HPLC法測(cè)定川黃醒腦口服液中黃芪甲苷的含量

鄭緋，徐娟

1.解放軍302醫(yī)院藥學(xué)部，100024. 2.北京軍區(qū)總醫(yī)院藥理科，100700

黃芪(Radix astragali)是多年生草本豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranceus(Fisch.) Bge. var. mongholicus(Bge.)Hsiao 或膜夾黃芪Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge.的干燥根。含有多種化學(xué)成分，如皂苷類(lèi)、黃酮類(lèi)、多糖類(lèi)等，黃芪甲苷(ASI)為黃芪中10多種皂苷的主要成分，為黃芪制劑質(zhì)量檢定的指標(biāo)成分，結(jié)構(gòu)為三萜皂苷。其中皂苷類(lèi)是黃芪的主要活性成分，具有降血壓、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛等作用。目前，關(guān)于黃芪皂苷的定量測(cè)定多采用比色法、薄層掃描法、HPLC-UV法、HPLC-示差折光檢測(cè)器法。

川黃醒腦口服液是由黃芪、川芎、當(dāng)歸等五味藥材組成的純中藥復(fù)方制劑，具有益氣活血、化瘀通絡(luò)之功效，主要用于腦梗塞急性期的治療。本文采用高效液相色譜法對(duì)其中的主要成分黃芪中的黃芪甲苷進(jìn)行了定量測(cè)定，實(shí)驗(yàn)表明，測(cè)定方法回收率及精密度都較好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1 儀器、藥品與試劑

1.1 儀器 日本島津液相色譜儀，LC-6A泵，SIL-6A自動(dòng)進(jìn)樣器，SPD-6AV紫外檢測(cè)器及C-R3A數(shù)據(jù)處理裝置。

1.2 藥品 黃芪甲苷對(duì)照品，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所(批號(hào)110781-200512；規(guī)格：20mg，供含量測(cè)定用)；川黃醒腦口服液:沈陽(yáng)市康元制藥廠生產(chǎn)；

1.3 試劑 甲醇和乙腈均為色譜純，水為雙蒸水；其他試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：YWG-C18柱(4.6mm×250mm)，流動(dòng)相:乙腈:水(1:2)，磷酸調(diào)PH值=3；流速：0.8mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：205nm；靈敏度：0.1AUFS。在該色譜條件下，黃芪甲苷的保留時(shí)間約為18分鐘。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解并定容至每1mL含0.5mg的溶液作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密量取樣品20mL，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次25mL，合并正丁醇提取液，用水洗滌2次，每次15mL，棄去水液，正丁醇溶液用無(wú)水硫酸鈉脫水，濾過(guò)，濾液置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2mL的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.4 陰性對(duì)照樣品溶液的制備 取不含黃芪藥材的處方其他藥材，按相同工藝制得陰性對(duì)照樣品，再按上述供試品溶液制備方法，制得陰性對(duì)照樣品溶液。

2.5 線性關(guān)系考察 分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液5、10、15、20、25μL，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，黃芪甲苷進(jìn)樣量的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明，黃芪甲苷在2.5～12.5μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，其線性回歸方程為Y=1.0097X+5.9010，r=0.9998。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn) 分別精密吸取黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)溶液15μl，按色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD為1.78%(n=5)，精密度良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已測(cè)黃芪甲苷含量的川黃醒腦口服液樣品20mL，5份(已知含量為34.0μg/mL)。分別精密加入黃芪甲苷對(duì)照品，按樣品測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液制備方法操作，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算平均回收率為95.32%，RSD=1.69%，結(jié)果見(jiàn)表1：

2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 樣品溶液在室溫放置，每隔0.5h測(cè)定一次，共測(cè)定4次，測(cè)定峰面積，計(jì)算黃芪甲苷的含量(μg/mL)，分別是0.0341、0.0349、0.0345、0.0342，RSD為1.04%，證明樣品溶液中黃芪甲苷含量至少在2h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 分別平行取同一批號(hào)樣品6份，依法處理后，進(jìn)樣10μL測(cè)定，計(jì)算黃芪甲苷的含量，平均值為34μg/mL，RSD=1.98%。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 1 The results of the recovery test

3 討論

3.1 黃芪甲苷的測(cè)定 黃芪中有十幾種皂苷，以黃芪甲苷含量最高，為主要有效成分，我們參照中國(guó)藥典(95版)的提取方法，有效的去除了其他皂苷的干擾。

3.2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 黃芪甲苷在紫外區(qū)僅在200nm左右有末端吸收，因此在200～210nm范圍內(nèi)選擇測(cè)定波長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)表明，波長(zhǎng)越長(zhǎng)，噪音越小，但靈敏度也隨之降低，綜合這兩個(gè)因素，我們選205nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

3.3 流動(dòng)相的選擇 本文考察了乙腈:水(1:2.0，1:2.2，1:2.4，1:3.0)等不同流動(dòng)相，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇乙腈:水(1:2)，磷酸調(diào)PH=3為最佳流動(dòng)相，且PH值越小，峰型越好，保留時(shí)間越短，考慮到柱子的壽命，所以我們選PH=3。

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