GRP78 mRNA在食管鱗狀細胞癌中的表達

郝鵬程 魏煜程 王 沖 任曉峰 李自亨

1.青島大學醫學院，山東青島 266000；2.青島大學醫學院附屬醫院，山東青島 266000；3.山東省榮軍總醫院，山東濟南 250000

GRP78 mRNA在食管鱗狀細胞癌中的表達

郝鵬程1魏煜程2王 沖3任曉峰3李自亨3

1.青島大學醫學院，山東青島 266000；2.青島大學醫學院附屬醫院，山東青島 266000；3.山東省榮軍總醫院，山東濟南 250000

目的 檢測GRP78 mRNA在食管鱗狀細胞癌中的表達情況。方法 應用RT-PCR法檢測30例食管鱗狀細胞癌組織及其癌旁組織中GRP78 mRNA的表達情況。結果 食管鱗狀細胞癌組織及癌旁組織中GRP78 mRNA的表達陽性率分別為56.67%(17/30)和26.67%(8/30),GRP78 mRNA在食管鱗狀細胞癌組織中表達水平明顯高于癌旁組織。兩組差異有統計學意義(P＜0.05)。結論 與癌旁組織相比,食管鱗狀細胞癌GRP78 mRNA呈現高表達,表明GRP78可能參與了食管鱗狀細胞癌的發生過程，可以作為食管鱗狀細胞癌的一種有價值的腫瘤分子標志物。

食管鱗狀細胞癌；GRP78；RT-PCR

食管癌(esophageal carcinoma,EC)是常見的惡性腫瘤之一,我國是食管癌的高發區域，其中病理類型以鱗狀細胞癌為主。本研究對30例食管鱗狀細胞癌組織及其配對癌旁組織用RT-PCR法檢測GRP78 mRNA在食管鱗狀細胞癌中的表達情況，探討它與人類食管鱗狀細胞癌發生、發展的關系。本研究對30例食管鱗狀細胞癌組織及其配對癌旁組織用RT-PCR法檢測GRP78 mRNA在食管鱗狀細胞癌中的表達情況，探討它與人類食管鱗狀細胞癌發生、發展的聯系。

1 對象與方法

1.1 研究對象

30例食管鱗狀細胞癌組織及其配對癌旁組織均為山東省立醫院2011年3月～2011年4月手術切除的新鮮標本,其中男性22例,女性8例,均為鱗狀細胞癌;手術結束后,即刻采集標本,置于液氮內冷凍，-80℃低溫保存,整個操作過程避免外源性RNase降解靶組織中的RNA。要求患者手術前未行放、化療和其他抗腫瘤治療,并且全部標本的病理切片均經病理學專家驗證。

1.2 主要試劑

鼠-抗人 GRP78單克隆抗體，Trizol試劑，DEPC，氯仿，異丙醇，RT-PCR檢測試劑盒，瓊漿糖凝膠，引物合成。

1.3 主要儀器

凝膠成像系統，紫外分光光度計，臺式離心機，PCR擴增儀，超低溫冰箱。

1.4 RT-PCR實驗操作流程

總RNA提取，檢測RNA純度，驗證RNA的完整性，GRP78引物設計，RT-PCR，計算GRP78 mRNA陽性表達率。

1.5 統計學方法

采用SPSS 17.0軟件進行處理,GRP78 mRNA的表達水平以陽性表達率表示,采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

GRP78 mRNA在食管鱗狀細胞癌組織及其配對癌旁組織中的表達(表 1)。

RT-PCR結果顯示，在30例患者中檢測到GRP78 mRNA且GRP78 mRNA的表達陽性率為 56.67%(17/30)，癌旁組織中GRP78 mRNA的表達陽性率為26.67%(8/30),GRP78 mRNA在食管鱗狀細胞癌組織中表達水平明顯高于癌旁組織。兩組差異有統計學意義(P＜0.05)。

表1 GRP78 mRNA在食管鱗癌組織及其配對癌旁組織中表達

3 討論

從Shiu等人[1]在實驗中誘導產生GRP78以來,GRP78就具有阻止蛋白質錯誤的聚集[2]，在某些影響蛋白折疊及裝配運輸的藥物作用下或在某些應激條件下,GRP78的轉錄活性可以提高10～25倍[3-4]。GRP78的高表達可能是人類食管鱗狀細胞癌細胞在應激條件下生存的一種防御機制。當細胞遭受到各種有害因素（如缺氧、低糖及酸中毒等）侵害時[5],血管供應不足及營養條件較差，可誘導GRP78高表達[6]。本研究隨機選取30例人食管鱗狀細胞癌組織及其配對癌旁組織標本,用RT-PCR法檢測GRP78 mRNA的表達情況，結果表明在食管鱗狀細胞癌組織及其配對的癌旁組織中均可檢測到GRP78 mRNA的表達,但食管鱗狀細胞癌組織中GRP78 mRNA的表達水平明顯高于其配對的癌旁組織,兩組之間的差異有顯著意義。上述結果提示GRP78可能與人類食管鱗狀細胞癌的發生、發展有關,其高表達可能是食管鱗狀細胞癌進展的一個重要特征。因為在食管鱗狀細胞癌的進展過程中,GRP78可以通過保護腫瘤細胞逃逸宿主的免疫監視,從而促進腫瘤增長及對周圍組織侵蝕,對腫瘤細胞的增殖和生存有利。

總之，食管鱗狀細胞癌組織中GRP78 mRNA的表達明顯高于其配對的癌旁組織,提示GRP78可能參與人類食管鱗狀細胞癌的發生、發展的過程。GRP78可以作為一種新的有價值的分子標記物用于食管鱗狀細胞癌的早期預防和早期診斷。

[1]Pastan I H,Shiu RP.Properties and purification of a glucose-regulated protein from chick embryo fibroblasts[J].Biochim Bopphys Acta,1979,576(1)：141-150.

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[3]Lee AS.Coordinated regulation of a set of genes by glucose and calcium ionophores in mammalian cells[J].Trends Biochem,1987,12：20-23.

[4]Delegeane AM,Baker V,Lee AS,et al.Transcriptional regulation of two genes specifically induced by glucose starvation in a hamster mutant fibroblast cell line[J].J Biol Chem,1983,258：597-603.

[5]Vaupel P,Okunieff P,Kallinowski F.Blood flow,oxygen,and nutrient supply,and metabolic microenviroment of human tumors：a review[J].Cancer Res,1989,49：6449-6465.

[6]Amy S.Lee.The glucose regulated proteins：stress induction and clinical applications[J].TRENDS in Biochemical Sciences,2001,26：504-510.

The expression of GRP78 mRNA in esophageal squamous cell carcinoma

HAO Pengcheng1WEI Yucheng2WANG Chong3REN Xiaofeng3LI ziheng3
1.Medical College of Qingdao University,Qingdao 266000,China;2 Affiliated Hospital,Medical College of Qingdao University,Qingdao 266000,China;3 Department of Thoracic Surgery,Shandong Rongjun Hospital,Jinan 250013,China

Objective To investigate the expression of GRP78 mRNA in esophageal squamous cell carcinoma.Methods The expression of GRP78 mRNA in cancerous tissues and paracancerous tissues from 30 patients with esophageal squamous cell carcinoma were analyzed using RT-PCR analysis.Results GRP78 mRNA was positive in 56.67% (17/30)cancerous tissues and 26.67% (8/30)paracancerous tissues of esophageal squamous cell carcinoma.The expression of GRP78 mRNA was significantly higher(P＜0.05)in cancerous tissues compared with paracancerous tissues.Conclusion GRP78 may be involved in the pathogenesis of esophageal squamous cell carcinoma and may be a potential tumor maker of the disease.

Esophageal squamous cell carcinoma；GRP78；RT-PCR

R735

A

1672-5654（2012）07（c）-0014-02

2012-06-10）