替米沙坦對大鼠糖尿病腎病中PPARγ途徑的作用

邵建蘋 李學慶 柏琳 孫艷玲

替米沙坦對大鼠糖尿病腎病中PPARγ途徑的作用

邵建蘋 李學慶 柏琳 孫艷玲

目的 觀察替米沙坦對大鼠糖尿病腎病中PPARγ途徑的作用。方法 予替米沙坦治療大鼠糖尿病腎病。結論 替米沙坦可能通過PPARγ途徑對糖尿病腎病中腎臟損傷起保護作用。

替米沙坦;糖尿病腎病;PPARγ途徑

許多研究表明，在糖尿病腎病的狀態下，腎臟組織中的血管緊張素水平和內皮素-1水平明顯升高，這兩種活性物質通過許多機制參與了糖尿病腎病的發生與進展，其中很重要的一個機制是激活細胞中的細胞外信號調節激酶(ERK)信號通路。此外，近年的研究表明，應用噻唑烷二酮類藥物(TZDs)激活過氧化物酶體增殖物激活受體(PPARγ)能夠改善腎臟病變。替米沙坦可高選擇性地作用于血管緊張素AT1受體，它與胰島素增敏劑吡格列酮有類似的結構，有研究證明它可以部分激活PPAR-γ，而且這種作用并不依賴于血管緊張素Ⅱ受體的阻滯作用，在缺乏血管緊張素受體的情況下這些分子仍能在細胞內激活PPARγ，影響PPARγ靶基因的表達。此外，激活PPARγ可以減少AT1基因的表達，并能抑制血管緊張素Ⅱ對細胞內信號傳導途徑的影響。我們采用鏈脲佐菌素(STZ)誘導的糖尿病大鼠模型，觀察糖尿病狀態下腎臟中PPARγ途徑的變化，以及替米沙坦對該途徑的作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健康雄性SD大鼠20只，體重180～200 g，月齡2～3個月，由哈爾濱獸研中心提供。適應2周后在氯胺酮(50 mg/kg，腹腔內注射)麻醉下行右腎切除術以加速糖尿病腎病模型的形成。2周后予以枸櫞酸緩沖液(10 mmol/L，PH4.5)新鮮配置的鏈脲佐菌素(STZ)60 mg/kg腹腔注射造模，第72小時測血糖，超過16.7 mmol/L者為造模成功，測尿蛋白陽性后考慮為糖尿病腎病，隨機分為模型組及治療組。治療組給子替米沙坦3 mg/(kg·d)灌胃，模型組予以等量生理鹽水灌胃，共12周。第12周末處死大鼠，沿腹中線切開取雙側腎臟，沿冠狀線將腎臟分成兩半，再沿冠狀面將腎臟繼續切分。剝離腎臟被膜，去除周圍脂肪組織，迅速置于液氮中速凍，再移入-80℃冰箱保存，進行RT― PCR檢測。

1.2 RT-PCR檢測

均采用TRIzol試劑一步抽提總RNA，再逆轉錄成cDNA，以適量cDNA為模板，在TagDNA聚合酶(華美公司)催化下行PCR，引物由生物公司設計。PPARγ的引物序列為正鏈：5'-TCC GTG ATG GAA GAC CAC TC-3';負鏈5'-CCC TTG CAT CCT TCA CAA GC-3'。擴增條件為95℃3 min 進入循環，94℃30 s，55℃30 s，72℃1 min，32 個循環后，72℃延伸5 min，終產物為332bp。以GAPDH作為內參照進行校正，以目的基因片斷/GAPDH片斷的條帶光密度比值代表目的基因的相對表達含量，進行半定量PCR分析。

1.3 統計學分析

所有數據均采用SPSS 13.0統計軟件進行分析。計量資料以均數±標準差(s)表示。重復測量資料采用重復測量資料的方差分析(單變量方差分析，univariate ANOVA)。P＜0.05為差異具有統計學意義，P＜0.01為顯著性差異。

2 結果

模型組表達增多，治療組表達與模型組相比明顯減少，差異具有統計學意義(P＜0.05)。

表1

3 討論

過氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)是一類配體激活的核內受體轉錄因子，近年來發現它參與調節細胞的生長分化及凋亡、炎癥反應、脂肪酸及脂類代謝等，并且與許多疾病，如2型糖尿病、肥胖、動脈粥樣硬化、高血壓、腫瘤等密切相關，因而成為研究的熱點。其亞型PPARγ與腎臟病的關系最為密切，它可通過抑制炎癥因子、改善脂類代謝及胰島素抵抗、影響血流動力學等方面保護腎臟。

替米沙坦是一種新型的非肽類ARB類藥物，可高選擇性地作用于血管緊張素AT1受體，對AT1受體的作用強度較之AT2強約20000倍，選擇性高于同類產品，其作用較氯沙坦強6倍。它是目前臨床上所應用的半衰期最長、分布容積最大、經腎臟排泄最少的ARB類藥物。

目前有研究證明替米沙坦可以部分激活PPARγ，而且這種作用并不依賴于血管緊張素Ⅱ受體的阻滯作用，在缺乏血管緊張素受體的情況下這些分子仍然能在細胞內激活PPARγ，影響PPARγ靶基因的表達。而其他ARB類藥物沒有此種作用。通過對PPARγ RT-PCR的檢測發現其在治療組的表達與模型組相比明顯減少，由此推測，替米沙坦除了有拮抗血管緊張素Ⅱ(ATⅡ)的作用外，還有可能通過PPARγ途徑對糖尿病腎病中腎臟損傷起保護作用。在損傷狀態下PPARγ表達增強可能是機體保護性的代償反應，使之易于被內源性的配體活化，對抗細胞增殖及炎癥反應。然而PPARγ表達上調可被替米沙坦抑制，可能由于PPARγ的過度應激有可能導致腎臟固有細胞過度凋亡，對機體損傷的恢復不利，因此配體對受體的反饋抑制作用也可能是機體適應性的調節反應，而其機制等方面的探討則需進一步研究加以證明。

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