涼山蟲草與冬蟲夏草中多糖的含量比較研究

陳璐，萬德光，陳斌儒，趙那，國錦琳

（成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，成都 611137）

冬蟲夏草為麥角菌科冬蟲夏草菌Cordyceps sinensis（Berk.）Sacc.寄生在鱗翅目蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲體上的幼蟲尸體及子座的復(fù)合體［1］，具有補(bǔ)腎益肺、止血化痰之功效，在臨床上常用于治療久咳虛喘、陽痿遺精、勞嗽咯血、腰膝酸軟等肺腎疾病。由于其嚴(yán)格的寄生性和對生態(tài)地理環(huán)境的特殊要求（海拔3 000～5 000m高寒地區(qū)），野生資源十分稀少，供需矛盾嚴(yán)重，使得冬蟲夏草的替代資源、替代品研究日益受到人們的重視，成為新的研究熱點(diǎn)［2］。

涼山蟲草為麥角菌科真菌涼山蟲草Cordyceps liangshanensis Zang，Liu et Hu寄生在鱗翅目昆蟲幼蟲體上幼蟲尸體及子座的復(fù)合體，為我國四川涼山州和云南昭通市一帶特有的蟲草資源，與冬蟲夏草功效相似，在民間已有較長的藥用歷史，1992年被收載入四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)［3］。涼山蟲草分布海拔較低，對生態(tài)環(huán)境要求不高，資源量豐富，極有可能發(fā)展成為一種優(yōu)良的冬蟲夏草替代資源。

有關(guān)涼山蟲草的藥材性狀、顯微鑒別、薄層色譜鑒別等研究已有報道［4－6］，但有關(guān)化學(xué)成分和分析的報道很少。為此，本研究選擇蟲草多糖為評價指標(biāo)，進(jìn)行涼山蟲草與冬蟲夏草的多糖含量比較研究，以期為進(jìn)一步開發(fā)和利用涼山蟲草奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

試劑與儀器：葡萄糖為國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品，重蒸苯酚、濃硫酸均為成都科龍化工廠產(chǎn)品，水為超純水。電子天平（SARTORIUS，BSA 124S），紫外可見分光光度計（上海尤尼柯，UV－2000）。

藥材：涼山蟲草與冬蟲夏草藥材來源見表1，經(jīng)四川省食品藥品檢驗(yàn)所黎躍成主任藥師鑒定確認(rèn)為Cordyceps liangshanensis、Cordyceps sinensis，藥材粉碎（過二號篩），備用。

表1 蟲草樣品來源

2 結(jié)果

2.1 對照品和供試品溶液的制備

對照品溶液的制備：精密稱取葡萄糖對照品6mg，置5mL容量瓶中，加蒸餾水溶解并定容，即得1.2mg·mL－1葡萄糖對照品溶液；供試品溶液的制備：取干燥至恒重的涼山蟲草樣品L1、L2，冬蟲夏草樣品S1、S2各3份，每份0.1g，精密稱定，各加入蒸餾水20mL，稱重，沸水浴加熱4h，冷卻至室溫，蒸餾水補(bǔ)足重量。過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液［7］。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密吸取上述對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1mL至1mL離心管中，用蒸餾水補(bǔ)足每管至1mL，配置成濃度分別為120μg·mL－1、240μg·mL－1、480μg·mL－1、960μg·mL－1、1 200μg·mL－1的葡萄糖供試品溶液。各吸取0.2mL至具塞試管中，加入1mL6%重蒸苯酚，5mL濃硫酸，混勻，室溫放置10min，40℃水浴15min，冷卻至室溫，搖勻，在490nm處測定吸光度。以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求得回歸方程：Y＝0.0009X＋0.6977，r＝0.9991，結(jié)果表明葡萄糖濃度在120～1 200μg·mL－1內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3 精密度試驗(yàn)

取葡萄糖對照品溶液（480μg·mL－1）0.2mL至具塞試管中，加入1mL6%重蒸苯酚，5mL濃硫酸，混勻，室溫放置10min，40℃水浴15min，冷卻至室溫，搖勻，在490nm處測定吸光度。記錄6次測定值，計算RSD為0.93%，說明精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按2.1項(xiàng)下制備涼山蟲草與冬蟲夏草供試品，取供試品溶液0.2mL，分別在0、2、4、8、12、24h按2.7項(xiàng)下測定吸光度。計算得涼山蟲草RSD為1.92%，冬蟲夏草RSD為2.14%，說明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取干燥至恒重的涼山蟲草L1樣品6份，每份0.1g，精密稱定，按2.1項(xiàng)下制備供試品溶液，按2.7項(xiàng)下分別測定6份樣品吸光度值，測得多糖的平均含量為13.01mg·g－1，RSD為2.32%（n＝6），說明重復(fù)性良好。

2.6 加樣回收試驗(yàn)

取干燥至恒重的涼山蟲草L1樣品9份，每份0.1g，精密稱定，置具塞試管中，按下表分別精密加如葡萄糖對照品，按2.1項(xiàng)下制備供試品溶液，按2.7項(xiàng)下分別測定含量，計算回收率，結(jié)果見表2，平均回收率為100.65%，RSD＝3.07%（n＝9）。

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（μg，n＝9）

2.7 涼山蟲草與冬蟲夏草的多糖含量測定

取2.1項(xiàng)下制備各供試品溶液0.2mL至具塞試管中，加入1mL 6%重蒸苯酚，5mL濃硫酸，混勻，室溫放置10min，40℃水浴15min，冷卻至室溫，搖勻，在490nm處測定吸光度，3份求平均值，含量測定結(jié)果見表3。

表3 多糖含量測定結(jié)果（n＝3）

3 討論

真菌多糖（如茯苓多糖、銀耳多糖、靈芝多糖等）普遍具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗氧化等廣泛的藥理活性，成為近年來藥用真菌化學(xué)成分研究的熱點(diǎn)。現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，蟲草多糖具有增強(qiáng)機(jī)體免疫、抗腫瘤、抗肝損傷、降血糖以及防輻射、抗氧化等多種藥理活性，是蟲草類真菌的主要活性成分之一，檢測此類成分含量的高低對蟲草質(zhì)量的評價有一定的意義［7－10］。從測定結(jié)果看，涼山蟲草中含有豐富的多糖類成分，但含量低于冬蟲夏草。

近年來由于冬蟲夏草獨(dú)特的功效以及人們健康保健意識的提高，國內(nèi)外尤其是國際市場對冬蟲夏草的需求量持續(xù)上升，供需矛盾日益嚴(yán)重，冬蟲夏草價格不斷飆升，至2012年1月，國內(nèi)中藥材市場冬蟲夏草價格已達(dá)到15萬元／kg（3 500條）。在如此高昂的價格和野生資源日益枯竭的現(xiàn)狀下，冬蟲夏草的替代品研究顯得十分重要。從蟲草屬真菌中尋找與之親緣關(guān)系相近的品種，開發(fā)冬蟲夏草替代資源未來的發(fā)展方向。涼山蟲草與冬蟲夏草菌同為麥角菌科蟲草屬，寄主同為鱗翅目昆蟲，二者親緣關(guān)系相近、功效相似，極有希望發(fā)展成為一種優(yōu)良的冬蟲夏草替代資源。但到目前為止，涼山蟲草的研究工作還剛剛起步，是否能成為冬蟲夏草替代品，尚需進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分及藥理藥效學(xué)等方面的研究工作。

［1］國家藥典委員會.中國藥典（一部）［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：106.

［2］陳仕江，鐘國躍，馬開森.珍稀名貴中藥材冬蟲夏草資源可持續(xù)利用的思考與建議［J］.重慶中草藥研究，2006，8（2）：8－9.

［3］四川省衛(wèi)生廳.四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)（增補(bǔ)本）［S］.1992：74.

［4］胡若瑛.涼山蟲草的研究［J］.中草藥，1983，14（17）：35－36.

［5］劉衛(wèi)衛(wèi).冬蟲夏草的真?zhèn)舞b別［J］.江西中醫(yī)藥，2007，38（11）：55.

［6］張曉峰，劉海青，黃立成，等.中國蟲草［M］.西安：陜西科學(xué)技術(shù)出版社，2008：349－350.

［7］彭騰，賈波，彭成，等.白術(shù)茯苓湯調(diào)控脾虛大鼠血管活性腸肽總多糖的提取工藝研究［J］.成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2008，3（4）：253－255，268.

［8］陳紅霞，賈曉斌.冬蟲夏草多糖的藥理學(xué)研究進(jìn)展［J］.江蘇大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2005，15（1）：74－76，78.

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［10］Zhang W，Yang J，Chen J，et al.Immunomodulatory and antitumour effects of an exopolysaccharide fraction from cultivated Cordyceps sinensis（Chinese caterpillar fungus）on tumour－bearing mice［J］.Biotechnol Appl Biochem，2005，42（1）：9－15.

［11］Yoo HS，Shin JW，Cho JH，et al.Effects of Cordyceps militaris extract on angiogenesis and tumor growth［J］.Acta Pharmacol Sin，2004，25（5）：657－665.