雷公藤不同提取部位對小鼠肝腎的損傷作用*

王 蓓 陳 晨 余 黎 蔣寶平 許 立 方泰惠△

（1.南京中醫藥大學，江蘇 南京 210029；2.江蘇省中藥藥效與安全性評價重點實驗室，江蘇南京 210029）

雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook.f.）為衛矛科植物雷公藤根的木質部，其味苦、辛，性涼，大毒，歸肝、腎經，具有祛風除濕、通絡止痛、殺蟲解毒之功效［1］。現代臨床研究表明雷公藤及其制劑具有抗炎、免疫抑制、抗生育等活性，對于與自身免疫相關的多種疑難病癥療效顯著。但大量研究表明，雷公藤毒副作用大，且其主要毒性成分也是主要有效成分［2］。雷公藤的急性毒性以急性肝壞死為主［3］，而亞慢性中毒的主要原因之一為腎損害［4］。但迄今為止，雷公藤毒性作用的物質基礎尚不明確。故本研究通過對小鼠進行灌胃給藥，觀察雷公藤不同部位對小鼠肝腎損傷相關指標的影響，以期對雷公藤毒性物質基礎研究奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 雷公藤飲片（安徽豐原銅陵中藥飲片有限公司，批號：11080），經鑒定為雷公藤根的木質部。谷丙轉氨酶（ALT）測定試劑盒 （南京建成生物工程研究）、谷草轉氨酶（AST）測定試劑盒（南京建成生物工程研究）、尿素氮（BUN）測定試劑盒（南京建成生物工程研究）、血肌酐（Scr）測定試劑盒（南京建成生物工程研究）。

1.2 動物 ICR小鼠，清潔級，雌雄各半，體質量 18～22 g，共360只。適齡，健康，購于上海斯萊克實驗動物有限公司，許可證號 scxk（滬）2007-0005。

1.3 儀器 LDZ5-2型臺式離心機（北京醫用離心機廠）；酶聯免疫檢測儀酶標儀（SPECTRAMAX190，美國MD公司）；DKB-8A型電熱恒溫水槽（上海精宏實驗設備有限公司）。

1.4 藥物制備

1.4.1 提取 （1）醇提：將雷公藤飲片用95%乙醇提取2次，乙醇量為藥材量的8倍，提取時間分別為2、1.5 h，180℃沸騰，130℃保持微沸，分別為2、1.5 h。提取完后，將藥渣倒出，晾干。兩次提取物合并。（2）水提：藥渣用蒸餾水提，量為藥渣的8倍，提取2次，時間分別為2、1.5 h。200℃沸騰，160℃保持微沸，分別為2、1.5 h。兩次提取物合并。

1.4.2 減壓濃縮 （1）醇提物：減壓濃縮95%乙醇提取物，溫度為50℃，轉速為34 r/min，壓力為-0.095 MPa，濃縮至2 L。取出500 mL留樣，于水浴鍋中蒸發至干，溫度為82.5℃，再放入烘箱中烘干成干燥物（烘箱的溫度為42.5℃），得到醇提物部位。剩余的1.5 L用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。（2）水提物：減壓濃縮水提物，溫度為70℃，轉速為40 r/min，壓力為-0.095 MPa，濃縮至2 L。取出500 mL留樣。從500 mL中取出50 mL不干燥，其余450 mL于水浴鍋中蒸發至干，溫度為80℃，再放入烘箱中烘干成干燥物（烘箱的溫度為42.5℃），得到水提物部位。剩余的1.5 L醇沉，用95%乙醇至80%乙醇。放置6 d后，倒出上清液，減壓濃縮，溫度為50℃，轉速為60 r/min，壓力為-0.095 MPa，倒入蒸發皿中蒸發至干，再放于烘箱中烘干。其上清液部分為水提醇沉上清液部位，沉淀物部分為水提醇沉沉淀物部位。

1.4.3 化學萃取 （1）石油醚萃取：1.5 L的石油醚倒入1.5 L的醇提取物中，混勻，靜止2 h，打開活塞，放掉下層，從上口倒出石油醚部位，重復5次，石油醚部位萃取完。減壓濃縮石油醚部位，溫度為40℃，轉速為50 r/min，壓力為-0.095 MPa。倒入蒸發皿中蒸發至干，再放于烘箱中烘干，得到石油醚部位。（2）乙酸乙酯萃取：每次倒入1.5 L的乙酸乙酯，混勻，靜止2 h，打開活塞，放掉下層，從上口倒出石油醚部位，重復7次，乙酸乙酯部位萃取完。旋轉蒸發乙酸乙酯部位，溫度為50℃，轉速為50 r/min，壓力為-0.09 MPa。倒入蒸發皿中蒸發至干，再放于烘箱中烘干，得到乙酸乙酯部位。（3）正丁醇萃取：根據提取物的量加入正丁醇，混勻，靜止2 h，打開活塞，放掉下層，從上口倒出正丁醇部位，重復6次，正丁醇部位萃取完。旋轉蒸發正丁醇部位，溫度為55℃，轉速為60 r/min，壓力為-0.095 MPa。倒入蒸發皿中蒸發至干，再放于烘箱中烘干，得到正丁醇部位。

1.5 肝腎損傷實驗 （1）分組及給藥：小鼠隨機分成15組，分別為：空白對照組；水提物高、低劑量組；醇提物高、低劑量組；水提醇沉上清液高、低劑量組；水提醇沉沉淀物高、低劑量組；石油醚提取物高、低劑量組；乙酸乙酯高、低劑量組和正丁醇高、低劑量組。每組實驗動物分兩批，每批12只，雌雄各半，一批給藥5 d，一批給藥10 d。低劑量為臨床等效量（3.25 g/kg），高劑量為臨床等效量的5倍量 （16.25 g/kg），空白對照組給予等體積生理鹽水，每日灌胃給藥1次。（2）標本采集與檢測：上述小鼠實驗前穩定3 d，觀察小鼠的攝食、糞便、活動等一般狀況。分別于實驗分組第5日和第10日給藥12 h后（禁食不禁水12 h），對兩批動物眼眶取血致死，于3000 r/min離心10 min，取血清，測定ALT、AST以及BUN、Scr水平。

1.6 統計學處理 應用SPSS16.0統計軟件。計量資料以（）表示。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 雷公藤不同提取部位給藥對小鼠肝功能指標的影響 見表1。結果顯示，給藥5 d后，與空白對照組比較，正丁醇組和醇提物組的ALT和AST值均升高，并且有顯著差異 （P＜0.05或0.01）。給藥10 d后，除正丁醇組和醇提物組外，乙酸乙酯組、水提醇沉上清液高劑量組ALT和AST值均升高，且和空白對照組比較有顯著差異（P＜0.05或0.01）。

表1 各組肝功能指標比較（U/g，，n=12）

表1 各組肝功能指標比較（U/g，，n=12）

與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。下同。

組別給藥5 d 給藥10 d ALT AST ALT AST空白對照組 33.19±5.75 19.77±2.41 39.16±5.94 30.08±6.63醇提物低劑量組 36.33±6.56 27.97±4.35* 47.18±7.50*44.44±8.74*醇提物高劑量組 43.26±2.88* 30.16±1.92** 52.20±9.56**50.41±6.75**乙酸乙酯低劑量組 33.29±4.13 20.91±3.57 46.79±5.16 49.24±5.41*乙酸乙酯高劑量組 33.86±5.38 25.91±1.75* 56.12±8.52**63.33±9.53**正丁醇低劑量組 38.21±7.44 25.91±1.75* 47.49±6.77*49.27±6.29*正丁醇高劑量組 50.71±5.73**27.00±7.98** 55.83±5.46**56.78±5.51**石油醚低劑量組 35.32±2.28 16.03±2.23 42.44±3.97 35.61±4.66石油醚高劑量組 37.34±4.98 17.03±3.75 45.59±7.27 43.87±6.92*水提物低劑量組 31.73±4.58 17.18±2.80 41.62±8.65 32.13±3.24水提物高劑量組 33.03±4.56 21.03±4.68 43.21±8.52 45.39±7.33*水提醇沉上清液低劑量組 36.76±4.24 20.72±1.75 46.61±8.19 31.72±4.76水提醇沉上清液高劑量組 40.54±2.22 22.65±3.42 48.01±7.28*50.41±6.75**水提醇沉沉淀物低劑量組 38.99±9.37 19.94±2.49 42.52±4.42 32.20±5.48水提醇沉沉淀物低劑量組 40.54±5.42*20.54±0.70 49.65±5.78*34.72±3.88

2.2 雷公藤不同提取部位給藥對小鼠腎功能指標的影響 見表2。給藥5 d后，醇提物組、乙酸乙酯高劑量組和正丁醇高劑量組的BUN值升高，和空白對照組比較有顯著差異 （P＜0.05或0.01）。但是給藥5 d對小鼠的Scr影響不大，給藥10 d后，正丁醇高劑量組、乙酸乙酰高劑量組、石油醚高劑量組以及醇提物組的BUN升高，且和空白對照組比較有顯著差異。醇提物組Scr值升高，和空白對照組比較差異顯著（P＜0.05）。

表2 各組腎功能指標比較（，n=12）

表2 各組腎功能指標比較（，n=12）

給藥5 d 給藥10 d BUN（mmol/L） Scr（μmol/L） BUN（mmol/L） Scr（μmol/L）空白對照組 7.52±1.29 82.09±5.15 8.11±1.01 76.50±15.62醇提物低劑量組 10.13±2.69* 82.15±10.85 11.34±1.65* 95.83±10.74*醇提物高劑量組 15.14±3.60**92.55±15.40 11.91±1.04** 97.89±12.68*乙酸乙酯低劑量組 7.35±2.17 85.67±12.27 8.14±0.388 77.55±12.75乙酸乙酯高劑量組 9.79±2.10* 86.8±13.48 9.36±0.878* 78.14±10.55正丁醇低劑量組 8.66±2.13 82.18±18.63 9.11±1.70 71.49±7.14正丁醇高劑量組 9.07±1.06* 90.24±10.57 10.22±1.40* 86.40±10.20石油醚低劑量組 8.17±2.56 77.21±11.00 9.39±1.02 60.02±11.91石油醚高劑量組 7.70±1.95 79.58±12.67 9.76±2.06* 66.59±10.44水提物低劑量組 7.79±1.34 88.73±12.10 8.73±0.52 61.96±6.89水提物高劑量組 8.35±0.83 93.52±14.06 8.86±0.82 68.97±9.08水提醇沉上清液低劑量組 7.28±0.71 81.79±10.42 8.19±1.45 80.07±19.97水提醇沉上清液高劑量組 8.16±1.34 89.09±12.78 8.96±1.20 85.98±9.19水提醇沉沉淀物低劑量組 8.27±2.03 84.94±7.79 9.17±1.07 80.80±7.42水提醇沉沉淀物低劑量組 8.65±1.68 89.56±16.28 9.28±1.55 88.96±13.72組別

3 討 論

各種臨床和實驗研究結果表明，雷公藤的毒性與其所含化學成分關系密切，這類植物的已知化學成分至少有200多種［5］。其中各類成分的毒性大小看法不一，有人認為毒性大小依次為二萜類、生物堿、三萜類及苷類［6］；也有研究認為雷公藤中所含的二萜成分毒性最大，第二位是三萜成分，而生物堿類成分毒性較小［7］；還有認為總苷毒性最大，總萜次之，總堿最小的［8］。總的來看，由于成分復雜，雷公藤毒性物質基礎仍不十分清楚。本研究表明，用雷公藤不同部位對小鼠進行短期給藥后，其醇提物部位，乙酸乙酯部位和正丁醇部位會導致小鼠肝功能指標ALT和AST均顯著升高，這說明雷公藤的肝毒性較強，且毒性成分集中在醇提物部位，其中以乙酸乙酯部位和正丁醇部位為多。而給藥5 d后，其正丁醇和醇提物部位會使小鼠腎功能指標BUN上升，但是對Scr無明顯影響。給藥10 d后，醇提物組的Scr才出現上升。這說明，雷公藤不同部位短期給藥產生的腎臟毒性不明顯，雷公藤腎毒性的產生可能和長期大量用藥有關。

［1］李晶，劉霞.雷公藤的毒副反應及減毒方法研究進展［J］.河南中醫學院學報，2008，4（23）：102-104.

［2］趙潤栓，張敏.雷公藤毒副作用及其防治研究進展［J］.國醫論壇，2006，21（3）：52-54.

［3］丁虹，吳建元，童靜，等.雷公藤甲素急性毒性及其機制研究［J］.中藥材，2004，（27）：115-118.

［4］劉良，王戰勇，黃光照，等.雷公藤甲素亞慢性中毒對昆明種小鼠腎臟及睪丸的影響［J］.同濟醫科大學學報，2001，30（3）：214-217.

［5］Brinker AM，Ma J，Lipsky PE，et al.Medicinal chemistry and pharmacology of genus tripterygium（Celastraceae）［J］.Phytochemistry，2007，68，732-766.

［6］孫新，張素敏，田春華，等.雷公藤及其安全性［J］.中國新藥雜志，2001，10（7）：539-543.

［7］王愛民，羅功名.雷公藤的毒性研究［J］.湖北中醫雜志，2008，30（6）：60-61.

［8］呂鵬.雷公藤中毒原因探討 ［J］.天津藥學，2001，13（6）：49-50.