低分子肝素對腫瘤化療免疫功能的影響分析

程海花，許利華

（1.三原縣人民醫(yī)院，陜西 三原 713800；2.南通市第一人民醫(yī)院，江蘇 南通 226001）

一般情況下，化療患者常常處于機體免疫功能的較低狀況［1］。與正常人群相比，惡性腫瘤患者中免疫功能受損的發(fā)生率是正常人群的4倍［2］。低分子肝素（LMWH）是近10年發(fā)展起來的新一代肝素類抗凝藥物［3］。本研究通過分別檢測胃癌患者單純化療組和化療＋低分子肝素組化療前24h、化療后1h、24h免疫指標的變化，以探討低分子肝素對腫瘤化療免疫功能的影響，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2008年2月～2011年4月在我院住院的胃癌患者80例，男49例，女31例，年齡18～64歲，平均（52.2±3.24）歲，包括腺癌40例、鱗癌30例、腺鱗癌10例。①所有病例均為病理組織學確診且一線治療無效或復發(fā)的胃癌患者；②年齡17～65歲；③卡氏評分＞60分；④能承受化療；⑤患者同意并簽署治療知情同意書；⑥本治療得到醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。隨機分為治療組與對照組各40例，兩組患者年齡、性別、癌癥病理類型比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 治療方法

兩組都采用常規(guī)化療方法，給予多西紫杉醇75 mg／（m2·dl）或多西紫杉醇75m／（m2·dl）＋順鉑80mg／（m2·dl）的化療方案靜脈給藥。在此基礎(chǔ)上治療組加用低分子肝素（國藥準字H20010299，海南通用同盟藥業(yè)有限公司）5 000IU皮下注射Q12h。兩組均治療4周。

1.3 標本采集

兩組分別于治療前、化療后1h、24h采集靜脈血2mL，用3.2%枸櫞酸鈉抗凝，隨即以3 000r／min離心10min分離血漿，最遲須在6h內(nèi)分離血漿，血漿分存后儲存于－20℃至檢測時。

1.4 觀察指標

①T細胞亞群檢測：取抗凝全血100μl，加入10 μl CD3－PC5／CD25－PE，混 勻，室溫避光反應20 min，每管加入預冷的溶血劑1mL，混勻，室溫避光反應10min，取出后1 500r／min離心5min棄上清，1.5mL PBS洗2次（1 200r／min，5min），棄上清，加入500μl PBS緩沖液重懸細胞。FCM測定，CellQuest軟件中獲取數(shù)據(jù)和分析，分析細胞所占比例，收集測定細胞10 000個。②NK細胞檢測：取抗凝全血100μl，加入10μlPE，混勻，室溫避光反應20min，每管加入預冷的溶血劑1.5mL，混勻，室溫避光反應10min，取出后1 500r／min離心5min棄上清，1.5mL PBS洗2次（1 200r／min，5min），棄上清，加入500μl PBS緩沖液重懸細胞。CellQuest軟件中獲取數(shù)據(jù)和分析，分析細胞所占比例，收集測定細胞10 000個。

1.5 療效判定

兩組患者均于治療后復查胸片或CT，評價近期療效（參照 WHO腫瘤病灶分類及療效評價標準）［4］。

1.6 統(tǒng)計學方法

所有組間、組內(nèi)數(shù)據(jù)均采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，免疫指標數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標準差（±s）表示，各組均數(shù)的比較采用單因素方差分析（ANOVA），有差異顯著者用Tamhane檢驗作兩兩比較（方差不齊）；臨床療效等資料對比采用χ2檢驗，P＜0.05為具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 近期療效評價

兩組均無CR病例，治療組的RR為30.0%，對照組為10.0%，治療組的近期療效明顯高于對照組（P＜0.05），見表1。

表1 兩組患者近期療效（例）

2.2 T淋巴細胞亞群的變化

兩組患者CD＋3、CD＋4、CD＋4／CD＋8值于化療后1 h與24h顯著降低，與治療前比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；治療組在化療后兩個時間點的上述指標值下降均較對照組多（P＜0.05），見表2。

表2 兩組患者化療前后T淋巴細胞亞群的變化（±s，%）

表2 兩組患者化療前后T淋巴細胞亞群的變化（±s，%）

注：與化療前比較，①P＜0.05；組間比較，②P＜0.05

組別 指標 n 治療前 化療后1h 化療后24h治療組 CD＋340 58.52±6.22 48.12±6.22①② 44.26±4.32①②CD＋4 40 31.65±3.68 24.83±3.92①② 22.48±2.64①②CD＋4／CD＋8 40 1.31±0.28 1.22±0.32①②1.12±0.23①②對照組 CD＋340 57.12±5.35 52.34±6.36①47.88±6.12①CD＋4 40 31.32±3.2 27.92±3.64①26.05±3.26①CD＋4／CD＋8 40 1.34±0.12 1.33±0.25①1.21±0.12①

2.3 NK細胞的變化

兩組患者NK細胞的數(shù)量于化療后1h與24h顯著降低，與治療前比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；治療組在化療后1h與24h后兩個時間點的NK細胞的數(shù)量下降均較對照組明顯（P＜0.05），見表3。

表3 兩組患者化療前后NK細胞的變化（±s，%）

表3 兩組患者化療前后NK細胞的變化（±s，%）

注：與化療前比較，①P＜0.05；組間比較，②P＜0.05

組別 n 治療前 化療后1h 化療后24h治療組 40 12.33±2.12 10.13±1.23①② 9.22±1.22①②對照組 40 12.34±1.51 10.84±1.44① 10.32±1.45①

3 討論

腫瘤的發(fā)生部分是由于機體全身或局部免疫功能失常而引起的，腫瘤的生長與發(fā)展也在很大程度上決定于機體的免疫系統(tǒng)狀態(tài)［5］。增強機體的免疫功能對提高腫瘤治療的預后起著重要作用，惡性腫瘤患者的免疫功能低下，而化療藥物可損害患者的免疫系統(tǒng)，導致免疫功能缺陷或下降。免疫功能指標如E－玫瑰結(jié)試驗、CH50、C3補體、T細胞亞群、NK細胞活性、白介素Ⅱ等，在化療后均可不同程度的下降，大部分抗腫瘤化療藥物有免疫抑制作用［6，7］。有研究報告顯示治療前T淋巴細胞亞群（TLS）水平在正常范圍的小兒患者，在化療后CD＋3、CD＋4、CD＋4／CD＋8值均顯著下降［8］。在免疫功能指標上，T細胞來源于骨髓的淋巴樣干細胞，在胸腺中經(jīng)歷早期T細胞發(fā)育、陽性選擇和陰性選擇3個不同的分化階段后發(fā)育成熟為T細胞。NK細胞減少可導致游離出的微小癌栓成活［9］。

低分子肝素克服了普通肝素的出血、注射吸收低等缺點。低分子肝素能夠增加膜脂流動性，使鑲嵌在細胞膜脂質(zhì)雙層中的抗原決定簇暴露，增加腫瘤細胞的抗原性，利于體液免疫的殺傷［10］。同時可以使腫瘤細胞凋亡，并產(chǎn)生特異性免疫，從而起到殺傷腫瘤的作用。本文顯示，化療后兩組均無CR病例，治療組RR30.0%，對照組RP10.0%，治療組的近期療效明顯高于對照組（P＜0.05）。兩組患者CD＋3、CD＋4、CD＋4／CD＋8和NK細胞數(shù)量于化療后1 h與24h顯著降低，與治療前比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；治療組在化療后兩個時間點的上述指標值下降均較對照組明顯（P＜0.05）。

總之，低分子肝素在胃癌化療中的應用能夠有效提高近期療效，降低T細胞亞群和NK細胞數(shù)量，從而改善免疫功能，值得推廣應用。

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