養殖河豚魚的海洋尾絲蟲病病例

麻麗丹，王殿夫，于曉婕，吳 斌

（1.丹東出入境檢驗檢疫局，遼寧 丹東118000；2.遼東學院動物科學系，遼寧 丹東118000；3.四川大學生命科學院，四川 成都610207；4.遼寧出入境檢驗檢疫局，遼寧 大連116001）

2007年，遼寧丹東河豚魚養殖場時常發生一種由盾纖毛蟲感染導致的寄生蟲病，造成河豚不同程度的死亡，而且該病每年反復發作，給該產業帶來一定的經濟損失，本文介紹了對該寄生蟲的分離培養和鑒定結果［1－2］。

1 材料與方法

1.1 材料 患病河豚魚取自遼寧丹東東港的河豚魚養殖場，患病河豚魚臨床表現為攝食不佳，病魚浮游水表面，不底棲，病魚體色發黑，黏液增多，體表潰爛，肌肉出現潰爛出血，背部白濁、脫皮，頭部紅腫，鰓蓋內側腫脹、充血、積水，鰓褪色或糜爛，腹部膨脹，局部紅腫、出血或潰爛，鰭出血或潰爛，嚴重時腹腔積水，腹腔壁潰爛，肝臟出血或糜爛，腸道松弛、擴張、透明、積水，腎臟液化。

1.2 寄生蟲的分離鑒定

1.2.1 寄生蟲的活體觀察和培養 寄生蟲的活體觀察：本病可根據外觀癥狀初步診斷后，從病魚或瀕死魚的病灶組織上取少許樣品，制成水封片，在顯微鏡下觀察到大量蟲體，進行觀察和拍照。

寄生蟲的培養：取健康的河豚魚1條，去內臟去皮后取肌肉并用剪刀絞成細小的塊狀，放入玻璃燒杯內并加入一定量的已滅菌海水，加熱煮沸30 min，用滅菌4層紗布過濾后放4℃冰箱保存備用。培養基為海水：魚肉湯的比例為10∶1進行配制，同時在培養基中加入一定量的青霉素（終濃度為25 mg／L）和鏈霉素（終濃度為25mg／L）。接種時用滅菌鑷子刮取魚病料部位的黏液，接完種后蓋上硅膠塞，并置于15℃～20℃的130r／min震蕩水域中震蕩培養24h，爾后室溫放置保存。

1.2.2 Wilbert之蛋白銀法染色觀察［3］蛋白銀染色技術最早為一組織染色法，Bodion（1937）首先將之應用于原生動物上，經過幾十年來不斷的改進，已成為纖毛蟲纖毛圖示顯示的最重要和最基本的方法。主要用以顯示蟲體的皮層及內部結構，如纖毛下器、毛基體、核器及各種表膜下纖維系統等，而銀線系統則不被染色。具體步驟為：（1）蟲體于胚胎皿中用Bouin液或飽和升汞（HgCl2）固定20min左右，固定過程中可每隔0.5min將胚胎皿輕輕同方向旋轉以便蟲體集中在中央。（2）蒸餾水洗3～4次（Bouin液以水洗至無色為準），操作時用粗口吸管自固定液表面小心吸去上層液，為防止蟲體浮起，應至少留1mL余液于胚胎皿中，后用大口吸管（保持吸管垂直位）逐滴加入蒸餾水（應靠近水面，并環繞四周但離開凹槽壁小心滴入，注意勿使水滴沿胚胎皿壁切入水底面攪動蟲體）。（3）以最細微吸管小心將蟲體“吹”至皿中心。（4）用0.1%～0.2%次氯酸鈉或次氯酸鉀微量直接供到蟲體處以漂白至“透明”（約1～2min）。（5）蒸餾水洗2次（以完全清洗為度）。（6）將胚胎皿中蛋白銀濃度控制在約0.5%，加蓋后于50℃～60℃的恒溫箱底板上保持30～50 min（視不同種類的嗜染狀況及蟲體大小而調整時間）。（7）室溫下用0.1%～0.2%的顯影液顯影1～5min（或更短）。（8）鏡檢后用5%硫代硫酸鈉定影約5min。（9）蒸餾水洗1次（此時應清潔蟲體），將蟲體轉入載玻片上并與等量的戴白膠混勻，用眉毛筆調體位（在必要時，如需腹面朝上等），除去余液，至溫箱烘片約10min。（10）常規脫水封片（70%酒精起－80%－90%－95%－100%－無水酒精和二甲苯混合液（1∶1）－二甲苯－二甲苯，以上過程每步約2～5min。其中在無水酒精中每步應不少于5min，以確保徹底脫水）。

2 結果

2.1 寄生蟲的活體觀察結果 在顯微鏡下蟲體略成葵花籽形，長50～75μm，寬20～50μm，內質不透明，常有多個食物泡及內儲顆粒，初步判斷為盾纖毛蟲，患病魚體和寄生蟲分別見圖1、2。

2.2 盾纖毛蟲的Wilbert之蛋白銀法染色結果蟲體的前半部稍向內側彎曲，頂端裸毛區形成明顯的喙狀突起，呈指狀或尖角狀。體被纖毛，后端有1根較長的尾毛，大核位于身體的中央，近球形，被鑒定為海洋尾絲蟲。蛋白銀法染色結果分別見圖2。

該蟲可在魚體外行兼性寄生，通常是機會性地聚集在河豚魚體因損傷而潰爛的體表部位并大量繁殖，從而對宿主產生進一步的協同加害作用，造成河豚魚類大量死亡，對養殖戶的經濟造成巨大的損失。

3 討論

盾纖毛蟲屬兼性寄生蟲，一般情況下營自由生活，以懸浮的微小顆粒物質（細菌、微藻、原蟲等）為食；但在某些環境下，這些纖毛蟲可以表現為寄生性，吞噬某些軟體動物、甲殼類及魚類的細胞和組織殘渣并在其組織內生長、繁殖。蟲體呈瓜子形，體表被有均勻一致的纖毛，大小大約為20～45μm（根據不同種類略有區別）。由于寄主生活的環境各不相同，因此盾纖毛蟲病的病原在不同的魚上也不盡相同。日本Ototake首次從以部分體表發白為特征而大批死亡的發病牙鲆魚群患病稚魚體表和內臟大量檢出膜口類纖毛蟲，即盾纖類纖毛蟲。目前我國海水魚工廠化養殖中所發現的盾纖類纖毛蟲主要有能夠寄生于養殖大菱鲆的各組織器官的蟹棲異阿腦蟲、可引發牙鲆體表潰爛綜合征的指狀擬舟蟲以及紅鰭東方純冬季室內越冬時的體表潰爛綜合征的水滴偽康纖蟲和貪食邁阿密蟲［4－5］。

通過調查我們發現，丹東河豚魚養殖場所用水源，主要是入圍海水，海水周圍即人類生活區，養殖用水從蓄水池流入魚池，未進行過濾消毒等處理便使用，冬季室內越冬期間養殖水中大量海洋尾絲蟲滋生，從而造成越冬期間河豚魚體表潰爛綜合征。因此在養殖過程中，保持良好的養殖環境尤其是良好水質很重要。

［1］竇海鴿，劉彥，王亞軍.河豚養殖中幾種常見疾病及防治技術［J］.北京水產，2004，5（3）：26－28.

［2］姜長波.中國北方河豚魚養殖現狀與展望［J］.河北漁業，2001（5）：36－48，42.

［3］李福江，王潔，從裕泉，等.大菱鲆盾纖毛蟲病防治措施［J］.齊魯漁業，2005：22（10）：28.

［4］宋京輝，張元良.大菱鲆盾纖毛蟲防治新技術［J］.科學養魚，2005（1）：49－50.

［5］宋微波，朱明壯，陳子桂，等.海水養殖水體中危害性纖毛蟲.原生動物研究I.盾纖目習見類群的口器結構及鑒別特征［J］.青島海洋大學學報，2000，30（2）：207－216.