同型半胱氨酸在進(jìn)展性腦卒中的變化

李永鴻，巫碧佳

（廣東省佛山市第二人民醫(yī)院，廣東 佛山 528000）

在腦卒中的組成中，進(jìn)展性腦卒中占首位，占發(fā)病率的60%以上，也是導(dǎo)致患者致殘與死亡的首要原因［1］。但是影響進(jìn)展性腦卒中發(fā)病及其預(yù)后的因素還不明確，尚有很多未知因素［2］。同型半胱氨酸（Hcy）是一種含硫氨基酸，其與動脈粥樣硬化性心臟病等腦血管疾病的發(fā)生關(guān)系密切，一些學(xué)者認(rèn)為Hcy是進(jìn)展性腦卒中發(fā)生的一個重要的獨立危險因素［3］。但也有人提出單純的Hcy尚不足以造成血管損害，需與其它的危險因素同時存在時才能造成進(jìn)展性腦卒中［4］。為了深入研究同型半胱氨酸在進(jìn)展性腦卒中的變化，筆者采用動物模型分析探討同型半胱氨酸在進(jìn)展性腦卒中的變化，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗對象

選擇購自中國科學(xué)院動物研究所的健康6周齡Wistar雄性小鼠30只，每只體質(zhì)量90～110g，平均（102.2±6.2）g。以隨機設(shè)計法分為觀察組和正常對照組各15只，兩組體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 模型建立

兩組以普通鼠飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，分2組籠養(yǎng)。在飼料分類中，首先將飼料原料平分為兩部分，一部分按照常規(guī)方法直接加工成普通顆粒飼料，另一部分根據(jù)飼料的含量按照2%的比例添加蛋氨酸，然后再加工成顆粒狀。觀察組給予高蛋氨酸飼料飼養(yǎng)，從而建立進(jìn)展性腦卒中模型；正常對照組給予普通顆粒飼料喂養(yǎng)。兩組小鼠都自由飲水與日常生活，于觀察第0、4周末斷食6h后內(nèi)采集靜脈血1～2mL，EDTA抗凝后4℃放置30min，3000次／min離心10min，分離出血漿，置－20℃保存。

1.3 血漿Hcy含量測定

血漿Hcy含量測定采用高效液相熒光檢測法測定，以美國SIGMA公司提供的Hcy標(biāo)準(zhǔn)品作對照。取兩組小鼠血漿樣品或標(biāo)準(zhǔn)品100μl，加入丁基膦10μl，混勻后4℃放置30min。加入10%氯醋酸100μl混勻后13 000rpm／min離心10min。取上清液50μl于試管內(nèi)，依次加入硼酸緩沖溶液125 μl、1.55mmol／L NaOH 10μl，混勻后置于60℃水浴60min。對Hcy標(biāo)準(zhǔn)品和兩組小鼠血漿樣品分別進(jìn)行高效液相熒光檢測法檢測。

1.4 病理學(xué)檢測

第8周末兩組小鼠都以2%戊巴比妥鈉按麻醉后自股動脈放血處死，取新鮮大腦動脈放入2.5%戊二醛多聚甲醛固定液，再經(jīng)固定、脫水、包埋后切片，用檸檬酸鉛雙重染色，透射電鏡觀察并拍照。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件包處理，結(jié)果中的血漿Hcy水平變化數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組樣本間均數(shù)比較應(yīng)用t檢驗，組間的多重比較采用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血漿Hcy水平變化

第8周末，所有小鼠均成活。同時隨著喂養(yǎng)時間的延長，觀察組血漿Hcy水平逐漸升高；在第4周末，觀察組小鼠血漿Hcy平均濃度達(dá)到了（22.6±3.1）μmol／L，表明 Hcy小鼠進(jìn)展性腦卒中模型建成。同時第4周及第8周末觀察組血漿Hcy水平均顯著高于同時期的對照組（P＜0.01），見表1。

表1 3個時間點的兩組血漿Hcy水平對比（±s，μmol／L）

表1 3個時間點的兩組血漿Hcy水平對比（±s，μmol／L）

組別 數(shù)量（n） 第0周 第4周 第8周觀察組15 13.2±2.1 22.6±3.1 28.9±6.8對照組 15 14.9±3.2 14.6±1.9 13.5±2.6 t 1.239 6.852 9.625 P＞0.05 ＜0.01 ＜0.01

2.2 動脈損害情況

染色后，觀察組大鼠多數(shù)出現(xiàn)大腦動脈管腔狹窄、變形等狀態(tài)，內(nèi)皮細(xì)胞呈暗細(xì)胞變，異染色質(zhì)凝縮、比例增多，核固縮。部分內(nèi)皮細(xì)胞水腫，嚴(yán)重者出現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞變性、崩解，可見胞漿內(nèi)大髓磷體，少數(shù)內(nèi)皮細(xì)胞脫落。

3 討論

腦卒中是嚴(yán)重危害人類健康的常見疾病，具有高發(fā)病率、高病死率及高致殘率的特點。我國腦卒中年發(fā)病率為150／10萬左右，病死率為100／10萬左右［5］。隨著人們生活水平、飲食結(jié)構(gòu)、環(huán)境因素的改變，腦血管疾病的發(fā)病率逐年增多并趨于年輕化。因腦動脈硬化導(dǎo)致血管狹窄，進(jìn)而發(fā)生進(jìn)展性腦卒中是中國人常見的病因，其中尤以大腦中動脈受累最多見。近年來的研究表明，同型半胱氨酸與腦血管病和一些神經(jīng)疾病發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，血漿Hcy升高被認(rèn)為是引發(fā)普通人群腦血管疾病的一個重要危險因素［6］。Hcy是體內(nèi)蛋氨酸循環(huán)的正常代謝產(chǎn)物，其中約70%與血漿蛋白結(jié)合，29%自身結(jié)合成同型胱氨酸二聚體，約1%以游離硫醇的形式存在于血液循環(huán)中。許多回顧性與前瞻性研究表明，血漿Hcy濃度的輕中度升高是血管疾病的一個重要危險因素，大約有30%的心腦血管病患者存在高Hcy血癥［7］。

有研究顯示，Hcy可使內(nèi)膜下膠原暴露，導(dǎo)致粥樣斑塊和血栓的形成，促進(jìn)血小板和白細(xì)胞的粘附和脂質(zhì)的沉著，也可以喪失內(nèi)皮細(xì)胞衍生的血管松弛因子NO對血管的舒張作用［8］。同時影響內(nèi)皮細(xì)胞釋放ET、NO，進(jìn)而造成內(nèi)皮細(xì)胞損傷［9］。筆者研究發(fā)現(xiàn)觀察組多數(shù)出現(xiàn)管腔狹窄、扭曲，少數(shù)稍呈擴(kuò)張。核嚴(yán)重溶解，核仁凝聚變小，部分核膜溶解，細(xì)胞胞漿呈部分溶解性壞死，可見核糖體溶解，細(xì)胞內(nèi)可見大的髓磷體，有的星形膠質(zhì)細(xì)胞表現(xiàn)為暗細(xì)胞變，上述結(jié)果支持既往對Hcy與神經(jīng)變性性疾病關(guān)系的研究。同時本實驗結(jié)果表明，短期給實驗動物喂以高蛋氨酸飼料可引起Hcy，在第4周末，觀察組小鼠血漿Hcy平均濃度達(dá)到了（22.6±3.1）μmol／L，表明 Hcy小鼠進(jìn)展性腦卒中模型建成。同時第4周及第8周末觀察組血漿Hcy水平均顯著高于同時期的對照組（P＜0.01）。

總之，同型半胱氨酸是造成小鼠腦血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)損傷和功能異常的重要原因，可能是進(jìn)展性腦卒中的一個新的致病危險因素。

［1］陳光慧，高煒，李勇，等.一種新的細(xì)胞凋亡相關(guān)基因－高同型半胱氨酸誘導(dǎo)基因HCY－2的初步探討［J］.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報，2000，22（4）：383－387.

［2］陳景開，周遼軍，陳滿清，等.高同型半胱氨酸血癥對血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的研究［J］.中國微循環(huán)，2001，5（2）：103－104.

［3］王玉芳，王樹人，陳海艷，等.同型半胱氨酸對培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞損傷的研究［J］.中國病理生理雜志，2001，17（3）：268－270.

［4］劉建國，高海鳳，張哲成，等.高同型半胱氨酸血癥與復(fù)發(fā)性腦梗死［J］.天津醫(yī)藥，2003，31（7）：411－413.

［5］張哲成，劉建國，高海鳳，等.蛋氨酸負(fù)荷試驗在青年腦卒中的應(yīng)用價值［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，2003，83（17）：1537－1538.

［6］陳景開，趙秋良，周遼軍.同型半胱氨酸對大鼠血管內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)的影響［J］.中國病理生理雜志，2001，17（7）：699－701.

［7］馬雪興，劉王明，吾柏銘，等.蛋氨酸對兔同型半胱氨酸水平及動脈粥樣硬化的影響［J］.中國心血管雜志，2002，7（4）：231－234.

［8］Ventura P，Panini R，Verlato C，et al.Peroxidation indices and total antioxidant capacity in plasma during hyperhomocysteinemia induced by methionine oral loading［J］.Metabolism，2000，49（2）：225－228.

［9］Rounds S，Yee WL，Dawicki DD，et al.Mechanism of extracellular ATP and adenosine－induced apoptosis of cultured pulmonary artery endothelial cells［J］.Am J Physiol，1998，275（2Pt 1）：L379－388.