三子湯的體內抑菌作用試驗

陳紹輝，胥洪冰，趙海沄，馬紅霞

（1.吉林農業大學動物科學技術學院，吉林 長春130118；2.吉林大學中日聯誼醫院，吉林 長春130031）

三子湯處方原于三子散，是常用的蒙藥，由訶子、川楝子、梔子三味中藥組成，最早見于《四部醫典》，現收開載于《中華人民共和國獸藥典》（2010年版），具有清熱、解毒、涼血、祛濕、調和、止血等功效，臨床用于治療清熱解毒等癥，療效確切［1］。處方中3種藥物均具有抗菌、抑制胃腸運動等作用［2］，目前對三子散的報道多局限于臨床應用、化學成分及質量標準方面，關于三子散的抑菌作用文獻罕見報道。我們采用血清藥理學試驗方法，觀察了三子湯對大腸桿菌、志賀氏痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌4種細菌的抑菌作用和給藥后含藥血清的最佳采血時間。報告如下。

1 試驗材料

1.1 試驗動物 大耳白兔，購自長春高新醫學動物實驗研究中心。

1.2 菌種 大腸桿菌、志賀氏痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌，菌種，購自中國獸醫藥品監察所。

1.3 藥品 瓊脂粉、胰蛋白胨、酵母抽提物，均為北京奧博星生物技術有限責任公司生產；氯化鈉，購自長春市科隆生物工程公司；訶子、川楝子、梔子，均購自長春醫藥大廈。

1.4 儀器 多功能真空濃縮機（YZN－50），購自北京東華原醫療設備有限責任公司；吉爾森移液器，購自北京奧博星生物技術有限責任公司。

2 試驗方法

2.1 試驗準備

2.1.1 三子湯劑的制備 處方取自《中華人民共和國獸藥典》（2005年版）：訶子200g，川楝子200g，梔子200g，浸泡9h，多功能真空濃縮機中60℃，620mmHg～680mmHg壓力下，煎煮3h；低溫濃縮到2g／mL，真空包裝，備用。

2.1.2 試驗動物 取大耳白兔18只，隨機分為兩組，分別為試驗組和對照組。分別禁食12h后，稱重，編號。試驗組灌胃給藥1.4g／kg體重，每日2次，連續3d，最后1次給藥后0.5、1、2、4h采血2 mL；對照組同時取血2mL，分別37℃靜止24h，分離血清，備用。

2.1.3 細菌的準備 將細菌分別在肉湯培養基中培養24h，放入4℃冰箱中保存備用。

2.1.4 濾紙片的準備 將普通定性濾紙用打孔器打成直徑6mm的圓形紙片，放入高壓鍋中121℃、20 min滅菌，60℃干燥，備用。

2.2 試驗方法 在超凈工作臺內將滅菌好的培養基趁熱倒入無菌的培養皿，厚約5mm，水平靜止凝固，加入菌液100μL，用L棒均勻涂布，用無菌鑷子分別夾取濾紙片，均勻放置在涂完菌的瓊脂平板上，分別為0.5、1、2、4h的含藥血清紙片及對照血清紙片，37℃培養24h。每組兩個重復。

3 結果

3.1 三子湯含藥血清不同時間對幾種細菌的抑制結果 見表1。

由表1可知，大腸桿菌0.5h劑量組與對照組相比無顯著差異，1h、4h組有顯著差異，2h組有極顯著差異，志賀氏痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌各劑量組與對照組相比，差異極顯著。

以上所得數據均用SPSS12.0統計分析軟件包處理，采用S－N－K法進行多重差異比較。

3.2 三子湯含藥血清抑菌作用擬合曲線 為研究三子湯含藥血清體內抑菌作用隨時間變化規律，采用SPSS12.0軟件進行曲線擬合，對不同菌種找出最佳擬合曲線，擬合方程見表2。

通過擬合曲線可以看出，三子湯含藥血清對大腸桿菌、志賀氏痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌在2 h表現最強的抑菌作用，則在給藥后2h為最佳采血時間。

表1 三子湯含藥血清不同時間抑菌效果（抑菌圈直徑mm）

表2 三子湯含藥血清抑菌作用最佳擬合曲線方程

4 討論

本試驗三子湯采用低溫高壓煎煮法，在60℃620 mmHg～680mmHg壓力下，最大程度的保留中藥原有成分的有效性，避免了高溫對中藥成分的破壞。處方中訶子、川楝子、梔子三味中藥的抑菌作用分別已有文獻報道［4－6］。本試驗結果表明，三子湯對大腸桿菌、志賀氏痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌有抑菌作用，且最佳采血時間為給藥后2h。

最佳擬合曲線圖如圖1。

血清藥理學是近10年興起的一種藥理學研究方法，即用動物的含藥血清進行藥理試驗，不僅可以反應藥物的直接作用，而且可以反應出藥物成分的體內代謝產物和藥物誘生的機體內源性物質的綜合作用。由于中藥成分比較復雜，粗制劑直接用于體外藥理試驗時，由于各種因素的影響，經常造成一些假陰性或假陽性結果，特別中藥的作用是以中醫理論為基礎，強調處方各成分的綜合作用，單純體外試驗往往難以取得預期結果，難以得到認可［3］。血清藥理學最大程度的模擬了藥物在體內的真實作用，試驗結果更為科學可靠。

［1］中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典2005版二部［M］.北京：中國農業出版社，2006：402－403.

［2］白金亮，敖銀梅.蒙藥復方三子湯的研究進展［J］.中國民族民間醫藥雜志，2006，81：209－211.

［3］張良，徐立，袁冬萍，等.中藥血清藥理學方法的研究進展［J］.南京中醫藥大學學報，2007，18（4）：254－265.

［4］殷網虎.3味中藥對前列腺主要致病菌抑制作用的觀察［J］.實用中西醫結合臨床，2003，3（2）：53－54.

［5］李仲興，王秀華，岳云升，等.訶子對335株臨床菌株的體外抑菌活性的研究［J］.中國中醫藥科技，2000，7（6）：393－394.

［6］鄭芙蓉.梔子滴眼液對家兔細菌性角膜炎的影響［J］.中國醫院藥學雜志，2002，22（6）：350－351.