Caspase－3、ADAM10在肺癌中表達與生物學意義

景瑞軍，李勇強

（西安醫學院第二附屬醫院，陜西 西安 710038）

20世紀50年代開始，吸煙等種種因素導致了我國肺癌發病率和病死率的升高，肺癌的防治成為一項重大問題［1］，但目前腫瘤的生物學行為無明確指標。既往研究顯示，細胞外信號通路、線粒體信號通路、內質網信號通路和高爾基體信號通路的共同終末都是 Caspase 酶［2］。整合素－金屬蛋白酶（ADAMs）是近年來發現的一類與細胞膜結合的糖蛋白家族，能參與細胞信號傳導等過程，也可能參與了人類腫瘤細胞轉移的病理過程［3，4］。我們為此采用免疫組化方法研究Caspase－3、ADAM10表達與肺癌臨床病理參數的相關性，為判斷肺癌的特點與預后提供依據，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院病理科2004年2月－2011年7月間手術切除的肺癌石蠟包埋標本80例，男60例，女20例。入選標準：患者術前均未行任何治療，符合世界衛生組織（WHO）中肺癌的診斷標準，同意入選。肺癌類型：腺癌35例，鱗癌35例，小細胞癌10例；年齡33～78歲，平均（60.2±9.2）歲；按組織學分級：高分化20例，中分化35例，低分化25例；淋巴結轉移50例，無淋巴結轉移30例。同期取正常肺組織20例，包括13例尸檢的正常肺組織，5例手術切除炎性假瘤病例的正常肺組織和2例肺大泡的正常肺組織。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑

本文使用的兔抗人多克隆抗體ADAM10和Caspase－3購自USBio公司，EDTA抗原修復液購自福州邁新公司，DAB顯色劑購自DAKO公司，觀察所用顯微鏡為同本Olympus產品，型號為BX－50。丙酮和無水乙醇為天津市化學試劑公司產品。

1.2.2 染色方法

所有標本均經10%福爾馬林固定，石蠟包埋，切片常規脫蠟至水；3%過氧化氫微波爐低檔孵育2 min，蒸餾水浸泡；將切片放入盛有EDTA抗原修復液的高壓鍋中，噴氣后1～2min，高壓鍋離開熱源，冷卻至室溫，取出切片；蒸餾水浸泡，PBS液（pH 7.4）浸泡；滴加1∶75的一抗4℃冰箱過夜，PBS液浸；滴加生物素標記的二抗工作液，室溫下濕盒中孵育10min，PBS液浸泡；DAB顯色劑顯色，顯微鏡下觀察，適時終止反應。

1.3 判定標準

著色細胞比例1／3以下為1分，1／3～2／3為2分，2／3以上為3分。著色程度，無著色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分。然后根據兩者積分的乘積來判斷陽性等級：0分為（－），1～2分為（＋），3～4分為（＋＋），4分以上為（＋＋＋）；其中，（＋）為弱陽性，（＋＋～＋＋＋）為強陽性。

1.4 統計學方法

采用SPSS 18.0統計軟件包進行數據分析。ADAM10和Caspase－3在各組中表達陽性率的比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ADAM10和 Caspase－3的表達情況

ADAM10和Caspase－3陽性表達呈棕黃色與顆粒狀，主要定位于細胞漿中。ADAM10和Caspase－3在正常肺組織和肺癌組織的表達陽性率分別為100%、50%，見表1。

表1 Caspase－3在肺癌進展組織芯片中的表達（n）

2.2 ADAM10和Caspase－3的表達與肺癌臨床病理參數的關系

調查顯示，ADAM10和Caspase－3在腺癌中的表達水平較鱗癌和小細胞癌低，同時在轉移的肺癌表達水平也比較低。

3 討論

近年來，從我國城鄉前10位惡性腫瘤構成來看，肺癌已代替肝癌成為我國首位惡性腫瘤死亡原因，占全部惡性腫瘤死亡的22.7%，且發病率和病死率仍在繼續迅速上升。根據衛生部全國腫瘤防治辦公室提供的資料顯示，2005年～2011年間，中國肺癌的發病數估計增加28萬人，目前我國肺癌發病率每年增長26.9%，如不及時采取有效控制措施，預計到2025年，我國肺癌患者將達到100萬，成為世界第1肺癌大國［5－7］。大量的流行病學研究證明了吸煙與肺癌發生的密切關系，吸煙使肺癌的發病率和病死率持續上升。在因肺癌死亡的患者中，90%是由吸煙，包括被動吸煙引起的。同時肺癌的發生與個體基因易感性也有關。

表2 ADAM10和Caspase－3的表達與肺癌臨床病理參數的關系（n）

Caspase酶是1個氨基酸序列和空間結構非常相似的蛋白質家族，它有3個結構域，是控制細胞凋亡的關鍵組件，平常它們以酶原的形式存在于細胞內，當細胞接到凋亡信號后，Caspase家族成員依次被激活，以多種方式“拆解”細胞，其中1種方式是激活CAD，使CAD進入細胞核內，像剪刀一樣剪斷腫瘤細胞的DNA，導致細胞凋亡，因此Caspase酶也被形象地稱為腫瘤細胞的“剪刀酶”［8，9］。有研究發現，Caspase－3在良性前列腺增生表達明顯高于前列腺癌細胞［10］。還有研究應用免疫組織化學發現，Caspase－3在肺癌的表達與有無淋巴結轉移、病理分期、分化程度有關［11，12］。

ADAM10是一種功能性的分泌酶，ADAM10最初從牛腦髓鞘膜中分離純化而來，并被稱為哺乳動物整合素金屬蛋白酶。體外實驗發現ADAM10是細胞質髓鞘堿性蛋白酶，由于ADAM10廣泛參與細胞功能，許多疾病，如癌癥或AD都將其列為有潛力的靶點。ADAM10可以切割腫瘤相關底物，并與前列腺癌或乳腺癌的進程相關，它還與人結腸癌細胞遷移有關。因此，抑制ADAM10在一定條件下對于腫瘤治療可能是有幫助的。相反，在腦內ADAM10過表達或激活對于治療神經退行性疾病，也許是有利的。本文結果顯示，ADAM10和Caspase－3陽性表達呈棕黃色與顆粒狀，主要定位于細胞漿中。ADAM10和Caspase－3在正常肺組織和肺癌組織的表達陽性率分別為100%和50.0%。經過調查，ADAM10和Caspase－3在腺癌中的表達水平較鱗癌和小細胞癌低，同時在轉移的肺癌表達水平也比較低。

總之，Caspase－3、ADAM10在肺癌中表達都受到抑制，陽性率降低，可能與患者腫瘤的病理特點與轉移情況有關，可作為預測肺癌發生發展的指標之一。

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