VEGF、MMP-2在肝細胞癌組織中的表達與意義

王胐胐，李世朋，趙建龍，李文雅，丁雪貞，席守民

近些年來血管內皮生長因子VEGF在肝細胞癌血管生成和進展中的作用被廣泛研究[1]。基質金屬蛋白酶MMP-2可以參與細胞外基質(ECM)的降解和血管的發生，被認為在惡性腫瘤的浸潤轉移中發揮重要的作用[2]。本文采用免疫組織化學法檢測VEGF、MMP-2在肝細胞癌組織中表達及兩者的相關性，為肝細胞癌浸潤轉移的研究提供理論依據。

1 材料與方法

1.1組織標本收集解放軍150中心醫院2007年6月～2011年8月接受肝細胞癌手術治療患者術后存檔的石蠟標本32例與正常肝臟存檔石蠟標本19例，所有病例均有完整臨床資料。

1.2主要試劑一抗兔抗人VEGF(美國BIOSS生產)和兔抗人MMP-2(美國BIOSS生產)，二步法免疫組化試劑盒(SP-0023)產自美國ZYMED公司，均購自北京博奧森生物技術有限公司；DAB顯色試劑盒(AR-0612)購自北京鼎國昌盛生物技術有限公司；其他試劑均為分析純。

1.3方法采用免疫組化并嚴格按照二步法免疫組化試劑盒操作說明書進行染色。每例蠟塊4 μm 厚連續切片3張,其中1張進行HE 染色,另2張進行免疫組化染色。一抗體工作液濃度均為 1∶150。石蠟切片常規脫蠟、水化,微波爐抗原熱修復, 加封閉血清，最后進行DAB 液顯色, 顯微鏡下控制，自來水沖洗終止反應, 蘇木素復染2 min, 鹽酸乙醇分化，自來水沖洗，然后梯度酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固。PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4結果判斷標準用試劑盒中的陽性片作為陽性對照，PBS取代一抗作為陰性對照。細胞膜或胞漿染色呈棕黃色視為陽性，采用半定量積分法依據染色強度和陽性細胞百分率判斷染色結果[3]。

1.5統計學分析應用SPSS 19.0統計軟件進行統計學分析。樣本率的比較采用χ2檢驗，相關性分析采用 Spearman 相關檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

VEGF、MMP-2染色主要存在于細胞漿，細胞膜亦有部分染色。VEGF在肝細胞癌組織中的表達明顯高于肝臟正常組織，差異具有顯著性(P<0.05)，見表1。MMP-2在肝細胞癌組織中的陽性率顯著高于正常肝組織，差異具有顯著性(P<0.05)，見表2。采用配對資料的檢驗計算相關系數r=0.497，P<0.05，表明兩種蛋白在肝細胞癌中的表達存在高度相關性，見表3。

表1 VEGF在不同肝臟組織中的表達

表2 MMP-2在不同肝臟組織中的表達

表3 VEGF與MMP-2在肝細胞癌中表達的相互關系

3 討論

惡性腫瘤的生長、浸潤和轉移依賴于腫瘤間質血管生成，VEGF能通過旁分泌形式特異性作用于血管內皮細胞，通過促進內皮細胞增殖，增加血管通透性，以誘導腫瘤血管生成，在腫瘤的發生發展中起關鍵作用[4-5]。Park等[6]發現在正常肝細胞和肝細胞癌細胞中都有VEGF的表達，而且隨著肝細胞癌組織血管形成的逐步發展，VEGF的表達程度也逐漸增加。本文通過采用免疫組織化學法檢測肝細胞癌組織和正常肝臟組織中VEGF的表達，結果VEGF在肝細胞癌組織中的表達顯然高于正常肝臟組織，說明本研究結果與Park等人的相符。因此表明血管內皮生長因子是一種增加血管通透性并促進新血管生長的細胞因子，在肝細胞癌組織中呈高表達并與侵襲轉移和預后等生物學行為關系密切，與腫瘤及腫瘤轉移灶的生長中的血管生成有關[7]。

ECM是腫瘤轉移的主要屏障，而金屬蛋白酶MMPs是降解ECM最重要的酶類。MMPs主要由成纖維細胞、內皮細胞、軟骨細胞、巨噬細胞、中性粒細胞及腫瘤細胞合成和分泌，廣泛分布于人體各組織。基質金屬蛋白酶是一個依賴鋅離子的肽鏈內切酶基因家族，研究發現MMPs活性上調與腫瘤侵襲、轉移有關[8]。目前已發現多種，其中MMP-2可降解Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型膠原、明膠等多種底物，其在腫瘤發生發展及侵襲過程中起著非常重要的作用。本文通過免疫組化方法對32例肝細胞癌組織和19例正常組織MMP-2表達發現，MMP-2的陽性產物表達在細胞內，呈棕黃色。MMP-2在肝細胞癌組織中的陽性率顯著高于正常肝組織，差異具有顯著性(P<0.05)。因此可以說 MMP-2與肝細胞癌的發生發展和侵襲轉移可能都存在密切關系。

本文采用配對資料的檢驗計算相關系數r=0.497，P<0.05，表明VEGF與MMP-2在肝細胞癌組織中的表達呈正相關。因此推測VEGF和MMP-2在肝細胞癌發生發展、侵襲轉移過程中存在協同作用。

參考文獻：

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