雞大腸桿菌病病原的分離鑒定

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雞大腸桿菌病病原的分離鑒定

于鵬杰 （山東省諸城市畜牧局 262200）

無菌采取某雞場送檢的疑似大腸桿菌病的病死雞的心血、肝、脾、腎，進行病原菌的分離、鑒定、生化試驗，動物試驗和藥敏試驗。結果顯示引起該雞場雞只發病的病原為大腸桿菌，并且該菌對小白鼠和雞有較強的致病力，對阿米卡星、鏈霉素、慶大霉素、氟苯尼考敏感，對環丙沙星、痢特靈中度敏感；諾氟沙星不敏感；新諾明、紅霉素、青霉素、氨芐西林、頭孢唑啉鈉則對其沒有抑菌作用。表明該雞場出現了耐藥的致病性大腸桿菌。

大腸桿菌 分離鑒定 致病性 藥敏試驗

大腸桿菌病是由大腸桿菌某些血清型菌株引起的一類疾病的總稱。各個品種和日齡的雞均可發病，但肉仔雞最易感。該病一年四季均可發生，尤以冬季及夏季多發。在臨床上可表現為敗血癥、氣囊炎、肝周炎、心包炎、臍炎、關節炎、腦炎等，發病率高，死亡率高，且因與其他呼吸道疾病如慢性呼吸道病混合或并發感染而使死亡率升高。隨著養禽業的迅速發展與高度集約化飼養，雞大腸桿菌病已成為雞群重要的疾病之一。為了控制雞大腸桿菌在雞群中的傳播，筆者對送檢的疑似大腸桿菌病例進行病原的分離鑒定，并對分離菌的培養特性、致病力及抗菌藥物的敏感性進行了研究，為有效防制雞大腸桿菌病提供了依據。

1 材料與方法

1.1 病料來源 2010年10月諸城市市某雞場送檢的疑似大腸桿菌病的病、死雞若干只，已死亡雞只死亡時間不超過12h。

1.2 細菌分離培養 無菌采集病、死雞的肝臟、心血等組織，接種在普通瓊脂平板及普通肉湯，37 ℃培養20 h，抹片，革蘭氏染色后鏡檢。挑取表面光滑，邊緣整齊，灰白色半透明的單個小菌落劃線接種于麥康凱瓊脂平板，于37 ℃培養20 h[1]。

1.3 細菌形態學觀察 取在麥康凱瓊脂平板上培養20h的新鮮菌落，抹片進行革蘭氏染色鏡檢。

1.4 生化試驗 糖發酵及生化反應按常規進行[2]。

1.5 致病力測定 （1）菌液制備：將分離菌接種于營養肉湯，于37 ℃培養20 h，4 ℃保存備用。（2）動物試驗：將購買的實驗小鼠10只，隨機分為A1、B1兩組，每組5只。A1組為試驗組，B1組為對照組。A1組腹腔接種營養肉湯菌液，0.2ml/只；B1組腹腔接種相同劑量的滅菌生理鹽水，隔離飼養[3]。從市場購10日齡羅曼蛋雞10只，飼養1周，臨床健康。隨機分為A2、B2兩組，每組5只。A2組雛雞頸部皮下接種0.2ml營養肉湯菌液；B2組腹腔接種相同劑量的滅菌生理鹽水，隔離飼養。

1.6 藥敏試驗 按K-B紙片擴散法將被檢細菌涂布接種于普通瓊脂平板上，間隔一定距離貼上各種藥敏試紙[2]，于37℃培養24 h，結果判斷依據《紙片法抗菌藥物敏感試驗操作標準》(第4版)進行。

2 結果

2.1 病雞及病死雞的病理剖檢變化 病雞肝臟腫大、質脆，有點狀壞死灶，表面覆蓋有黃白色的纖維素性滲出物；脾臟腫大，肺充血、淤血，部分雞肺臟有1~2mm大小壞死灶；腎臟腫大，有尿酸鹽沉積；十二指腸有出血性腸炎變化；盲腸扁桃體腫脹、出血。

2.2 細菌分離 在營養瓊脂平板上37℃培養20h后，形成中等大小，圓形微凸起，表面光滑濕潤，淺灰色半透明菌落。在麥康凱瓊脂平板上，形成中等大小，表面光滑濕潤的粉紅色菌落。

2.3 細菌形態學觀察 病死雞肝、腎等組織培養物涂片染色鏡檢，均可見兩端鈍圓，多數散在排列，偶爾有2~3個連在一起的革蘭氏陰性短桿菌。

2.4 生化試驗結果 生化試驗結果顯示，此次分離的大腸桿菌對甘露醇、麥芽糖、葡萄糖、蔗糖、鼠李糖、蕈糖、果糖產酸產氣，MR、棉子糖、山梨醇、鳥氨酸結果陽性，VP、衛矛醇、肌醇、硝酸鹽、酒石酸鹽、水楊素、精氨酸水解酶、側金盞酰、DNA、阿拉伯醇、血清菊糖、鳥氨酸、精氨酸脫羧酶、丙氨酸鹽、ONPG、乙酰胺結果陰性，符合大腸桿菌的生化特征。

2.5 動物試驗 （1）肉湯中生長情況：分離菌在肉湯中培養18~24h，呈均勻混濁，管底有黏性沉淀，液面管壁有菌環。（2）致病性結果：A1組小鼠，4只24 h內死亡，1只36 h內死亡。剖檢可見肝臟腫大，有出血點和壞死點；腸嚴重膨氣，心包淤血，肺出血，脾臟淤血。采取A1組小鼠的心血、肝和脾接種在普通瓊脂平板及普通肉湯，37℃培養20h，有細菌生長。革蘭氏染色及生化鑒定表明此菌與接種細菌為同種細菌。表明該菌對小鼠具有較強的致病力。B1組飼養7d后全部存活，剖檢未見病變。A2組雛雞3d內全部死亡，剖檢有與原發病雞只相同的明顯病變，雛雞的心血、肝和脾均能回收到接種菌；B2組雛雞全部健康存活，7 d后剖檢未見有病變。

2.6 藥敏試驗 結果見表1。由表1可見，此次分離的大腸桿菌對阿米卡星、鏈霉素、慶大霉素、氟苯尼考敏感，對環丙沙星中度敏感，對諾氟沙星和痢特靈不敏感，而紅霉素、青霉素、氨芐西林和頭孢唑啉鈉對分離菌完全沒有抑制作用。新諾明的抑菌效果有待進一步證實，分離菌對其不敏感的一個可能原因是藥物已接近其使用期限。

表1 分離菌株對12種藥物的敏感性 (mm)

3 討論

（1）近十幾年，在肉雞生產中，為了控制大腸桿菌及某些細菌感染，在飼料添加劑及治療中盲目使用一些抗菌藥物，導致耐藥菌株越來越多并日趨嚴重。而且大腸桿菌可通過菌毛將其抗藥性質粒傳遞給其他大腸桿菌，所以大腸桿菌的抗藥性形成較快，環境中大腸桿菌耐藥性菌株越來越多。藥敏試驗結果可以看出，曾對大腸桿菌比較敏感的環丙沙星、諾氟沙星、痢特靈、頭孢唑啉鈉等隨著不斷的應用均產生了不同程度的抗藥性。所以，在使用藥物治療大腸桿菌病時，有條件的應根據藥敏試驗結果，選擇敏感藥物，且應注意交替用藥，按療程投藥，這樣才能收到較好的治療效果。（2）大腸桿菌是條件性致病菌，防制該病的關鍵在于加強飼養管理，做好各個環節的衛生消毒，消除各種發病誘因。日常要提供全價優質飼料，并足量補充維生素和電解質；夏季還要注意防暑；應添加飼料添加劑，如碳酸氫鈉、桿菌肽鋅、維生素C等；嚴格執行衛生防疫措施，創造一個良好的飼養環境。由于各地大腸桿菌的血清型，特別是優勢血清型存在差異，有效而通用的菌苗尚未出現，因此篩選地區性免疫原性優良的大腸桿菌菌株制作菌苗，乃是防制雞大腸桿菌免疫預防的基礎。有條件的肉種雞場，最好采用自家滅活苗，這樣效果可靠，更適用于血清型復雜的地區。

[1] 吳清民. 家畜傳染病學[M]. 北京: 中國農業出版社. 1998.

[2] B. W 卡爾尼可. 禽病學[M]. 北京: 北京農業大學出版社. 1991.

[3] 何華西. 畜禽疫病防治[M]. 北京: 高等教育出版社, 2002.

（2012–06–13）

S858.31

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1007-1733(2012)11-0016-02