金龍丸質量標準研究

胡 畔 ，李瑛，筆雪艷，張清波

(1.黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040;2.黑龍江省食品藥品檢驗檢測所，黑龍江 哈爾濱 150001)

金龍丸是由制川烏、制草烏、馬錢子粉、地龍、甘草、天南星(制)、穿山龍、麻黃細粉組成的醫院制劑，具有通絡散結、祛風除濕的功效，用于風寒濕痹、關節疼痛。原標準收載于1990年版《黑龍江省醫院制劑規范》。為更好地控制產品質量，筆者對金龍丸的質量控制方法進行了試驗研究，增加了處方中甘草、麻黃的專屬性鑒別，制訂了處方中制川烏、制草烏所含雙酯型生物堿-烏頭堿的限量，增加了處方中馬錢子粉所含士的寧的含量測定，為金龍丸的質量控制建立了科學方法，現報道如下。

1 儀器與試藥

安捷倫HP1100型高效液相色譜儀。金龍丸(哈爾濱骨傷科醫院，批號分別為20100801，20100802，20100803);乙腈為色譜純，其他試劑、試藥均為分析純;士的寧對照品(批號為110705-200306，中國藥品生物制品檢定所)。

2 方法與結果

2.1 鑒別

甘草的顯微鑒別:取本品，置顯微鏡下觀察，可見纖維束周圍薄壁細胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維(甘草)。見圖1。

圖1 甘草顯微鑒別圖

麻黃的薄層色譜鑒別:取本品10 g，剪碎，加濃氨試液2 mL，再加三氯甲烷50 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，取上清液作為對照品溶液。另取鹽酸麻黃堿對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。取不含麻黃的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備不含麻黃的陰性對照品溶液。照薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗，吸取上述3種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液(20∶5 ∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，且陰性對照品溶液無干擾。見圖2。

2.2 烏頭堿限量檢查(薄層色譜法)

圖2 麻黃薄層色譜圖

取本品1丸，剪碎，加氨試液2 mL潤濕，加乙醚20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液揮干，殘渣加無水乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取烏頭堿對照品加無水乙醇制成每 1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。取不含制川烏、制草烏的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備成不含制川烏和制草烏的陰性對照品溶液。照薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗，吸取上述3種溶液各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯 -乙醇(32∶18∶5)為展開劑，置氨蒸氣預飽和的展開缸內展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上出現的斑點應小于對照品溶液的斑點，或不出現斑點。見圖3。

2.3 含量測定

圖3 烏頭堿薄層色譜圖

2.3.1 色譜條件

色譜柱:Agilent C18柱(250 mm ×4.6 mm，5μm);流動相:乙腈-0.01 mol/L庚烷磺酸鈉與0.02 mol/L磷酸二氫鉀等量混合溶液(用10%磷酸調節pH至2.8，21∶79);檢測波長:260 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:室溫。理論板數按士的寧峰計算應不低于5 000。

2.3.2 溶液制備

取士的寧對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含50μg的溶液，即得對照品溶液。取本品5 g，剪碎，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入濃氨試液2 mL和三氯甲烷50 mL，稱定質量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質量，用三氯甲烷補足減失的質量，搖勻，用鋪有無水硫酸鈉的濾紙濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。取不含馬錢子粉的陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液

2.3.3 測定法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，得到金龍丸的色譜分離圖，理論塔板數為5 000。高效液相色譜圖見圖4。

2.3.4 方法學考察

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液 10μL，重復進樣5次。結果士的寧峰面積積分值的 RSD為 0.8%(n=5)，表明儀器精密度良好。

線性關系考察:分別精密吸取對照品溶液 2，5，10，15，20 μL，注入液相色譜儀，以峰面積 Y為縱坐標、進樣量 X為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=3 420X+0.160，r=0.999(n=5)。結果表明，士的寧進樣量在0.094 769～0.947 69μg之間與峰面積呈良好線性關系。

圖4 高效液相色譜圖

重復性試驗:取同一批樣品(批號為20100801)，按供試品溶液制備方法平行制備5份溶液，按上述色譜條件測定。結果金龍丸中士的寧的含量均值為0.458 7 mg/g，RSD為2.8%(n=6)，表明方法重復性良好。

穩定性試驗:取同一批供試品溶液，分別于 0，5，10，15，20 h時依法測定。結果金龍丸中士的寧含量的 RSD為2.8%(n=5)，表明供試品溶液在20 h內穩定。

加樣回收試驗:稱取已知含量的同一批樣品約2.5 g，精密稱定，共6份，精密加入士的寧對照品溶液(0.234 24 mg/g)5 mL，按供試品溶液制備項下方法操作，按上述色譜條件測定。結果見表1。

表1 士的寧加樣回收試驗結果(n=6)

2.3.5 樣品含量測定

取金龍丸3批樣品，按2.3.2項下方法及2.3.1項下色譜條件測定，根據所測得峰面積計算士的寧的含量，結果分別為1.11，1.12，1.21 mg/丸。

3 討論

采用正己烷-乙酸乙酯-乙醇(32∶18∶5)、甲苯-乙酸乙酯 -二乙胺(14∶1∶1)、正己烷 -乙酸乙酯-甲醇(6.4∶3.6∶1)3種系統，結果后兩種展開系統均未取得良好的展開效果，故確定正己烷-乙酸乙酯-乙醇(32∶18∶5)作為本檢查的展開劑。

參照2010年版《中國藥典(一部)》中馬錢子[1]47及風濕馬錢片[1]584中色譜條件，采用乙腈-0.01 mol/L庚烷磺酸鈉與0.02 mol/L磷酸二氫鉀等量混合溶液(用10%磷酸調節pH至2.8，21∶79)及甲醇 -水 -醋酸 -三乙胺(65∶200∶2.4∶0.3)為流動相，結果以前者峰形較好，后者存在峰拖尾現象，因此選擇作為本品馬錢子中士的寧含量測定的流動相。

取處方中馬錢子粉、地龍、甘草、天南星(制)、穿山龍、麻黃各2 g，按供試品的制備方法制備各藥材溶液按烏頭堿測定法進行測定。結果在藥材馬錢子中在與烏頭堿對照品相應位置處，也出現了相同顏色的斑點。因為本方法為烏頭堿的限量檢查，所以按本品處方中以制川烏、制草烏中所含烏頭堿的總量計，顏色不得深于對照品溶液的斑點即可。

根據本品處方量折算，參照2010年版《中國藥典(一部)》馬錢子粉[1]48含量測定項下士的寧的含量為0.78%～0.82%，本品中士的寧的含量應為“每丸含士的寧1.15～1.22 mg”，為了保證藥物的安全性，確定本品的含量限度上限為“1.22 mg/丸”;同時考慮大生產過程中損耗對樣品中士的寧含量測定的影響，將樣品的下限下浮20%，確定本品的含量限度下限為“0.92 mg/丸”。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:47，584，48.