高效液相色譜法測(cè)定小青龍顆粒中甘草酸銨含量

黃富宏 ，王 健，茅 淵，梁顯揚(yáng)，盧小蘭

(1.江蘇省揚(yáng)州市第一人民醫(yī)院，江蘇 揚(yáng)州 225000;2.江蘇省揚(yáng)州市食品藥品檢驗(yàn)所，江蘇 揚(yáng)州 225000;3.江蘇省揚(yáng)州市蘇北人民醫(yī)院，江蘇 揚(yáng)州 225000)

小青龍顆粒為傳統(tǒng)的中藥制劑，主要由麻黃、桂枝、白芍、干姜、細(xì)辛、炙甘草、法半夏、五味子組成。具有解表化飲、止咳平喘功效，用于風(fēng)寒水飲、惡寒發(fā)熱、無(wú)汗、喘咳痰稀等[1]。高效液相色譜法測(cè)定甘草酸銨含量有文獻(xiàn)報(bào)道，但對(duì)小青龍顆粒中甘草酸銨進(jìn)行含量測(cè)定尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。筆者采用高效液相色譜法對(duì)小青龍顆粒中主要成分之一甘草酸銨進(jìn)行含量測(cè)定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent1200型液相色譜儀;Sartorius CP225D型電子分析天平;KH-500B型超聲波清洗器 (昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)。甘草酸銨對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110731-201013);甲醇(色譜純);水(重蒸餾水);小青龍顆粒(湖北紐蘭藥業(yè)有限公司，批號(hào)為20091101;廣東在田藥業(yè)有限公司，批號(hào)為10107001;吉林羅邦藥業(yè)有限公司，批號(hào)為20081202)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Alltima C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm);流動(dòng)相:水-乙腈-冰醋酸(65∶35∶2.5);流速:1.0 mL/min;柱溫:室溫;檢測(cè)波長(zhǎng):254 nm。

2.2 溶液制備

精密稱取甘草酸銨對(duì)照品0.019 02 g，置50 mL容量瓶中，加甲醇-磷酸(13∶7)制成每1 mL含0.380 4 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取樣品約2.4 g(2份)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密量取甲醇-磷酸(13∶7)25 mL，超聲處理20 min。過(guò)濾，取續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45μm)過(guò)濾，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):按處方中藥味的比例，配制不含甘草的群藥，按其工藝制成陰性對(duì)照樣品，再按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液并測(cè)定。結(jié)果在甘草酸銨對(duì)照品相同保留時(shí)間處未顯色譜峰。高效液相色譜圖見(jiàn)圖1。

線性關(guān)系考察:分別精密吸取 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，7.5 mL對(duì)照品溶液，置25 mL容量瓶中，再加甲醇-磷酸(13∶7)稀釋至刻度，搖勻，在上述的色譜條件下，進(jìn)樣2次，每次10μL。將峰面積和質(zhì)量濃度進(jìn)行回歸處理，得回歸方程為 Y=0.128 7 X+0.202 5，r=1.0(n=6)，線 性 范 圍 為15.2～114.1μg/mL。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積。結(jié)果峰面積的 RSD為0.98%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):按供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，每隔2h進(jìn)樣1次，共測(cè)12h。結(jié)果的 RSD為1.0%，表明峰面積基本無(wú)變化，說(shuō)明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):取約1.2 g小青龍顆粒樣品，共6份，分別加入0.053 3 g/L的對(duì)照品溶液3，5，7 mL，依法測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 甘草酸銨加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

通過(guò)對(duì)照品溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，樣品平均質(zhì)量濃度為0.584 mg/g。稱取小青龍顆粒約2.4 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中。精密量取甲醇-磷酸(13∶7)25 mL，稱重，超聲20 min。放冷，補(bǔ)重，過(guò)濾，取續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45μm)過(guò)濾，作為供試品溶液。依法測(cè)定含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同廠家樣品的含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

文獻(xiàn)報(bào)道的甘草酸銨檢測(cè)波長(zhǎng)有238，250 nm不等[2-3]。本試驗(yàn)中應(yīng)用紫外分光光度計(jì)測(cè)定甘草酸銨的紫外吸收光譜圖，結(jié)果在254 nm處有最大吸收，故選擇254 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。試用了甲醇-水、乙腈-磷酸、乙腈-磷酸二氫鉀等多種流動(dòng)相體系，結(jié)果表明，乙腈-0.017 mol/L磷酸(35∶65)最佳，各成分能得到基線分離，且保留時(shí)間適中。考察甲醇、乙醇和甲醇-磷酸(13∶7)對(duì)樣品中甘草酸銨提取的影響。結(jié)果表明，甲醇-磷酸(13∶7)能夠更好地提取樣品中的甘草酸銨，所以采用甲醇-磷酸(13∶7)作為樣品的提取溶劑。考察了超聲10，20，30 min對(duì)甘草酸銨的含量影響。結(jié)果10 min提取量為20 min的90%，而提取30 min的甘草酸銨含量與提取20 min的基本相同，所以選擇提取時(shí)間為20 min。

小青龍顆粒收載于2010年版《中國(guó)藥典(一部)》[3]，3廠家的成分，性狀，功能主治一樣，成分為麻黃，桂枝、白芍、干姜、細(xì)辛、甘草、法半夏、五味子、輔料為蔗糖。不同廠家、不同批次樣品之間的含量差異較大，可能與投料所用的甘草流浸膏有關(guān)。對(duì)小青龍顆粒的質(zhì)量，特別是對(duì)甘草流浸膏的質(zhì)量進(jìn)行控制很有必要，有關(guān)工作還有待于進(jìn)一步研究。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版杜，2010:505.

[2]劉 源.高效液相色譜法測(cè)定利肺片中甘草酸含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2012，1(21):27-28.

[3]張 克.HPLC法測(cè)定蓋艾康膠囊中甘草酸含量[J].中醫(yī)研究，2011，4(24):20.