按其相應的使用說明書中操作方法進行操作，同時測定同一份血清標本，測定20次，計算批內精密度。結果見表1。

2.4 標準品準確度試驗

以中生北控生物科技股份有限公司生產的總蛋白標準液(70.0 g/L)作為標準品，以上述另外3個廠家生產的總蛋白標準液作為樣品，分別按標準品使用說明書進行操作，平行測定5次，取平均值。結果見表1。

3 討論

本試驗結果表明，采用同一質控血清測定不同廠家的總蛋白試劑盒，測定值均在質控血清值范圍內，且結果比較集中、偏差不大，線性關系良好，樣品的批內精密度均小于1%。以中生北控生物科技股份有限公司生產的總蛋白標準液為標準品測定的準確度結果較好，能滿足體外診斷試劑不準確性的要求。

對4個廠家同一產品的試驗結果表明，采用半自動生化分析儀測定不同廠家的總蛋白試劑盒，方法可行。同時，本試驗也為該類產品制訂統一的國家質量檢測標準提供了依據。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學工業出版社，2005:附錄ⅣA.

[2]中華人民共和國衛生部醫政司.全國臨床檢驗操作規程[M].第3版.南京:東南大學出版社，2006:337.