水貂肉毒梭菌毒素中毒的診治

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水貂肉毒梭菌毒素中毒的診治

李昆朋 （山東省青州市畜牧局 262500）

2012年3月初，山東省濰坊市一水貂養殖場的水貂突然發病。該養殖場現共有1800只貂，其中300只為種貂。此次發病半月左右，已死亡20~30只。死亡情況與水貂的日齡及性別差異無明顯關聯性。初期，病貂有咳嗽現象，2~3d后開始不食，不食3~6d后出現死亡。從發生不食情況開始到死亡為止，病貂糞便顏色依次呈黃綠色，黃色，棕色。大多數病貂死后身體不發生僵硬。該養殖場飼喂用料為凍魚、冷凍雞腸、膨化玉米，凍魚僅用水沖洗，冷凍雞腸解凍后不清洗，并且在制成濕料后添加了少量食用保鮮劑。

此次發病后曾在濰坊市不同地區就診過2次，首次檢查確診為血蟲病及腸炎。二次檢查，經解剖觀察診斷為腸炎。曾用大觀霉素、黃芪多糖、電解多維、磺胺甲氧嘧啶，無明顯藥效。氨芐西林鈉與地塞米松磷酸鈉合用，僅對部分病貂有一定療效，且出現病情反復。經兩次診治后療效不佳，特送來進行檢驗。本病通過臨床癥狀、病理解剖及實驗室檢查，疑似水貂肉毒梭菌毒素中毒病。

1 臨床癥狀

病貂精神沉郁，不食，被毛雜亂無光澤，口腔黏膜略有蒼白，咳而不喘，糞便呈黃綠色、棕色，尿液顏色偏黃，大多病貂死后身體不發生僵硬。

2 剖檢癥狀

肺部充血水腫，局部淤血壞死；肝臟腫脹，呈土黃色；腎臟腫脹，蒼白；脾臟腫脹；膀胱內有尿液潴留，色澤偏黃；機體各處淋巴結未見明顯的病理性變化；胃腸輕微鼓氣，未見明顯出血點。

3 實驗室診斷

3.1 細菌分離培養 取水貂吃剩的飼料及胃內容物，用滅菌的緩沖液稀釋，均分為2份。一份不加任何其他處理，另一份90℃加熱30min以殺死細菌而非芽孢。待處理過的樣品冷卻至室溫后，將兩份樣品同時接種于已制備好的庖肉培養基，經12h后觀察，石蠟沖起，肉渣變黑腐敗惡臭。第5d后挑取具有典型特點的菌落接種于卵黃瓊脂平板，進行分離純化，35℃厭氧培養48h，挑取48h培養后的單菌落進行涂片鏡檢，觀察并記錄菌落形態等。

3.2 生化反應 取分離純化后的培養物進行明膠穿刺培養，同時使用葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖生化管進行生化實驗，觀察并記錄試驗結果。

3.3 動物接種 取病死水貂胃內容物及剩余飼料按照1：2用量加入緩沖液，無菌環境下充分研磨，室溫下放置1~2h充分浸出后，濾紙過濾，將濾液分為兩份。一份不加任何處理，作為試驗組，另一份100℃加熱30min滅活毒素，作為對照組。

取體況相似的健康小白鼠6只，3只腹腔注射實驗組液體0.5ml/只，3只腹腔注射對照組液體0.5ml/只。將6只小鼠置于同一適宜的環境下飼養，觀察并記錄試驗結果。另取體況相似的公雞2只(體重約為2kg)，分別于左眼內接種試驗組液體，右眼內接種對照組液體，用量均為0.2ml，觀察并記錄試驗結果。

4 診斷

4.1 細菌分離培養結果 卵黃瓊脂平板上生長出的菌落具有典型的形態特點，其菌落及周圍培養基表面覆蓋著特有的虹彩樣(或珍珠層樣)薄層。挑取厭氧培養48h后的典型單菌落染色鏡檢，可見革蘭氏陽性大桿菌，兩端純圓，芽胞位于菌體近端呈網球拍狀，帶芽胞的菌體呈半透明狀，單個或成短鏈排列存在。

4.2 生化結果 細菌能沿穿刺線生長，培養基出現液化，產氣。生化管反應結果見表1。

4.3 接種動物的反應 （1）小白鼠接種后2h，試驗鼠出現肌肉麻痹并逐漸進入癱瘓狀態，3只試驗組小鼠分別于腹腔注射后4、4.5h后死亡，剖檢觀察，病變典型。（2）小公雞接種后約3h，一只左眼因麻痹呈半閉合狀，用小棒敲擊刺激仍無法睜開，右眼正常。接種后約4h另一只雞也出現上述癥狀，直至次日中午才恢復正常。

表1 生化管反應結果

5 確診

綜合臨床診斷以及實驗室診斷結果，確診這起水貂發病致死的原因為肉毒梭菌毒素中毒。

6 防治

（1）立即停喂已變質或疑似變質的飼料。（2）雞腸、魚、肉在飼喂前，用0.3%KMnO4浸泡3~5min，瀝干水分后，用清水沖洗一遍。（3）在飼料中拌入一定量的解毒劑。按照1kg/50kg飼料的濃度，向飼料中拌入葡萄糖。并按照臨床使用量加入氟苯尼考、強力霉素。另外，添加一定量的復合VB，在飼料臨近飼喂時加入VC，不可過早加入，防止其失效。（4）及時清理、清洗絞肉設備。每次使用后，先用清水沖洗干凈，再用季銨鹽類消毒劑進行清洗。

7 討論

水貂肉毒梭菌中毒是由于食入了含有肉毒梭菌毒素的動物性飼料所引起的一種急性中毒病，該病以呈現運動中樞神經麻痹及延腦麻痹為特征的癥狀，若不及時地采取治療措施，易引發患病動物的大批死亡。

肉毒梭菌是一種能夠產生芽胞的革蘭氏陽性大桿菌，并能產生多種外毒素。肉毒梭菌的芽孢分布廣泛，動物腸道、糞便、腐敗的尸體、變質的飼料中都經常含有肉毒梭菌及其芽孢。肉毒桿菌芽胞抵抗力很強，干熱180℃5~15min、濕熱100℃5h、高壓蒸氣121℃ 30min才能被殺死。該菌能在動物尸體、肉類、飼料中繁殖，并能在繁殖過程中產生6種外毒素，毒力相當，但抗原性不同。肉毒梭菌主要依靠其強烈的外毒素致病。據報道，肉毒毒素是已知最強烈的毒素，毒性比氰化鉀強104倍。其對酸的抵抗力特別強，胃酸溶液24h內不能將其破壞，故可被胃腸道吸收。本病的潛伏期為4~20d，患病動物多數突然發病，迅速死亡。

本病主要發生在氣溫較高的夏季，但并無明顯的季節性。水貂肉毒梭菌中毒的傳染源主要是被該菌污染的飼料。水貂吃了含有肉毒梭菌及其毒素的飼料就會發生中毒現象。然而含有毒素的飼料在外觀上并無明顯變化，不易被發現。這種被污染的飼料即使被存放于低溫冷庫中也不能破壞其中的毒素，后期飼喂的時候仍然會引起中毒。因此，該病發病無明顯的季節性，亦不分年齡、性別，均易感。

處理肉毒梭菌中毒病的關鍵在于預防，動物性飼料要保證新鮮、無污染。對于冷藏的肉類及其副產品，在冷藏前應保證無污染，購買回來后要快解凍、快加工，防止二次污染。

飼料加工所使用的機械設備等應及時清洗干凈，經常消毒。通過對飼養員的詢問了解到，該養殖場飼喂用料為凍魚、冷凍雞腸、膨化玉米，凍魚僅用水沖洗，冷凍雞腸解凍后不清洗，并且在制成濕料后添加了少量食用保鮮劑。首先，冷凍的魚、雞腸均未經過徹底的清洗消毒，簡單的沖洗并不能去除其中可能存在的細菌與毒素，而后又不經過高溫煮熟直接飼喂生食，給水貂患病帶來很大隱患。其次在未確認解凍后的雞腸、魚是否被污染時就添加了保鮮劑，保鮮劑對動物性飼料新鮮度的維持的同時，也為可能存在的病原菌提供了良好的生存、繁殖環境，因此，在水貂飼養過程中，不要僅憑想象進行操作，要考慮清楚操作的利弊。有條件的養殖場可于每年定期進行一次預防接種。倘若發生此病，應立即停止飼喂可以飼料，對癥治療，避免造成更大的損失，有條件的可以使用對應抗原型的抗毒素進行肌肉注射。

（2012–07–31）

S828.92

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1007-1733(2012)11-0065-02