5-Fu與三種抗癌藥對大腸實體瘤的聯合用藥體外藥敏試驗

王海燕

通常情況下的體外藥敏試驗采用單藥進行研究，因此得到的結果僅為單藥的體外敏感性，這與臨床上采用的聯合化療結果可能存在差異，不能夠真實反映出聯合化療過程中各個藥物間的拮抗、相加或協同作用［1］。因此，本研究采用甲基噻唑基四唑方法對114例大腸癌細胞開展不同化療藥物的體外敏感性測定，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 我院自2009年12月至2011年12月期間共收治114例大腸癌患者，其中男50例，女64例;年齡33～82歲，平均為(65.1±11.7)歲;其中50例為直腸癌，64例為結腸癌;病理檢查結果顯示均為腺癌，其中中分化腺癌90例、中-低分化腺癌18例，低分化腺癌6例。

1.2 抗癌藥物工作液 抗癌藥物均使用生理鹽水進行配制，并于-20℃保存備用。其中氟尿嘧啶(5-Fu)的質量終濃度為100 mg/L;絲裂霉素(MMC)終濃度10 mg/L;順氯氨鉑(DDP)為20 mg/L;卡鉑(CBDCA)為50 mg/L。綜合分析藥敏試驗結果進行篩選，最終確定化療方法包括:5-Fu+MMC;5-Fu+DDP;5-Fu+CBDCA。上述藥物的終質量濃度同單藥使用濃度相同。

1.3 方法 應用手術剪刀將大腸癌標本剪碎，對于較小且較硬的瘤體，可采用0.2 mg/ml的膠原酶以及脫氧核糖核酸酶進行消化，通過篩網過濾，用RPMI 1640培養液制成1×106～5×106個細胞/ml的癌細胞懸液，置于96孔培養板中［2］。分別設置給藥組、對照組以及空白組，給藥組給予抗癌藥，保證單藥與聯合用藥均達到終質量濃度;對照組未給予抗癌藥;空白組僅給予培養液，且無大腸癌細胞。溫度為37℃時CO2(5%)培養72 h。每孔內加入20 μl以生理鹽水配置而成的MTT(5 mg/ml)溶液，待4～8 h后每孔再加入濃度為10%的十二烷基硫酸鈉100 μl，于第2天通過微量盤讀數儀在570 nm波長下記錄各孔光密度(D)值。抗癌藥抑制率(%)=(1-D給藥組/D對照組)×100%。評價兩種藥物聯用的拮抗、協同或相加效應根據金氏公式觀察q值［2］。公式為q=EA+B/EA+EB-EA×E B。其中的EA+B表示兩藥聯用抑制率;EA與EB表示單用時抑制率;q大于1.15代表兩藥聯用發揮協同作用;q小于0.85代表兩藥聯用發揮拮抗作用;0.85≤q≤1.15代表兩藥聯用發揮相加作用［3］。

1.4 數據統計學分析 采用SPSS 16.0軟件進行統計分析，計量資料采用均數±標準差(±s)表示，組間比較進行t檢驗，組間率的比較進行χ2檢驗，對于P＜0.05代表差異具有統計學意義。

2 結果

在全部大腸癌細胞中，對照組D值小于0.1者14例。聯用抗癌藥物對100例大腸癌細胞的抑制率高于單獨用藥，其中DDP組與5-Fu+DDP組，CBDCA組與5-Fu+CBDCA組相比，差異顯著(P＜0.01)，具有統計學意義。見表1。按照3組聯用方案得到對100例大腸癌細胞發揮作用的體外抑制率，得到其q值，并根據金氏公式得到5-Fu+MMC聯合給藥后q=1.002±0.253，出現拮抗者為22例、相加者為52例、協同者為26例;5-Fu+DDP組的q=1.042±0.283，出現拮抗者為20例、相加者為38例、協同者為42例;5-Fu+CBDCA組的q=1.194±0.259，出現拮抗者為14例、相加者為46例、協同者為40例。

表1 三種藥物單用以及同5-Fu聯用后對大腸癌細胞的抑制率［n=100，(±s)，%］

表1 三種藥物單用以及同5-Fu聯用后對大腸癌細胞的抑制率［n=100，(±s)，%］

注:同單藥組相比，＊＊P＜0.01

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3 討論

目前治療大腸癌的主要方法是以5-Fu為基礎用藥的聯合化療過程。聯合用藥能夠產生協同作用，其臨床療效比各單藥之和要好得多。但是，必須考慮到的是聯合用藥也可能出現療效下降，即發生拮抗的可能性，倘若不合理的聯合用藥將給患者帶來不堪設想的后果。5-Fu能夠阻礙DNA的合成，造成癌細胞因DNA合成受阻而死亡;DDP、MMC以及CBDCA能夠破壞DNA結構，進而將癌細胞殺滅［4］。所以將5-Fu與上述三種藥物聯合用藥能夠發揮互補性作用，從理論上分析應當具有協同作用，聯合給藥后其臨床療效應該好于單用5-Fu。本研究的體外藥敏試驗測定結果也的確證實了上述觀點。據此，我們推測大腸癌細胞體外聯合藥敏試驗可能與臨床化療效果存在一定的相關性，能夠有助于臨床選擇具有協同作用、摒棄具有拮抗作用的化療藥物組合。總之，體外抗癌藥物合用藥敏試驗是切實可行的，但其與臨床療效是否具有相關性尚不能確定，隨著將來對聯合用藥各藥物之間作用機理研究全面開展，必將建立起更為科學的體外聯合藥敏試驗方法。

［1］翟曉波，李炳生，張毅，等.MTT法和雙瓊脂MTT法測腫瘤藥敏及其臨床應用.中國臨床藥學雜志，1996，5(3):102.

［2］侯華新，黎丹戎，秦菁，等.黃芩黃酮A對人肝癌細胞7402的抑制能力及體外增效作用.中國臨床藥學雜志，2000，9(3):166.

［3］潘啟超，胥彬.腫瘤藥理學與化學治療學.第2版.鄭州:河南醫科大學出版社，2000:626-637.

［4］任建林，田林，梁建芳.大腸癌細胞原代培養及5-氟脲嘧啶藥敏檢測的研究.山西醫藥雜志，2010，17(9):824-826.