鴨坦布蘇病毒病的研究進展

胡奇林 孫敏華

（廣東省農業科學院獸醫研究所，廣東省獸醫公共衛生公共實驗室 廣州 510640）

鴨坦布蘇病毒（Duck Tembusu Virus,DTMUV）病又稱“鴨黃病毒病”、“鴨出血性卵巢炎”或“鴨產蛋下降-死亡綜合征”等，是自2010年春季以來我國主要蛋鴨飼養區出現的一種新的禽傳染病。該病臨床上以蛋鴨采食量下降，產蛋量驟然減少，即5天內減蛋超過90%或者絕產為主要癥狀，以卵泡膜出血、充血，卵泡變形為主要病變，給我國水禽業造成了嚴重經濟損失。本文對該病的研究現狀作一綜述。

1 病原學

2010年曹貞貞等[1]從我國部分地區發病鴨群中分離到黃病毒YY5，認為可能是鴨坦布蘇病毒病的病原。2010年滕巧泱、顏丕熙等[2]對上海、浙江和江蘇發病鴨場進行病原分離也獲得了本病毒。2010年萬春和[3]等自表現產蛋驟降的病死種鴨中分離到有囊膜、直徑為30～50nm的病毒WR株。2010年Su等[4]從發病鴨臟器中分離出了一種新型黃病毒BYD，與坦布蘇病毒關系密切，證明是鴨坦布蘇病毒病病原。隨后，李玉峰等[5]、黃梅欣等[6]和孫敏華等[7-8]分別從山東蛋鴨、江蘇產蛋鵝和廣東產蛋鴨、肉鴨中分離到DTMUV。

DTMUV屬于黃病毒科（Flaviviridae）黃病毒屬。DTMUV顆粒呈球形，直徑約50nm，有囊膜，表面有纖突[1-4]。DTMUV對乙醚、氯仿及去氧膽酸鹽敏感。病毒不耐熱，50℃以上加熱60 min活性喪失。適宜pH范圍為6～9，pH＜5或pH＞10時感染性喪失[9]。DTMUV不能凝集雞、鴨、鵝、鴿、鼠、兔、豬和人的紅細胞[1，4-5]。

DTMUV經尿囊腔接種鴨胚3～5d后死亡，表現為絨毛尿囊膜增厚、水腫，胚體水腫、出血。DTMUV能在鴨胚、雞胚、鴨胚成纖維細胞及Vero細胞中增殖，主要在感染細胞的胞漿內復制[5,9]。DTMUV能在鴨胚成纖維細胞增殖，并產生細胞病變(CPE)，表現為折光性增強，細胞變圓及融合，最終崩解死亡[9]。

DTMUV基因組是不分節段的單股正鏈RNA，含10990個核苷酸。基因組由5'端和3'端非編碼區(UTR)及一個開放閱讀框(ORF)組成，基因組順序為5'-UTR-C-prM/M-E-NS1-NS2A/2B-NS3-NS4A/4BNS5-UTR-3'。基因組ORF翻譯后合成一多聚蛋白前體，在宿主信號肽酶和病毒絲氨酸蛋白酶的催化下切割成為C、M和E 3個結構蛋白 (C為衣殼蛋白，M為膜蛋白，E為包膜蛋白)和7種非結構蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B 和 NS5)[10]。

2 流行病學

2.1 易感動物

自然條件下，蛋鴨(紹興鴨、縉云麻鴨、山麻鴨、金定鴨、康貝爾鴨、臺灣白改鴨等)、肉種鴨(櫻桃谷鴨、北京鴨等)、野鴨種鴨、肉鴨、產蛋鵝及肉鵝均會發病，蛋雞也會發病，番鴨未見發病[1-2,6,11]。

2.2 發病日齡

產蛋鴨，主要發生于120～300日齡；主要見于210～280日齡；肉鴨主要見于10～40日齡，多在20日齡左右[4,5]。

2.3 發病率、致死率

蛋鴨發病率達90%～100%，死亡率小于10%，多數在5%以下；肉鴨發病率10%～30%，死亡率為10%～20%[4,5-6]。

2.4 病程

一般為 10～30d[4,5]。

2.5 傳播途徑

推測可能與蚊蟲有關，同時本病可以經鴨直接傳播[2]。該病毒能經糞便排毒，污染環境、飼料、飲水、器具及運輸工具等而造成傳播[7]。

2.6 傳播速度

一般在1周左右可以感染一個養殖小區或聚養區的所有鴨群。一旦某個鴨場發生該病,很快以該場為中心，快速擴散，幾天內可傳遍周邊區域，特別是在鴨棚密集區傳播更迅速，發病更嚴重[1，4]。

3 臨床癥狀

產蛋鴨發病后，主要表現采食量下降，產蛋量驟然減少，即5天內減蛋超過90%或者絕產，拉綠色糞便為主要癥狀，病程持續20～30d，隨后鴨群逐漸康復，產蛋率回升。肉鴨發病后，主要表現為發熱、食欲減退、搖頭和癱瘓等癥狀[1，4-5]。

4 病理變化

病死鴨病變主要在卵巢，初期可見部分卵泡充血和出血，中后期可見卵泡嚴重出血、變性和萎縮，嚴重時破裂，引發卵黃性腹膜炎，少部分鴨輸卵管內出現膠凍樣或干酪樣物。肝臟輕微腫大，有出血或瘀血，有些鴨表面有針尖狀白色點狀壞死。部分鴨脾臟腫大、小腸黏膜出血，野鴨病變基本同上[1，4-5]。

5 檢測技術

5.1 分子生物學方法

Su等[4]建立了針對DTMUV E基因的RT-PCR方法，擴增片斷為401bp。萬春和等[13]參照GenBank上登錄的黃病毒科黃病毒屬NS5基因片段序列設計引物，建立能檢測引起DTMUV的RT-PCR方法。該方法能使鴨坦布蘇病毒病毒擴增出1條約470 bp的特異性片段，最低可檢出20pg病毒核酸，具有較好的特異性、敏感性和準確性。顏丕熙等[14]建立了檢測鴨坦布蘇病毒的套式RT-PCR方法，該套式RT-PCR比常規RT-PCR敏感性高10倍。Wang等[15]建立了針對DTMUV E基因的RT-LAMP方法。該方法比常規RT-PCR方法敏感80倍，可檢測到2拷貝/μL病毒核酸。最近，Yan等[16]建立了針對E基因的TaqMan探針熒光定量RT-PCR，該方法比常規RT-PCR敏感100倍，最低可檢測到50個拷貝的病毒核酸。高緒慧等[17]利用RT-PCR方法擴增DTMUV的NS3基因406bp的特異性片段，回收并純化PCR產物，用地高辛標記，制備核酸探針試驗結果表明，該探針具有良好的特異性；該探針對鴨黃病毒的RNA最低檢出限量為100μg/L。對疑似黃病毒感染鴨的肝臟、肺臟、脾臟、輸卵管、卵泡膜和泄殖腔棉拭子進行檢測，以卵泡膜的檢出率最高。張帥等[18]設計了1對特異性引物，建立了DTMUV的一步法RT-PCR檢測方法。該方法具有特異、快速、敏感和準確等特點，可以檢出1.82個TCID50的病毒核酸，對2010年至2011年6月份前的106份產蛋下降鴨群臨床病料進行了檢測，結果顯示樣品陽性率為46.2%。

5.2 血清學方法

姬希文等[19]以純化的FX2010株作為包被抗原，建立了檢測DTMUV血清抗體的間接ELISA法，該方法具有較高的敏感性和特異性，可以用于該病的診斷和流行病學調查。

6 防治技術

6.1 預防

6.1.1 綜合防治措施 ①建立良好的生物安全體系。養殖場選址時遠離高速公路、屠宰場、活禽交易市場和養殖密集區；不要從疫區引進種禽和購買苗禽；實行全進全出飼養制度；搞好養殖場周圍的環境衛生，清除污水、垃圾和衛生死角，減少蚊子的孳生，做好驅蚊和滅蚊；病死禽和糞便統一無害化處理。②加強飼養管理，改善養殖環境。如降低飼養密度，冬春季節注意通風和保溫，保證鴨舍的溫度和濕度。杜絕雞、鴨和鵝混養。

6.1.2 疫苗 目前尚無有效防制DTMUV的商品化的疫苗。萬春和等[20]2011年報道，研制出鴨黃病毒油乳劑滅活疫苗，攻毒試驗結果表明，免疫實驗組蛋鴨和空白對照組蛋鴨平均產蛋率下降無差異，且觀察期內均未見發病死亡，觀察期滿撲殺后均無肉眼可見病變。而未免疫攻毒組蛋鴨減蛋明顯，4天內平均產蛋率下降為40.85%，比疫苗免疫組平均產蛋率低39.15%。

6.2 治療

發病后可以采取以下綜合治療措施，如在飲水中添加復合維生素，并通過飲水適當給予抗生素，以防止鴨群繼發感染細菌病。同時，應對各種用具與設備、運輸車輛及種蛋進行嚴格消毒，墊料與病死鴨應進行焚燒或生物處理。在發病流行期間，做好封棟、封場工作，做好飼養人員的生活安排，管理人員與生產人員必須隔離。

采集發病1周后鴨群血液，無菌操作分離血清，應用于發病鴨群，可緩解癥狀，提高食欲，加快鴨群產蛋性能恢復[21]。

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