不同人結直腸腫瘤細胞系對常用抗腫瘤藥物體外化療敏感性的比較*

張曉莉， 師憲平， 曹錦萍， 宋敏敏， 盧碧燕， 李 文， 黃蘭蘭， 溫創宇， 皮榮標， 黃美近， 劉煥亮△

(1中山大學胃腸病學研究所， 2中山大學附屬第六醫院，廣東 廣州 570655;3廣州醫學院生物化學教研室，廣東 廣州 510182； 4中山大學藥學院， 廣東 廣州 510080)

1000-4718(2012)12-2172-06

2012-09-09

2012-11-16

廣州市科技計劃項目(No.2011J5200009)；中山大學百人計劃科研團隊建設項目(No.88000-3281302)；廣東省科技計劃項目(No.2011B080701064)；廣東省自然科學基金資助項目(No.9151008901000196)

△通訊作者Tel: 020-39443272； 黃美近E-mail: maymay0129@21cn.com； 劉煥亮E-mail: Huanliang.Liu@gmail.com

不同人結直腸腫瘤細胞系對常用抗腫瘤藥物體外化療敏感性的比較*

張曉莉1,2， 師憲平3， 曹錦萍1,2， 宋敏敏1,2， 盧碧燕1,2， 李 文1,2， 黃蘭蘭1,2， 溫創宇1,2， 皮榮標4， 黃美近2△， 劉煥亮1,2△

(1中山大學胃腸病學研究所，2中山大學附屬第六醫院，廣東 廣州 570655;3廣州醫學院生物化學教研室，廣東 廣州 510182；4中山大學藥學院， 廣東 廣州 510080)

目的觀察5種常用抗腫瘤藥物對這些人結直腸腫瘤細胞系的生長抑制作用，探討5種常用抗腫瘤藥物對11株人結直腸腫瘤細胞系的作用強度以及比較其體外敏感性，研究不同抗腫瘤藥物對人結直腸癌細胞系HCT116和SW480熱休克蛋白27(HSP27)和HSP70表達水平的影響。方法采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法檢測5種常用抗腫瘤藥物分別對11株人結直腸腫瘤細胞系的生長抑制效應，計算50%抑制濃度(50% inhibitory concentration, IC50)及敏感指數，并比較不同人結直腸腫瘤細胞系對5種抗腫瘤藥物的敏感性，Western blotting檢測HSP27和HSP70蛋白表達水平。結果11株人結直腸腫瘤細胞系對5-氟尿嘧啶(5-FU)和奧沙利鉑(OHP)均比較敏感，沒有明顯耐藥性；5株人結直腸腫瘤細胞系對絲裂霉素(MMC)敏感，6株中度敏感；除SW1116 外的10株人結直腸腫瘤細胞系都對多西紫杉醇(DXL)敏感，而SW1116細胞對DXL表現出明顯耐藥性；除LS174T和SW1116外的9株人結直腸腫瘤細胞系都對伊立替康(IFL)表現出中度敏感，LS174T細胞對IFL表現敏感，而SW1116細胞對IFL表現出明顯耐藥性。抗腫瘤藥物作用于人結直腸癌細胞系HCT116和SW480使HSP27的表達上調，但HSP70的表達水平變化不明顯。結論LS174T是多藥敏感細胞株，SW1116是多藥耐藥細胞株，5-FU和OHP為廣譜抗結直腸腫瘤藥物；化療藥物的敏感性及HSP27表達量檢測對臨床選擇化療藥物具有一定的提示意義。

結直腸腫瘤； 化學療法； 藥物篩選； 熱休克蛋白70； 熱休克蛋白27

結直腸癌(colorectal cancer，CRC)是最常見的消化道惡性腫瘤，嚴重危害人類的生命和健康，也是目前致死率最高的腫瘤之一，2008年世界范圍內大約有120萬新發病例，每年因結直腸癌死亡的病例超過60萬[1]。據2012年衛生部的統計數據顯示，我國結直腸癌病死率已位居惡性腫瘤第5位[2]。近年來,包括手術切除、放化療以及新輔助治療在內的結直腸腫瘤的各種治療手段,都取得了顯著的進步[3]。隨著抗腫瘤藥物的不斷出現,化療在綜合治療中占有越來越重要的地位，然而化療藥物毒性并且存在明顯的個體差異。同時，結直腸腫瘤化療耐藥現象十分常見，很大程度上影響化療效果，因此深入系統的研究探討結直腸腫瘤細胞對化療藥物的敏感性是提高結直腸腫瘤化療療效及安全性的一個重要問題。

熱休克蛋白(heat-shock protein, HSP)是一組生物體內普遍存在、進化上高度保守的蛋白質家族，又被稱為分子伴侶(molecular chaperone)，是在生理應激或病理狀態等環境因素的刺激下，細胞內誘導合成的一組高度保守的蛋白質。其基本作用是作為分子伴侶參與蛋白質的合成、折疊、積聚、裝配、運輸和降解，在應激狀態下HSP的含量會顯著增加并起到保護細胞的作用[4]。其中腫瘤細胞內誘導表達的HSP27和HSP70一方面可能與多種原癌基因互相作用，調節細胞增殖[5]，另一方面還參與了腫瘤細胞抗凋亡過程[6]從而增強細胞對損害的耐受力，維持細胞正常功能，提高生存能力。Mazurov等[7]證實了結直腸癌細胞HSP27的誘導性表達使腫瘤細胞獲得對順鉑等藥物產生獲得性耐受。Venkatakrishnan等[8]也證明外源性或內源性HSP27表達上調可提高腫瘤細胞耐藥性。HSP70家族是熱休克蛋白中最保守的一族，在生物的應激反應中最敏感。當受外界刺激特別是熱沖擊后，細胞內其它大部分基因的轉錄和蛋白合成降低，而HSP70蛋白合成增加并與肽鏈結合，發揮分子伴侶的作用，穩定肽鏈的空間結構和分布，增加細胞對外界刺激的耐受性，同時也對某些細胞內轉錄通路進行調節[9]。因此研究不同抗腫瘤藥物對人結直腸癌細胞HSP27和HSP70蛋白表達水平的影響，對在臨床用藥過程中有很重要的提示意義。

本實驗選用簡便、準確性高的CCK-8(Cell Counting Kit-8)法，系統檢測11株人結直腸腫瘤細胞系SW480、HT-29、HCT116、LoVo、SW1116、HCT-8、HCT15、DLD-1、LS174T、SW620和Caco-2對5-氟尿嘧啶(fluorouracil，5-FU)、奧沙利鉑(oxaliplatin，OHP)、多西紫杉醇(docetaxel，DXL)、伊立替康(irinotecan，IFL)和絲裂霉素(mitomycin，MMC)5種臨床常用抗腫瘤藥物的敏感性，同時分析了化療藥物對HCT116和SW480細胞內HSP27及HSP70表達水平的影響，為進一步探討熱休克蛋白與腫瘤細胞耐藥性的內在聯系奠定基礎。

材 料 和 方 法

1材料

人結直腸腫瘤細胞系SW480、HT-29、HCT116、LoVo、SW1116、HCT-8、HCT15、DLD-1、LS174T、SW620和Caco-2購買于中國科學院上海細胞生物學研究所。

2主要試劑與儀器

CCK-8試劑盒購自Dojindo Molecular Technologies；RPMI-1640培養基購自Gibco； 胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)購自Gibco；青霉素、鏈霉素購自Gibco；0.25%胰酶+EDTA購自Gibco；96孔培養板購自Corning；5-FU購自杭州賽諾菲安萬特民生制藥有限公司；OHP購自杭州賽諾菲安萬特民生制藥有限公司；DXL購自江蘇恒瑞醫藥股份有限公司；IFL購自Pfizer(Perth) Pty Limited；MMC購自浙江海正藥業有限公司；兔抗人HSP70 IgG抗體和兔抗人HSP27 IgG抗體購自武漢博士德生物工程有限公司；兔抗GAPDH IgG抗體購自杭州賢至生物科技有限公司；羊抗兔IgG熒光Ⅱ抗購自LI-COR；細胞裂解液購自碧云天生物技術研究所；Odyssey紅外成像系統購自LI-COR；Model680酶標儀購自Bio-Rad；CO2恒溫培養箱購自Thermo；Forma ClassⅡA2生物安全柜。

3試劑和藥物配制

3.1RPMI-1640完全培養基的配制 在基礎RPMI-1640培養基中加入10%FBS、1×105U/L青霉素和100 mg/L鏈霉素。

3.2CCK-8測定液的配制 按照CCK-8∶無血清培養基=1∶9的比例配制CCK-8測定液，現配現用，避光操作。

3.3藥敏實驗所用藥物的配制 5-FU的濃度分別是500 μmol/L、125 μmol/L、31.25 μmol/L、7.81 μmol/L和1.95 μmol/L；OHP的濃度分別是100 μmol/L、25 μmol/L、6.75 μmol/L、1.688 μmol/L和0.422 μmol/L；DXL的濃度分別為50 nmol/L、12.5 nmol/L、3.375 nmol/L、0.844 nmol/L和0.211 nmol/L；IFL的濃度分別是100 μmol/L、25 μmol/L、6.75 μmol/L、1.686 μmol/L和0.422 μmol/L；MMC的濃度分別是1 000 nmol/L、250 nmol/L、62.5 nmol/L、15.875 nmol/L和3.969 nmol/L。

4主要方法

4.1細胞培養 取液氮凍存的各細胞，37～38 ℃水溫迅速融化后900 r/min離心3 min,去上清，接種于培養瓶中,37 ℃恒溫恒濕、5% CO2培養箱中培養。毎3～4 d傳代1次，用0.25%胰蛋白酶和0.02% EDTA消化后傳代或收集對數生長期的細胞進行實驗。

4.2細胞生長曲線測定 取生長狀態良好處于對數生長期各細胞，制成單細胞懸液，臺盼藍染色進行細胞計數后按1 000 cells/well、2 000 cells/well、3 000 cells/well、4 000 cells/well和5 000 cells/well接種于96孔培養板，培養基為RPMI-1640完全培養基，邊緣孔用無菌的PBS填充，毎孔100 μL，設3個復孔，37 ℃培養24 h至貼壁。更換新鮮的培養基，繼續培養24 h、48 h、72 h后分別用CCK-8測定法測定吸光度(absorbance,A)值。

4.3體外藥物敏感性實驗 用生長曲線所確定的細胞濃度，接種于96孔培養板，培養基為RPMI-1640完全培養基，邊緣孔用無菌的PBS填充，毎孔100 μL，37 ℃、5% CO2培養箱孵育24 h后，用各梯度濃度的藥物作用72 h，每個濃度設3個復孔，對照組的藥物濃度為0，作用72 h后，用CCK-8法測定A值。

4.4CCK-8測定 棄去96孔板中原有的培養基，每孔加入100 μL CCK-8測定液，以僅含CCK-8測定液的無細胞孔為空白調零孔。37 ℃避光孵育0.5～4 h，分別于0.5 h、1 h、2 h、3 h和4 h時點在酶標儀上測定A值，測定波長為450 nm，參比波長為630 nm。

4.5敏感性判定[10]敏感指數(耐藥指數)根據IC50與最高血漿濃度(peak plasma concentration,PPC)的比值來確定。即敏感指數(耐藥指數)=IC50/PPC。有敏感性：IC50低于PPC者(敏感指數<1者)；中等敏感性：IC50為PPC的1～10倍(耐藥指數為1～10者)；無敏感性即耐藥性：IC50超過PPC的10倍者(耐藥指數>10者)。

4.65種抗腫瘤藥物的PPC 所用化療藥物的100%測試藥物濃度(TDC)為按國人藥物常規用量(毫克/體表面積),在藥物的藥代動力學指導下測出的血液內峰值濃度PPC,分別為:5-FU(192.189 μmol/L)；OHP(12.585 μmol/L)；DXL(12.387 μmol/L)；IFL(6.940 μmol/L)；MMC(0.688 μmol/L)。

4.7Western blotting檢測 將對數生長期的HCT116細胞和SW480細胞分別用IC50對應濃度的化療藥物處理24 h后提取細胞總蛋白，10% SDS-PAGE凝膠分離蛋白，通過半干轉方式將蛋白轉至0.22 μm孔徑的硝酸纖維膜上,用Ⅰ抗封閉液室溫封閉2 h后，分別加入含HSP70(1∶400)、HSP27(1∶400)和GAPDH(1∶500)的Ⅰ抗稀釋液(PBST配制)，4 ℃過夜孵育，PBST洗膜3次，每次10 min，分別滴加羊抗兔IgG熒光Ⅱ抗(1∶10 000)(PBST配制)稀釋液，室溫避光孵育1 h，PBST洗膜4次，每次10 min，利用Odyssey紅外成像系統儀檢測目標條帶并測定條帶灰度值，通過計算HSP70和HSP27分別與GAPDH灰度值的比值考察蛋白表達水平。

5統計學處理

結 果

111株人結直腸腫瘤細胞系種板濃度

所得A值保證3個復孔標準差不大于均數的10%，以3個復孔平均A值為縱坐標，毎孔的種板細胞數量為橫坐標繪制細胞生長曲線，得到11株人結直腸腫瘤細胞系的藥物敏感性實驗種板濃度。根據細胞的生長曲線,SW480、HCT116、LoVo、HCT-8、HCT15、LS174T、Caco-2和SW620細胞的種板密度均為4 000 cells/well，HT-29和DLD-1細胞的種板密度均為5 000 cells/well，SW1116細胞的種板密度為6 000 cells/well。

25種常用抗腫瘤藥物對11株人結直腸腫瘤細胞系的IC50

5-FU對11株人結直腸腫瘤細胞系的IC50為0.108～651.537 μmol/L,以Caco-2細胞對藥物最為敏感，SW1116細胞最不敏感；OHP的IC50為0.558～16.618 μmol/L,以HCT116細胞對藥物最為敏感，SW620細胞最不敏感；DXL的IC50為0.001～461.090 μmol/L,以LS174T細胞對藥物最為敏感，SW1116細胞最不敏感；IFL的IC50為8.378～1 256.187 μmol/L,以LS174T細胞對藥物最為敏感，SW1116細胞最不敏感；MMC的IC50為0.151～4.445 μmol/L,以HCT15細胞對藥物最為敏感，SW1116細胞最不敏感,見表1。

表1 5種常用化療藥物對11株人結直腸腫瘤細胞系的IC50

aRepresentative IC50values of DXL for Caco-2, HCT15, HCT116, HT29, DLD-1 and LS174T cells were 0.00344 μmol/L, 0.001352 μmol/L, 0.003883 μmol/L, 0.003596 μmol/L, 0.001217 μmol/L and 0.000548 μmol/L, respectively.*P<0.05vsother groups.

311株人結直腸腫瘤細胞系對5種常用抗腫瘤藥物的敏感指數

11株人結直腸腫瘤細胞對5-FU和OHP比較敏感，沒有表現出耐藥性；5株人結直腸腫瘤細胞對MMC敏感，6株中度敏感；除SW1116外的10株人結直腸腫瘤細胞系都對DXL敏感，而SW1116細胞對DXL表現出明顯耐藥性；除LS174T和SW1116外的9株人結直腸腫瘤細胞系都對IFL表現出中度敏感，LS174T細胞對IFL表現敏感，而SW1116細胞對IFL表現出明顯耐藥性。LS174T是多藥敏感細胞株，SW1116是多藥耐藥細胞株,5-FU和OHP為廣譜抗結直腸腫瘤藥物，見表2。

表2 11株結直腸腫瘤細胞對5種常用化療藥物的敏感指數

aRepresentative sensitivity indexes of Caco-2, HCT15, HCT116, HT29, DLD-1, LS174T, LoVo and SW620 cells to DXL were 0.000277912, 0.000109226, 0.000313702, 0.000290515, 9.83196×10-5, 4.42721×10-5, 0.001426967 and 0.000883907, respectively.*P<0.05vsother groups.

4HCT116細胞中HSP27和HSP70的表達

Western blotting結果顯示,HCT116細胞在各化療藥物IC50濃度的作用下，HSP27的表達有不同程度的增高，而HSP70表達量的變化不明顯，見圖1。

5SW480細胞中HSP27和HSP70的表達

Western blotting結果顯示，SW480細胞在各化療藥物IC50濃度的作用下，HSP27在5-FU、OHP和DXL IC50的作用下有不同程度的上調，但是在IFL和MMC的作用下表達量下調；HSP70在5-FU IC50的作用下表達上調，在其它藥物的IC50作用都有不同程度的下調。

圖1化療藥物對HCT116細胞中HSP70和HSP27表達的影響

圖2化療藥物對SW480細胞中HSP70和HSP27表達的影響

討 論

由于腫瘤是一個異質性、多態性、分化不均的細胞群體，臨床上常發現同一組織學類型的腫瘤對同一化療藥物敏感性存在著差異，而且腫瘤多藥耐藥(multidrug resistance, MDR)也普遍存在，這些因素直接影響腫瘤的化療效果。目前臨床上使用的抗腫瘤藥物多達上百種，而不同的組織學類型的腫瘤甚至來自同一臟器具有相同組織學類型的腫瘤對抗腫瘤藥物的敏感性也不盡相同。提高腫瘤化療效果的一個關鍵性問題是克服化療藥物的耐藥性。根據藥物敏感性進行個體化治療，可以提高治療效果，因此，通過藥物敏感性試驗來選擇藥物，不僅可以提高療效，而且也可以避免無效的抗腫瘤藥物帶來的毒副作用。本實驗采用5種臨床常用的化療藥物,以系統的確定和比較體外人結直腸腫瘤細胞系對化療藥物的敏感性。

從上述體外藥物敏感性實驗結果可以看出大部分人結直腸腫瘤細胞系對5種常規臨床抗腫瘤藥物比較敏感，LS174T細胞對5種抗腫瘤藥物都具有敏感性；Caco-2、HCT15、HCT116和HT29細胞對5-FU、OHP、DXL和MMC均具有敏感性，但是對IFL中度敏感；DLD-1、LoVo、SW480和HCT-8細胞對5-FU、OHP和DXL均具有敏感性，但是對IFL和MMC中度敏感；SW620細胞對5-FU和DXL均具有敏感性，但是對OHP、IFL和MMC中度敏感；SW1116細胞對DXL和IFL產生耐藥，對5-FU、OHP和MMC具有中度敏感性。人結直腸腫瘤細胞系對各種抗腫瘤藥物的敏感性不同，存在自然耐藥性，可根據不同的人結直腸腫瘤細胞系對抗腫瘤藥物的敏感性來選擇不同的抗腫瘤藥物。11株結直腸腫瘤細胞對5-FU和OHP比較敏感，沒有表現出耐藥性，因此5-FU和OHP可以考慮作為治療結直腸腫瘤的廣譜性化療藥物。體外抗腫瘤藥物敏感性試驗結果為臨床選擇有效的抗腫瘤藥物，開展結直腸腫瘤的個體化治療從而明顯改善結直腸腫瘤患者的預后有一定的提示作用。

熱休克蛋白是一組廣泛存在于原核細胞和真核細胞中，在生理、病理及應激狀態下，于細胞內合成的具有高度保守的氨基酸序列及其編碼基因的蛋白質，在應激狀態下提高細胞對應激損傷的耐受性[11-12]。本研究發現，不同抗腫瘤藥物作用對不同人結直腸癌細胞(HCT116和SW480)中HSP70和HSP27表達水平的影響不同，這可能與不同腫瘤細胞的基因型不同以及不同藥物的作用機制不同有關，同時HSP27和HSP70對化療藥物的響應濃度和響應時間存在差異。HSP27與細胞耐藥性密切相關[13-14],而本研究發現5種化療藥物均誘導HCT116細胞內HSP27的表達，同時HCT116細胞對化療藥物均比較敏感。這主要是因為本研究使用的藥物濃度是IC50對應濃度，該濃度下對藥物敏感的細胞株HCT116仍對藥物有一定的耐受性，可見化療藥物的臨床使用不僅要選擇合適的藥物，同時要確定合適的藥物濃度。

從實驗結果可以看到，不同抗腫瘤藥物作用人結直腸癌細胞HCT116使HSP27表達量有不同程度的增加。可能是因為HSP27磷酸化形成二聚體可以通過三方面穩定細胞結構：(1)與微管蛋白相結合增加微管的穩定性和完整性；(2) 使肌動蛋白(F-actin)磷酸化，阻止微絲的分裂以促進微絲多聚化以保持微絲的穩定，HSP27同一種體外肌動蛋白聚合抑制劑有著高度序列相似性，能夠穩定肌動蛋白細胞骨架來抵抗外界應激；(3) 還通過與中間絲相互作用來避免中間絲異常聚合[15]，所以HSP27在細胞中的表達會有不同程度的升高，但是在IFL和MMC作用下SW480細胞HSP27的表達是下調的，可能還有其它的作用機制有待于進一步的研究。

HSP27在HCT116細胞系中在受到各抗癌藥物的IC50濃度作用后，均有不同程度的上調，說明HCT116本身對各化療藥物敏感的特性在受到化療藥物刺激后發生改變。由于多數耐藥腫瘤細胞中存在HSP27表達上調，并且體外阻斷HSP27表達可逆轉藥物耐受性，因此，可以認為HSP27表達可作為預測抗癌藥物療效的指標。雖然體外研究提示阻斷HSP27表達可逆轉耐藥,但如何通過其它方法抑制HSP27基因的保護功能，更有效地發揮化療藥物的抗癌作用需要進一步的深入的研究，其臨床應用尚存在許多問題,作為一類在機體大多數正常細胞持續表達、生物學作用廣泛的小分子蛋白,HSP27的表達一旦被阻斷后,是否會對機體產生嚴重的不良影響?所有這些均需要學者們在基礎和臨床領域的繼續探索。

本實驗是將腫瘤細胞完全暴露在藥物下進行的，而藥物在體內分布、代謝、排泄速度與體外實驗具有較大差異，因此，對于此類細胞毒類抗腫瘤藥物有效性研究的結果并不能準確地預測受試物的臨床療效。然而,體外藥敏實驗結果的初步篩選可為臨床治療提供線索。因此,我們將進一步對影響人結直腸腫瘤細胞的功能化合物進行研究，深入探討熱休克蛋白等腫瘤細胞耐藥相關蛋白的作用機制，為結直腸腫瘤藥物開發提供新靶點，同時也為結直腸腫瘤的綜合防治提供新思路。

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Sensitivityofdifferenthumancolorectaltumorcelllinestocommonlyusedchemotherapeuticdrugsinvitro

ZHANG Xiao-li1,2, SHI Xian-ping3, CAO Jin-ping1, 2, SONG Min-min1, 2, LU Bi-yan1, 2, LI Wen1, 2, HUANG Lan-lan1, 2, WEN Chuang-yu1, 2, PI Rong-biao4, HUANG Mei-jin2, LIU Huan-liang1,2

(1InstituteofGastroenterology,SunYat-senUniversity,2theSixthAffiliatedHospital,SunYat-senUniversity,Guangzhou510655,China;3DepartmentofBiochemistry,GuangzhouMedicalUniversity,Guangzhou510182,China;4SchoolofPharmaceuticalSciences,SunYat-senUniversity,Guangzhou510080,China,E-mail:maymay0129@21cn.com,Huanliang.Liu@gmail.com)

AIM: To observe the antitumor effect of 5 commonly used chemotherapeutic drugs on 11 human colorectal cancer cell linesinvitro.METHODSCCK-8 method was used to determine the growth inhibitory effects of 5 antitumor drugs, which were expressed as the half growth inhibitory concentration (IC50) and sensitivity index IC50/PPC (peak plasma concentration) on 11 human colorectal cancer cell lines. The expression variations of heat-shock protein 27 (HSP27) and HSP70 at protein levels in human colorectal tumor cell lines treated with different chemotherapeutic drugs were observed by Western blotting.RESULTSAll the 11 colorectal cancer cell lines were sensitive to 5-fluorouracil (5-FU) and oxaliplatin (OHP) without drug resistant. Five colorectal cancer cell lines were sensitive to mitomycin (MMC), while the other 6 cell lines were moderately sensitive. Ten colorectal cancer cell lines except SW1116 were sensitive to docetaxel (DXL), while SW1116 cells were resistant to DXL. Nine colorectal cancer cell lines except LS174T and SW1116 were moderately sensitive to irinotecan (IFL), and SW1116 cells were also resistant to IFL, while LS174T cells were sensitive to IFL. After treated with the antitumor drugs, HSP27 was up-regulated in HCT116 cells and SW480 cells, while the expression of HSP70 didn’t change.CONCLUSIONLS174T cells are multidrug-sensitive, while SW1116 cells are multidrug-resistant. 5-FU and OHP are the wide-spectrum anti-colorectal cancer drugs. Determining the sensitivity to chemotherapeutic drugs and the expression level of HSP27 can improve the accuracy in drug selection.

Colorectal neoplasms; Chemotherapy; Drug screening; Heat-shock protein 70; Heat-shock protein 27

R735.3

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2012.12.011