轉甲狀腺素蛋白含量及化學修飾在肺癌診斷中的價值

趙 輝 潘 濤 王慶艷 么作義 張國棟 董全紅 王寶菊 張明紅 孫續國

(天津醫科大學醫學檢驗學院，天津 300203)

轉甲狀腺素蛋白含量及化學修飾在肺癌診斷中的價值

趙 輝1潘 濤1王慶艷2么作義1張國棟3董全紅1王寶菊1張明紅1孫續國

(天津醫科大學醫學檢驗學院，天津 300203)

目的 研究血清和腹水轉甲狀腺素(TTR)蛋白含量和化學修飾類型，在肺癌診斷中的作用。方法 日本東芝TBA120全自動生化分析儀測定血清和胸水總蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、乳酸脫氫酶(LDH)及葡萄糖(GLU)的含量。免疫比濁法測定TTR、Apo A和Apo B三種蛋白含量。基?結果 胸水中有6種成分含量比血清明顯減低，減低程度明顯的順序依次是：TG、TC、Apo A、Apo B和TTR，而增高的僅LDH一項指標。在蛋白指標中TTR減低最明顯。肺癌患者胸水TTR發生3種類型化學修飾，其中GLUT-TTR修飾型明顯增高。結論肺癌患者胸水TTR含量明顯低于血清，并且glut-TTR修飾比例明顯增高，可能作為肺癌診斷的輔助參考指標。

肺癌;轉甲狀腺素蛋白;胸水;血清

肺癌為當前世界各地最常見的惡性腫瘤之一，我國肺癌發病率已高達61.4/10萬，且呈現不斷攀升趨勢〔1〕。臨床診斷肺癌的方法主要依靠核磁共振(MRI)與CT等影像學檢查，但最終確定診斷仍然需要依靠組織病理學檢查〔2，3〕。肺癌起病多隱秘，早期臨床表現不典型，臨床確定診斷時60% ～70%患者已經處于中晚期。多數學者提倡探索腫瘤標志物，尋找肺癌早期輔助診斷的生物標志物，臨床已廣泛實用的有CEA、CA125、NSE等多項指標〔4，5〕。腫瘤標志物研究學者試圖尋求能夠診斷肺癌的腫瘤標志物〔6〕。但是腫瘤標志物均存在敏感性和特異性低的缺點〔7〕。人血清轉甲狀腺素蛋白(TTR)與肺癌表達有關系〔8〕，比較胸水與血清之間TTR蛋白含量和化學修飾的差異，將有助于肺癌的輔助診斷和預后評估。

1 材料與方法

1.1 材料

收集胸科醫院肺癌患者31例，男14例，女17例，年齡48～83歲。健康對照組16例男10例，女6例，年齡45～65歲，所有患者經過MRI，CT影像診斷和病理診斷為肺癌?；颊呖崭故占? ml用于生化項目測定。同時采集胸水留取10 ml用于生化項目和細胞形態學、計數測定。

1.2 方法

利用日本東芝TBA120全自動生化分析儀，試劑使用上海執誠生物技術有限公司和北京科美生物技術有限公司的產品，測定血清和胸水中各生化指標?；瘜W反應方法測定總蛋白(TP)、白蛋白(Alb)含量;酶反應動力學測定 葡萄糖(Glu)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)含量和乳酸脫氫酶(LDH)、腺苷脫氨酶(ADA)活性。免疫比濁法測定轉甲狀腺素蛋白(TTR)、載脂蛋白A(Apo A)、和載脂蛋白B(Apo B)含量，按照說明書操作，測定血清和胸水標本中上述三種指標?；|輔助激光解析電離飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)法分析TTR 蛋白化學修飾，150 μl血清或胸水標本中加入15 μl抗-人血清TTR抗體，37℃作用1 h，離心5 min，沉降物分別用生理鹽水和超純水各洗滌2次，最后使TTR蛋白與相應抗體分離，質譜分析TTR化學修飾。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 比較肺癌患者血清與胸水之間生化指標的差異

肺癌患者胸水與血清有8項生化指標差異顯著(P＜0.05)，脂質和脂蛋白成分降低最明顯，其次為蛋白指標，其中TTR降低最為明顯，而LDH增高(表1)。

表1 血清與胸水之間生物化學成分水平的差異(± s，n=31)

表1 血清與胸水之間生物化學成分水平的差異(± s，n=31)

組別 TG(mmol/L)TC(mmol/L) ApoA(g/L) ApoB(g/L) TTR(g/L) TP(g/L) Alb(g/L) ADA(U/L)GLU(mmol/L)LDH(U/L)胸水 0.33±0.35 1.46±0.61 0.43±0.12 0.53±0.11 0.10±0.04 35.91±7.26 23.16±5.36 5.85±3.16 4.82±2.29 319.87±346.25血清 1.21±0.55 4.27±0.90 1.05±0.17 1.03±0.17 0.18±0.05 60.64±7.18 37.58±3.55 8.21±10.59 5.62±1.36 224.72±196.00胸水/血清 0.27 0.34 0.40 0.51 0.56 0.59 0.62 0.71 0.86 1.42 P值 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.239 0.047 0.175

2.2 測得的蛋白指標含量

在分析的免疫球蛋白、Alb和TTR中，半衰期最短的為TTR蛋白，其中Alb為19～21 d，代表球蛋白的IgM及IgG在10～23 d之間。通過含量變化指標診斷肺癌和預后觀察，建議選擇半衰期短的TTR蛋白作為判定指標(表2)。

2.3 MALDI-TOF/MS法比較兩組之間TTR蛋白的化學修飾

MALDI-TOF/MS分析結果顯示，健康對照組和肺癌患者血清及胸水TTR均發現四種修飾峰，說明TTR蛋白具有三種修飾類型，其型別依次為：b：磺化TTR(sul-TTR);c：半胱氨?；疶TR(cys-TTR);d：半胱氨酰甘氨酰化TTR(cysgly-TTR)，肺癌患者與健康對照血清內TTR修飾類型和比例也未見有明顯改變，但患者胸水中cysgly-TTR型比例明顯增高(表3)。

表2 蛋白血清含量及半衰期

表3 TTR蛋白修飾類型的比例(± s，%)

表3 TTR蛋白修飾類型的比例(± s，%)

與對照組血清比較：1)P＜0.05

組別TTR sul-TTR cys-TTR cysgly-TTR對照組血清26.8±3.5 21.9±3.8 51.2±6.8 7.3±0.8肺癌血清 8.8±0.9 16.2±1.4 70.7±7.3 5.2±0.61)肺癌胸水 5.3±0.6 9.9±1.1 50.3±4.9 30.5±4.11)

3 討論

肺癌患者胸腹水TTR蛋白水平明顯低于血清，MALDITOF-MS測定TTR蛋白均發現3種主要修飾類型，并且患者胸水內cysgly-TTR修飾類型比例增高明顯。胸水內TTR蛋白含量與cysgly-TTR修飾型有可能作為肺癌診斷的參考指標。

血清內TTR蛋白幾乎全部來源于肝臟細胞合成分泌，肺組織細胞內未見有TTR蛋白mRNA和蛋白表達〔9〕，說明胸水內TTR主要來源于肝臟實質細胞產生和分泌。結果發現胸水內含量最低的為脂質成分指標。眾所周知，Apo A和Apo B為組成脂蛋白成分，結合TG和TC檢測項目，胸水內四項指標均明顯低于血清水平，提示血清內大分子成分難以通過漿膜層，脂質和脂蛋白指標難以用于肺癌胸腔積液評價指標。本文結果提示肺癌患者細胞能量消耗或降解因素可能影響胸水TTR蛋白含量。

為分析TTR化學修飾在肺癌診斷中的作用，先前本組已經建立MALDI-TOF-MS分析TTR修飾，方法簡便、可靠。分析對照與肺癌患者血清，發現均存在痕量的cysgly-TTR修飾型，進一步計算修飾比例發現cysgly-TTR比例明顯增高，提示cysgly-TTR型有可能為肺癌患者診斷的參考指標。

綜上所述，肺癌患者胸水內TTR蛋白含量明顯低于血清，但修飾型(cysgly-TTR)比例明顯增高，TTR含量和修飾類型，有可能作為診斷肺癌的參考指標。

1 郭其森，孫玉蘭.非小細胞肺癌的綜合治療原則〔J〕.山東醫藥，2011;51(3)：101-2.

2 尚 軍，高 紅，趙明增.多層螺旋CT低劑量掃描在肺結節檢查中的作用〔J〕. 實用醫藥雜志，2011;28(3)：233-4.

3 潘紀青.周圍型小肺癌的CT表現及檢查方法〔J〕.上海醫學影像，2005;14(4)：284-6.

4 任文貴，任 怡，劉 彬，等.肺癌的早期診斷檢查方法概述〔J〕.航空航天醫學雜志，2011;22(2)：159-60.

5 安玉增，姜淑華，張 丹，等.CEA、CA125、CYFRA21-1/NSE聯合檢測在肺癌診斷中的臨床意義〔J〕.標記免疫分析與臨床，2011;18(2)：117-9.

6 陳 萍.突變型K-ras蛋白在非小細胞肺癌的表達及臨床意義〔J〕.中國實用醫刊，2009;36(14)：24-5.

7 蔣焱熠，劉一臻，史志周，等.uPA、ET-1蛋白在非小細胞肺癌中的表達及其臨床相關性〔J〕.中國肺癌雜志，2011;21(1)：49-53.

8 Liu L，Liu J，Dai S，et al.Reduced transthyretin expression in sera of lung cancer〔J〕.Cancer Sci，2007;98(10)：1617-24.

9 Richardson SJ.Evolutionary changes to transthyretin：evolution of transthyretin biosynthesis〔J〕.FEBS J，2009;276(19)：5342-56.

R73

A

1005-9202(2012)23-5140-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.23.018

唐山市科技支撐基金項目(No.20081374)

1 唐山市傳染病醫院 2 唐山市豐潤區人民醫院

3 唐山市協和醫院

孫續國(1965-)，男，教授，博士生導師，主要從事臨床檢驗診斷研究。

趙 輝(1970-)，男，副主任藥劑師，主要從事臨床藥學方面的研究。

〔2011-09-29收稿 2011-12-12修回〕

(編輯 曹夢園)