流通池法測定尼古丁緩釋貼劑的釋放度

孫 悅，唐素芳（天津市藥品檢驗所，天津 3 0 0 0 7 0）

流通池法測定尼古丁緩釋貼劑的釋放度

孫 悅＊，唐素芳（天津市藥品檢驗所，天津 3 0 0 0 7 0）

目的：建立測定尼古丁緩釋貼劑中尼古丁釋放度的方法。方法：采用流通池法，并與原研廠采用的碟上槳法進行結果比較。流通池法測定條件：釋放介質為0.0 0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液，流速為4 mL·min－1，層流流動方式；采用高效液相色譜法測定尼古丁的釋放度；用模型法零級、一級、Higuchi方程等和相似因子法分別對不同釋放介質的釋放曲線進行擬合，提取釋放參數并進行統計學分析。結果：建立的流通池法與碟上槳法測定結果無顯著性差異（P＞0.0 5）。結論：所建立的方法簡便、可行，為緩釋貼劑釋放度測定方法提供了一種新的選擇，并可用于相關制劑的質量控制。

流通池法；尼古丁；緩釋貼劑；釋放度；模型法；相似因子法

流通池法（Flow-through cell method）也曾被稱為流池法[1]（Flow-cell method），是有別于槳法、籃法等傳統溶出度測定的一種新的溶出測定方法，在《美國藥典》（USP）（3 4）、《英國藥典》（BP）（2 0 1 1）、《日本藥局方》（第十五版）的附錄中的溶出度測定方法項下均有收載。目前，透皮緩釋貼劑的應用越來越多，而其體外測定方法是在近年來才出現的，方法尚不成熟。《中國藥典》[2]現采用碟上槳法，但其在應用上受很大限制，如果溶出介質的量低于5 0 0 mL，就無法應用該法，因為槳的上沿會從溶媒中露出。特別是對于目前的溶出度儀來說，采用碟上槳法后無法自動取樣，操作非常復雜。因此，開發一種適合貼劑釋放度測定的新方法就顯得格外重要。本試驗以用于緩解煙癮的尼古丁緩釋貼劑為研究對象，建立了對其進行體外釋放度測定的流通池法，與原研廠方法（碟上槳法）測定結果經模型法和相似因子（f2）法[3]比較，結果均一致。

1 儀器與材料

1.1 儀器

CE7 Offline流通池法溶出度儀，包括SOTAX CE7主機、CY7-5 0活塞泵（瑞士Sotax公司）；1 1 0 0型高效液相色譜（HPLC）儀（美國Agilent公司）。

1.2 試藥

尼古丁緩釋貼劑（批號：0 6 1 9 3 4 5 1 B，規格：每片1 4 mg）、酒石酸尼古丁對照品（批號：0 8 1 1 0 2 6，純度：1 0 0.0%，以酒石酸尼古丁計）均由中美天津史克制藥有限公司提供；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

生物半透膜（上海綠島生物科技有限公司，截留分子量：1 0 0 0）。

1.3 流通池法溶出度儀試驗裝置

流通池法溶出度儀有7個流通池；試驗中，溶媒貯放瓶中的釋放介質經活塞泵從每個流通池的底部注入，與流通池中的樣品接觸后，從流通池頂端濾過系統回到溶媒貯放瓶中，濾過系統由1個篩網和1片玻璃纖維過濾膜組成。在流通池底部的錐形部中可加入一定量直徑1 mm的玻璃珠以改變釋放介質的流動狀態。流通池結構圖見圖1。

圖1 流通池結構圖Fig 1 Structure of flow-through cell

圖2 貼劑測定池示圖Fig 2 Diagrammatic sketch of patch cell

由于流通池法還沒有應用于貼劑測定，所以目前還沒有專用的貼劑測定池。本文將用于軟膏測定的膏劑測定池略作改動，將圓形池身的直徑加大改制，作為貼劑測定池，見圖2。

試驗時將貼劑剪成直徑略小于貼劑測定池直徑大小的樣品，置于池中，上面用生物半透膜罩住，用箍將其固定，放入流通池片夾位置，即完成。

2 方法與結果

2.1 溶出度的測定

2.1.1 色譜條件。色譜柱為Rainin C18（5 0 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫為4 0℃；流動相為乙腈-水（含0.0 5 5%（W/V）十二烷基磺酸鈉、0.0 2%（V/V）二甲基辛胺、0.0 2%（V/V）冰醋酸、0.0 2%（W/V）無水醋酸鈉）（2 2∶7 8），流速為1 mL·min－1；檢測波長為2 5 4 nm；進樣量為5 0 μL。在此色譜條件下，取“2.1.4”項下對照品溶液（1 1 2 μg·mL－1）和“2.1.8”項下2 4 h的溶出液進樣分析。結果，尼古丁峰的保留時間為2 min，理論板數約為1 5 6 3，溶媒與貼劑中其他物質不干擾測定，色譜圖見圖3。

圖3 高效液相色譜圖A.對照品溶液；B.2 4 h的溶出液；1.尼古丁Fig 3 HPLC chromatograms A.substance control；B.released solution at 2 4 h；1.nicotine

2.1.2 釋放介質的選擇。原研廠采用的釋放介質是0.0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液（pH 2.0），而根據文獻[4]顯示，皮膚的pH值在5.0左右，呈微酸性，因此本試驗先后嘗試了水、0.0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液、0.0 0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液、pH7.4磷酸鹽緩沖液（PBS）、pH4.0醋酸鹽緩沖液、pH6.8 PBS這6種介質。其中后2種介質使貼劑的背襯層溶解，干擾了測定，故不予考慮。其余4種介質所得結果經方差分析及相似因子計算，結果以0.0 0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液為介質所得結果與碟上槳法一致，故選取其作為釋放介質。5種釋放介質中的溶出曲線見圖4。

圖4 5種釋放介質中尼古丁溶出曲線Fig 4 Release curves of nicotine in 5kinds of medium

2.1.3 貯備液制備。精密稱取酒石酸尼古丁對照品適量，置于5 0 mL量瓶中，用0.0 0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液（pH 5.0）溶解并稀釋定容至刻度，制成1.4 mg·mL－1對照品貯備液。

2.1.4 標準曲線制備。精密量取“2.1.3”項下貯備液適量，置于5 0 mL量瓶中，用0.0 0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液稀釋至刻度，分別制備成濃度為2 8、5 6、8 4、1 1 2、1 4 0、2 8 0 μg·mL－1的系列對照品溶液，進樣5 0 μL。以峰面積（A）對濃度（c）進行回歸，結果，標準曲線方程為 A＝5.7 6 33 c－1.5 5 74（r＝0.9 9 99，n＝6）。尼古丁檢測濃度線性范圍為2 8～2 8 0 μg·mL－1。

2.1.5 加樣回收率試驗。取尼古丁緩釋貼劑，剪碎，稱取適量（約含尼古丁2.2 5 mg），共9份，精密稱定，分別置于5 0 mL量瓶中，精密加入對照品貯備液3.0、4.0、5.0 mL各3份，加0.0 0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液溶解稀釋至刻度，搖勻，制備成含對照品相當于檢查限度6 0%、8 0%、1 0 0%的樣品溶液。用0.4 5 μm微孔濾膜過濾，進樣分析，按標準曲線方程測定尼古丁含量，計算上述3個濃度點的平均回收率（n＝3）。結果分別為9 8.9%、9 9.7%、9 9.2%，RSD分別為0.4 9%、0.2 2%、0.3 0%。

2.1.6 穩定性和重復性試驗。取“2.1.4”項下濃度為1 4 0 μg·mL－1對照品溶液5 0 μL，分別于0、4、8、1 6、2 4 h進樣，測定尼古丁峰的峰面積，計算RSD（n＝5），結果為0.3 8%；再取此對照品溶液，連續進樣6次，結果，RSD＝0.1 2%。表明此方法具有良好穩定性和重復性。

2.1.7 釋放度測定。采用流通池法閉合系統裝置，每次試驗取樣品6片，置于錐形部裝滿1 mm玻璃珠（約6.3 g）的流通池內，使溶出介質在流通池內以層流方式流動，釋放介質經脫氣處理，體積為1 0 0mL，活塞泵流速4mL·min－1，溫度3 2.0℃（與皮膚溫度接近），啟動活塞泵，自釋放介質浸過樣品時開始計時，分別于0、2、4、8、1 2、2 4 h（與碟上槳法取樣時間對應）各取樣2 mL，同時補充等溫等體積的釋放介質，取濾液5 0 μL進行色譜分析。

2.1.8 測定結果。分別采用原研廠碟上槳法（介質是0.0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液）及本文所建立的流通池法對尼古丁緩釋貼劑進行測定，其中流通池法采用pH 7.4 PBS、0.0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液、水及0.0 0 1 5 mol·L－1磷酸水溶液（分別用A、B、C、D、E代表上述5種釋放介質對應的方法）。累積釋放度結果見表1。

表15種方法尼古丁釋放度測定結果（%%，n＝6）Tab 1Release rates of nicotine by 5 kinds of methods（%%，n＝6）

2.2 數據擬合

對上述結果分別采用模型法[5]和f2法進行分析，其中，模型法分別采用了緩釋制劑常用的零級、一級及Higuchi方程進行擬合，此外，也用Weibull分布方程進行了擬合。結果，擬合優度的順序由高到低依次為Higuchi方程（r＝0.9 8 0 5）、零級方程（r＝0.9 7 65）、一級方程（r＝0.9 5 73）、Weibull分布方程（r＝0.9 3 2 1）。因此選擇Higuchi方程作為模型法使用的方程，Higuchi方程可簡化為：F（t）/F∞＝kt1/2。通過Higuchi方程提取參數Td、T50進行方差分析和多重比較檢驗，結果顯示，A、E與B、C、D方法間有極顯著性差異（P＜0.0 1），其中原研廠碟上槳法（A）與E法之間無顯著性差異（P＞0.0 5），這與f2法的計算結果一致。2種分析方法比較結果見表2（自由度：組間＝4，組內＝2 5）。

3 討論

目前，進行緩釋制劑的釋放度評價一般采用2種方法，一是模型法，二是非模型依賴法。緩釋制劑的模型有一級方程和Higuchi方程，但當需要計算的量比較小時，使用模型法提取釋放參數在進行統計學分析時比較煩瑣，可采用非模型依賴法中的相似因子法進行替代。相似因子法計算相對簡便，而且結果可靠，是美國FDA推薦使用的方法[6]。其基本原理是基于生物等效性的基本假設進行體外釋放度的等效性評價。相似因子法計算的基本假設是試驗藥品與對照藥品的累積釋放度差的平方和最小，如果5 0≤f2≤1 0 0，則表示2種制劑的釋放度相似。

隨著制劑技術的飛速發展、大量新劑型的誕生以及目前對于溶出度測定方法體內外相關性（IVIVC）的要求，傳統的釋放度測定方法（槳法、籃法等）在進行制劑質量控制時遇到了許多新的問題和難題，比如說微量藥物制劑的測定，貼劑、微球劑等新劑型的測定以及如何解決速釋制劑體內外相關性等。而流通池法作為一種新型的釋放度檢查方法，不僅在傳統劑型片劑、膠囊劑中有著廣闊的應用前景，而且在貼劑、藥物釋放支架、混懸劑、植入劑及微球、脂質體等新劑型中更是具有很大的實用價值，可以很好地彌補傳統釋放度方法的不足。

表2 不同分析方法擬合后的釋放度參數Tab 2 Release parameters fitted by different methods analysis

[1] Dokoumetzidis A，Macheras P.A century of dissolution research：from Noyes and Whitney to the biopharmaceutics classification system[J].Int J Pharm，2 0 0 6，3 2 1（1-2）：1.

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[4] 馬慧軍，朱文元.皮膚表面酸堿度及其測定方法[J].臨床皮膚科雜志，2 0 0 4，3 3（7）：4 4 8.

[5] 陳賢春，吳 清，王玉蓉，等.關于溶出曲線比較和評價方法[J].中國醫院藥學雜志，2 0 0 7，2 7（5）：6 6 2.

[6] 謝沐風.溶出曲線相似性的評價方法[J].中國醫藥工業雜志，2 0 0 9，4 0（4）：3 0 8.

Determination of Release Rate of Nicotine Sustained-release Patches by Flow-through Cell Method

SUN Yue，TANG Su-fang
（Tianjin Institute for Drug Control，Tianjin 3 0 0 0 7 0，China）

OBJECTIVE：To develop a method for the determination of the release rate of Nicotine sustained-release patches.METHODS：Flow-through cell method was compared with paddle plate method of the originator.0.0 0 15mol·L－1phosphoric acid solution was used as the medium at the flow rate of 4mL·min－1in laminar flow mode.HPLC method was used to determine the release rate of nicotine.Model method such as zero-order，one-order，Higuchi equations and similarity factor method were used to fit the release curves of nicotine in different medium.The main parameters were calculated and analyzed statistically.RESULTS：The results of flow-through cell method was consistent with that of paddle plate method（P＞0.0 5）.CONCLUSION：The established method is simple and convenient，and it can be used as a new choice to determine the release rate of sustained-release patch and quality control of those dosage forms.

Flow-through cell method；Nicotine；Sustained-release patch；Release rate；Model method；Similarity factor method

R9 2 7.1

A

1 0 0 1-0 4 0 8（2 0 1 2）3 3-3 1 3 3-0 3

DOI1 0.6 0 3 9/j.issn.1 0 0 1-0 4 0 8.2 0 1 2.3 3.2 4

2 0 1 2-0 2-1 3

2 0 1 2-0 4-1 0）