豹斑毒鵝膏菌和褐鱗環柄菇的毒素粗品對劍水蚤的毒效研究

摘要：利用豹斑毒鵝膏菌（Ａｍａｎｉｔａ ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ （ＤＣ．：Ｆｒ．） Ｓｃｈｒｍｍ．）和褐鱗環柄菇（Ｌｅｐｉｏｔａ ｈｅｌｖｅｏｌａ Ｂｒｅｓ．）的毒素粗品對劍水蚤（Ｃｙｃｌｏｐｓ）進行毒殺試驗。結果表明，豹斑毒鵝膏菌和褐鱗環柄菇的毒素粗品對劍水蚤均具有一定的毒殺作用，并表現出明顯的劑量效應和時間效應。在作用時間為12 h時，豹斑毒鵝膏菌毒素粗品對劍水蚤的半致死濃度（ＬＣ５０）要低于褐鱗環柄菇毒素粗品；在作用時間為４８ ｈ時，豹斑毒鵝膏菌毒素粗品對劍水蚤的ＬＣ５０為０．０４９ ｍｇ／ｍＬ，褐鱗環柄菇毒素粗品對劍水蚤的ＬＣ５０為０．０３８ ｍｇ／ｍＬ；在相同濃度下，豹斑毒鵝膏菌毒素粗品對劍水蚤的半致死時間（ＬＴ５０）比褐鱗環柄菇毒素粗品的都要短。因此，在劍水蚤大量暴發的情況下，可選擇豹斑毒鵝膏菌毒素粗品來治理；推測褐鱗環柄菇的毒性發作有一定的潛伏期，若需要較長時間的持續毒殺作用時，則可用褐鱗環柄菇毒素粗品來治理。

關鍵詞：劍水蚤（Ｃｙｃｌｏｐｓ）；豹斑毒鵝膏菌（Ａｍａｎｉｔａ ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ （ＤＣ．：Ｆｒ．） Ｓｃｈｒｍｍ．）；褐鱗環柄菇（Ｌｅｐｉｏｔａ ｈｅｌｖｅｏｌａ Ｂｒｅｓ．）；毒素粗品；毒效試驗

中圖分類號：Ｑ９５９．２２３＋．３４；Ｓ４８２．３＋９ 文獻標識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０12）17－3801-03

Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ Ａｍａｎｉｔａ ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ （ＤＣ．：Ｆｒ．） Ｓｃｈｒｍｍ． ａｎｄ Ｌｅｐｉｏｔａ ｈｅｌｖｅｏｌａ Ｂｒｅｓ． Ｔｏｘｉｎｓ Ｃｒｕｄｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｃｙｃｌｏｐｓ

ＬＡＩ Ｊｉａｎ，ＹＡＮＧ Ｓｈａｏ－ｂｉｎ

（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｓｈｅｎｙａｎｇ １１００４４， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｏｆ Ａｍａｎｉｔａ ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ（ＤＣ．：Ｆｒ．） Ｓｃｈｒｍｍ． ａｎｄ Ｌｅｐｉｏｔａ ｈｅｌｖｅｏｌａ Ｂｒｅｓ． ｔｏｘｉｎｓ ｃｒｕｄｅ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｃｙｃｌｏｐｓ ｗｅｒｅ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｂｏｔｈ ｔｈｅ Ａ. ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ ａｎｄ Ｌ. ｈｅｌｖｅｏｌａ ｔｏｘｉｎｓ ｈａd ａ ｃｅｒｔａｉｎ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ， ａｎｄ ｓｈｏｗｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｏｓｅ－ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ ｔｉｍｅ ｅｆｆｅｃｔ． Ｉｎ 12 ｈ， ＬＣ５０ ｏｆ Ａ. ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ ｔｏｘｉｎ are lower than the Ｌｅｐｉｏｔａ ｈｅｌｖｅｏｌａ Ｂｒｅｓ． ｔｏｘｉｎ； Ｉｎ ４８ ｈ， ＬＣ５０ ｏｆ Ａ. ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ ｔｏｘｉｎ was ０．０４９ ｍｇ／ｍＬ， ａｎｄ ｔｈｅ ＬＣ５０ ｏｆ Ｌ. ｈｅｌｖｅｏｌａ ｔｏｘｉｎ waｓ ０．０３８ ｍｇ／ｍＬ； Ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ， ｔｈｅ ＬＴ５０ ｏｆ Ａ. ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ ｔｏｘｉｎ was shorter ｔｈａｎ ｔｈｅ Ｌ. ｈｅｌｖｅｏｌａ ｔｏｘｉｎ． Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ， ｆｏｒ ｔｈｅ ｌａｒｇｅ ｏｕｔｂｒｅａｋｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｙｃｌｏｐｓ， ｏｎｅ ｃａｎ ｃｈｏｏｓｅ ｔｈｅ Ａｍａｎｉｔａ ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ （ＤＣ．：Ｆｒ．） Ｓｃｈｒｍｍ． ｔｏｘｉｎ； dicating that there is a latent period for the toxicity of L. helveola， ｆｏｒ ｌｏｎｇｅｒ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｅｆｆｅｃｔ， ｏｎｅ ｃｈｏｏｓｅ ｔｈｅ Ｌ. ｈｅｌｖｅｏｌａ ｔｏｘｉｎ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｃｙｃｌｏｐｓ； Ａｍａｎｉｔａ ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ （ＤＣ．：Ｆｒ．） Ｓｃｈｒｍｍ．； Ｌｅｐｉｏｔａ ｈｅｌｖｅｏｌａ Ｂｒｅｓ．； ｔｏｘｉｎｓ ｃｒｕｄｅ ｐｒｏｄｕｃｔｓ； ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ

劍水蚤（Ｃｙｃｌｏｐｓ）隸屬節肢動物門甲殼綱劍水蚤目劍水蚤科劍水蚤屬，是淡水浮游動物中的重要類群。水蚤是魚類的天然餌料，但是由于人類過量捕捉經濟魚類，打破了原有的水生生態平衡，導致包括水蚤類在內的各類浮游動物大量孳生，嚴重影響了水產養殖業的經濟效益。近年來，以劍水蚤為代表的水蚤類浮游動物已在許多城市水源特別是水庫、湖泊類水源水中大量出現。劍水蚤的甲殼具有很強的抗氧化性，常規水處理的消毒工藝難以將其殺滅；劍水蚤是諸如血吸蟲、線蟲等水中致病生物的中間宿主，從而成為疾病傳播的重要媒介，對居民飲用水的衛生安全構成了潛在威脅。

目前，對劍水蚤的殺滅處理主要是使用有機磷化學藥劑，但磷不易降解，其藥物殘留會對水域和土壤造成污染，對人畜健康不利。因此，開發綠色環保型生態藥劑勢在必行。近幾年來，一些高等大型真菌已經逐漸被證實含有殺蟲活性物質［１］。豹斑毒鵝膏菌（Ａｍａｎｉｔａ ｐａｎｔｈｅｒｉｎａ （ＤＣ．：Ｆｒ．） Ｓｃｈｒｍｍ．）及褐鱗環柄菇（Ｌｅｐｉｏｔａ ｈｅｌｖｅｏｌａ Ｂｒｅｓ．）具有一定的生物毒殺活性，且其活性比較穩定，不易受溫度和酸堿性的影響［２，３］。因此，本試驗在室內測定了豹斑毒鵝膏菌和褐鱗環柄菇的毒素粗品對劍水蚤的毒效，以期為劍水蚤等浮游生物的污染治理及大型有毒真菌的開發利用提供一定的參考。

１ 材料與方法

１．１ 材料

１．１．１ 供試真菌 豹斑毒鵝膏菌和褐鱗環柄菇先后于２０１１年７～９月采集于遼寧省沈陽市輝山風景區，參照相關資料［２］進行對比，并經遼寧省農業科學院食用菌研究所劉俊杰研究員鑒定。

１．１．２ 供試蟲體 劍水蚤從野外采集，經標準方法［４］培養繁殖后選擇劍水蚤成蟲作為試驗對象。

１．１．３ 毒素粗品制備 將采集的兩種大型真菌的子實體分別進行固體菌種擴繁，接種于裝有標準的ＰDA液體培養基的搖瓶中，經液體發酵搖床培養后對發酵液進行超聲波細胞破碎，破碎液于９ ０００ ｒ／ｍｉｎ離心后取上清液進行旋轉蒸發濃縮，將濃縮液于鼓風干燥箱中４０ ℃恒溫干燥得毒素粗品固體物質，裝入ＥＰ管中備用［５－７］。

１．１．４ 儀器與設備 ＴＤ電子天平，ＶＰＬ－Ａ５０３２智能壓力蒸汽滅菌器，ＨＺＱ－Ｆ１６０全溫振蕩培養箱，ＺＨＪＨ－２１０９Ｂ超凈工作臺，ＪＹ９９－２Ｄ超聲波細胞粉碎機，ＧＬ－１６１Ｘ箱式高速冷凍離心機，１０１－Ｉ電熱恒溫鼓風干燥箱等。

１．２ 方法

通過預試驗確定合適的濃度梯度［８］，將豹斑毒鵝膏菌的毒素粗品用０．５ ｍＬ ９５％的乙醇溶解，然后用曝氣自來水分別按Ａ１（０．２５ ｍｇ／ｍＬ）、Ａ２（０．６７ ｍｇ／ｍＬ）、Ａ３（０．８0 ｍｇ／ｍＬ）、Ａ４（１．０0 ｍｇ／ｍＬ）、Ａ５（１．３0 ｍｇ／ｍＬ）、Ａ６（２．０0 ｍｇ／ｍＬ）的濃度各配制１００ ｍＬ溶液，以僅含有０．５ ｍＬ ９５％乙醇的曝氣自來水溶液Ａ０（０ ｍｇ／ｍＬ）為空白對照。溶液均為自然ｐＨ。將配制好的溶液分別注入７個１５０ ｍＬ燒杯中，每個燒杯中分別用１ ｍＬ注射器接種３０只劍水蚤，再將燒杯放入生化培養箱中，保持（２２±１） ℃、通風、光暗比為１２ ｈ∶１２ ｈ的條件。每組試驗重復３次。按上述相同的方法和試驗條件進行褐鱗環柄菇毒素粗品對劍水蚤的毒效試驗，分別設置Ｂ１（０．２５ ｍｇ／ｍＬ）、Ｂ２（０．６７ ｍｇ／ｍＬ）、Ｂ３（０．８0 ｍｇ／ｍＬ）、Ｂ４（１．０0 ｍｇ／ｍＬ）、Ｂ５（１．３0 ｍｇ／ｍＬ）、Ｂ６（２．０0 ｍｇ／ｍＬ）共６個系列梯度和空白對照Ｂ０（０ ｍｇ／ｍＬ）。分別于試驗后的１２、２４、４８ ｈ觀察劍水蚤的死亡情況，記錄死亡數，按以下公式計算劍水蚤的死亡率。

死亡率＝■×１００％

劍水蚤的死亡標準：設定劍水蚤呼吸和心跳停止為死亡，通過立體顯微鏡觀察劍水蚤的死亡情況。

１．３ 數據處理

運用ＳＰＳＳ １７．０統計軟件對數據進行處理，采用概率單位法求出回歸方程，根據回歸方程分別計算出豹斑毒鵝膏菌毒素粗品和褐鱗環柄菇毒素粗品對劍水蚤的半致死濃度（ＬＣ５０）及半致死時間（ＬＴ５０）。

２ 結果與分析

２．１ 劍水蚤的中毒現象

正常生活未中毒的劍水蚤上下游動富有節奏感，跳躍時具有直線跳躍的趨性，且具有一定的頻率。在行為上，未中毒的劍水蚤跳躍頻繁，反應敏捷；用強光照射燒杯時，劍水蚤具有強烈的趨光性，跳躍頻率急劇加快；當用玻璃棒輕輕敲擊燒杯時，劍水蚤應激反應迅速且強烈。劍水蚤通常在水體的中上部活動。

與正常生活未中毒的劍水蚤相比，已中毒的劍水蚤上下游動沒有節奏感，跳躍時上時下、時前時后，如醉酒狀；而且在行為上也有明顯變化：已中毒的劍水蚤跳躍頻率大大減慢，反應遲緩；用強光照射燒杯時其無明顯的趨光性；當用玻璃棒輕輕敲擊燒杯時，其稍有應激反應，緩慢跳躍后逐漸下沉至水體中下部；已中毒的劍水蚤通常在水體的中下部活動。

２．２ 毒效試驗分析

１２、２４、４８ ｈ內不同濃度的豹斑毒鵝膏菌毒素粗品及褐鱗環柄菇毒素粗品對劍水蚤的毒殺效率分別如表１和表２所示。由表１可以看出，在相同的作用時間下，隨著豹斑毒鵝膏菌毒素粗品濃度的升高，毒殺效率明顯提高，具有明顯的劑量效應；在相同的濃度下，隨著作用時間的增加，毒殺效率明顯提高，具有明顯的時間效應。在４８ ｈ的作用時間下，濃度為０．２５ ｍｇ／ｍＬ時豹斑毒鵝膏菌毒素粗品對劍水蚤的毒殺效率達到了８４．３３％；濃度為２．０0 ｍｇ／ｍＬ時毒殺效率達到了１００．００％。

由表２可以看出，在相同的作用時間下，隨著褐鱗環柄菇毒素粗品濃度的升高，毒殺效率明顯提高，具有明顯的劑量效應；在相同的濃度下，隨著作用時間的增加毒殺效率明顯提高，具有明顯的時間效應。在４８ ｈ的作用時間下，濃度為０．２５ ｍｇ／ｍＬ時毒殺效率達到了９１．１１％，濃度在1．30 ｍｇ／ｍＬ時毒殺效率達到了１００．００％。

１２、２４、４８ ｈ豹斑毒鵝膏菌及褐鱗環柄菇的毒素粗品對劍水蚤毒殺效率的回歸方程及ＬＣ５０如表３所示。由表３可知，１２、２４、４８ ｈ豹斑毒鵝膏菌毒素粗品對劍水蚤的ＬＣ５０分別為０．４２１、０．２９０、０．０４９ ｍｇ／ｍＬ，褐鱗環柄菇毒素粗品對劍水蚤的ＬＣ５０分別為０．７６４、０．２６２、 ０．０３８ ｍｇ／ｍＬ。作用時間為１２ ｈ時，豹斑毒鵝膏菌毒素粗品對劍水蚤的ＬＣ５０較褐鱗環柄菇毒素粗品低，說明在１２ ｈ的作用時間下，豹斑毒鵝膏菌毒素粗品對劍水蚤的毒殺效率比褐鱗環柄菇毒素粗品高。在作用時間為２４ ｈ和４８ ｈ時，豹斑毒鵝膏菌毒素粗品對劍水蚤的ＬＣ５０均比褐鱗環柄菇毒素粗品的高，說明在２４ ｈ和４８ ｈ的作用時間下，褐鱗環柄菇毒素粗品對劍水蚤的毒殺效率較豹斑毒鵝膏菌毒素粗品高。由此推測，褐鱗環柄菇的毒性發作會有一定的潛伏期，其相對豹斑毒鵝膏菌是慢毒。

不同濃度的豹斑毒鵝膏菌毒素粗品及褐鱗環柄菇毒素粗品對劍水蚤毒殺效率的回歸方程及LT５０如表４所示。由表４可知，在相同濃度下，豹斑毒鵝膏菌毒素粗品對劍水蚤的LT５０比褐鱗環柄菇毒素粗品的都要短。表明在相同濃度下，豹斑毒鵝膏菌毒素粗品對劍水蚤的毒殺效率比褐鱗環柄菇毒素粗品高。

３ 小結

本研究表明，豹斑毒鵝膏菌毒素粗品和褐鱗環柄菇毒素粗品對劍水蚤具有一定的毒殺作用，并表現出明顯的劑量效應和時間效應。在較短的作用時間（１２ ｈ）下，豹斑毒鵝膏菌毒素粗品對劍水蚤的毒殺效率高于褐鱗環柄菇毒素粗品；在相同濃度下，豹斑毒鵝膏菌毒素粗品對劍水蚤的ＬＴ５０比褐鱗環柄菇毒素粗品的都要短。因此，若在劍水蚤大暴發的情況下，可首選豹斑毒鵝膏菌毒素粗品來治理；推測褐鱗環柄菇的毒性發作有一定的潛伏期，若需要較長時間的持續毒殺作用，則可用褐鱗環柄菇毒素粗品來治理。

考慮到劍水蚤對水產養殖業及城市飲用水安全存在一定的危害，尋找更加安全、環保的高效生物源殺蟲劑來防治劍水蚤還需要進一步的研究。

參考文獻：

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