PCV2和PRRSV自然混合感染病豬的免疫組織化學診斷

摘要：對7例疑似為PCV2-PRRSV自然混合感染病豬的組織樣本采用常規HE染色和免疫組織化學SABC法染色進行了病理學觀察及組織內兩種病毒的檢測，并利用NIS-Elements高清晰度彩色圖文分析系統記錄觀察結果。HE染色結果顯示組織病理變化主要表現為增生性壞死性肺炎、壞死性淋巴結炎、卡他性腸炎、淋巴結內包涵體形成及肝臟肝竇單核巨噬細胞增生。免疫組織化學SABC法染色結果顯示3例為PCV2-PRRSV抗原陽性，2例為PCV2抗原陽性。在自然感染狀態下，PCV2-PRRSV混合感染是比較常見的，其組織病理變化與單獨感染時區別不顯著。

關鍵詞：豬；PCV2；PRRSV；混合感染；HE；IHC

中圖分類號：S858.28；R446.6 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2012）23-5421-03

Immunohistochemical Diagnosis of the Swine Naturally Coinfected with PCV2 and PRRSV

CAI Shuang-shuang1，WANG Li2，LU Yan-yun2，SHI Lu-lin2，GU Chang-qin2，ZHANG Wan-po2，

CHENG Guo-fu2，HU Xue-ying2

（1. Hubei Three Gorges Polytechnic， Yichang 443000，Hubei，China；

2.College of Veterinary Medicine， Huazhong Agricultural University，Wuhan 430070，China）

Abstract： Pathology observation and two kinds of viruses detection in tissues were carried out on 7 swine tissue samples suspected to be natural PCV2-PRRSV coinfection. The embedded tissue was sliced continuously for HE and immunohistochemical SABC staining. The observation was recorded by using NIS-Elements high-resolution colour graphic analysis system. The histopathological changes mainly were proliferative necrotizing pneumonia， necrotic lymphadenitis， mucoenteritis， body in lymph node， and hepatic sinus mononuclear phagocyte proliferation. PCV2-PRRSV mixed infection（3 cases） and PCV2 infection（2 cases） were shown in the result of immunohistochemical SABC staining. In the natural infection， PCV2-PRRSV coinfection was more common. The histopathological changes of coinfection with separate infection had no significant difference.

Key words： swime； PCV2； PRRSV； coinfection； HE； IHC

豬圓環病毒病和豬繁殖與呼吸綜合征是嚴重阻礙養豬業發展的傳染病之一，其病原分別為豬2型圓環病毒（PCV2）和豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）。PCV2和PRRSV對養豬業真正的危害并不表現在其單獨感染時，而是由于其免疫抑制作用而導致的混合感染或繼發感染。在自然感染病例中，最為常見的是PCV2-PRRSV混合感染，PCV2-PRRSV混合感染引起的臨床癥狀和病理變化與其他病原體引起的呼吸系統疾病和免疫抑制病極為相似，很難表現出典型的特征[2]。僅僅根據流行病學、臨床癥狀和病理變化很難對PCV2-PRRSV混合感染作出診斷，需要結合實驗室診斷方法作出綜合診斷[1，2]。

該試驗應用免疫組織化學SABC法檢測了PCV2和PRRSV在7例疑似PCV2-PRRSV自然混合感染病豬組織中的分布，并結合組織的病理變化特征對混合感染病例作出診斷，了解PCV2和PRRSV混合感染的致病特點，為PCV2-PRRSV自然混合感染的研究提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 組織材料 1份已知未感染PCV2和PRRSV的腸組織石蠟蠟塊，1份人工感染PCV2、1份人工感染PRRSV和1份人工PCV2-PRRSV混合感染的共4份腸組織石蠟蠟塊，以及來自于7頭疑似為PCV2-PRRSV混合感染病豬的組織石蠟蠟塊均為華中農業大學動物醫學院病理實驗室保存。

1.1.2 試劑 抗PCV2單克隆抗體（工作濃度為1∶600）、抗PRRSV單克隆抗體（工作濃度為1∶600）均由華中農業大學何啟蓋教授惠贈，多聚賴氨酸和即用型SABC試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.2 方法

將保存的組織蠟塊作連續切片（厚4 μm），一份備作常規HE染色，一份備作免疫組化染色（SABC法），染色后光學顯微鏡觀察，應用NIS-Elements高清晰度彩色圖文分析系統采集圖片，進行組織病理學結果分析。

2 結果與分析

2.1 HE染色結果

肺組織可見間質性肺炎，肺泡壁增厚，肺泡上皮細胞增生，肺泡腔內有壞死脫落的細胞及巨噬細胞（圖1A，B）。

淋巴結組織可見多個壞死灶，皮質部淋巴細胞缺失，局部有成團的中性粒細胞，小梁上有中性粒細胞浸潤。淋巴小結內可見大量的巨噬細胞，細胞質內有圓形均質堿性的包涵體（圖2A，B）。

腸道組織可見腸絨毛脫落，腸腺上皮細胞杯狀細胞化，黏膜血管擴張，黏膜上皮脫落，固有膜內有漿細胞、淋巴細胞浸潤，淋巴小結增多，淋巴小結內淋巴細胞缺失（圖3A，B）。

脾臟組織白髓內淋巴細胞減少，可見吞噬異物的巨噬細胞。

肝臟組織肝竇明顯增寬，巨噬細胞明顯增多。

2.2 免疫組化SABC法染色結果

在7頭疑似PCV2-PRRSV混合感染病豬中，經檢測，3頭豬的組織樣本為PCV2-PRRSV混合感染（42.86%），2頭豬的組織樣本為PCV2單獨感染（28.57%），2頭豬的組織樣本沒有檢測到病毒（28.57%），檢測到陽性信號的組織器官主要是肺、淋巴結、腸道、脾臟和肝臟。

肺組織中，PCV2強陽性信號出現在肺巨噬細胞細胞質內（圖1C），支氣管黏膜上皮也可見陽性信號，有些核也被著染為黃色；PRRSV陽性信號出現在Ⅱ型肺泡上皮細胞和肺巨噬細胞細胞質內，可見肺泡腔內壞死脫落的肺泡上皮細胞和巨噬細胞內強陽性信號（圖1D）。

淋巴結中，巨噬細胞細胞質內可見PCV2強陽性信號的包涵體（圖2C）；PRRSV強陽性信號出現于巨噬細胞細胞質內（圖2D），偶見核著染。

腸道組織中，漿細胞、腸腺杯狀細胞細胞質和黏膜上皮內PCV2強陽性信號，淋巴小結內巨噬細胞細胞質可見陽性信號（圖3C）；漿細胞、腸腺潘氏細胞和黏膜上皮內可見PRRSV強陽性信號，淋巴小結巨噬細胞細胞質內可見陽性信號（圖3D）。

脾臟組織中，脾小體淋巴細胞和巨噬細胞細胞質內可見PCV2弱陽性信號。

肝臟組織中，肝竇內皮細胞和巨噬細胞細胞質內可見PCV2強陽性信號。

3 小結與討論

該試驗中感染病豬的組織病理學檢查顯示出現了PCV2-PRRSV混合感染的組織病理變化，主要表現為增生性壞死性肺炎、壞死性淋巴結炎、壞死性腸炎、脾臟脾小體淋巴細胞缺失和肝臟肝竇增寬、巨噬細胞增多，并且在淋巴結巨噬細胞內有均質堿性包涵體，這些病變是PCV2-PRRSV混合感染病例的病理變化特征[3，4]，而且在PCV2-PRRSV抗原檢測均呈陽性的病豬與PCV2抗原檢測呈陽性的病豬之間沒有明顯區別。

免疫組織化學SABC法檢測到PCV2抗原主要出現在肺、淋巴結、腸道、脾臟和肝臟，但是并沒有在腎臟組織中檢測到PCV2抗原；檢測到PRRSV抗原主要出現在肺、淋巴結和腸道，但是在脾臟中未檢測到PRRSV抗原。該試驗檢測到PCV2和PRRSV均在感染細胞的細胞質內，主要的感染細胞是單核細胞和巨噬細胞，但是不在同一個細胞內，PCV2在淋巴結形成包涵體的巨噬細胞內，而PRRSV出現在另一些巨噬細胞內。肺組織內，PRRSV陽性信號主要出現在巨噬細胞和Ⅱ型肺泡上皮細胞細胞質內。分析認為PCV2和PRRSV侵入豬體，分別進入不同的巨噬細胞內定居增殖，由于大量的巨噬細胞受侵害，致使機體免疫系統功能下降不能形成有效的保護機制，導致機體免疫抑制的產生[5-8]。

在腸道內檢測到PCV2和PRRSV的報道早就出現[4，5]。該試驗結果發現PCV2分布在腸腺杯狀細胞，而PRRSV分布在腸腺潘氏細胞、上皮細胞內，在淋巴小結不同的巨噬細胞細胞質內分別檢測到PCV2和PRRSV，由此可以證實病毒經腸道排毒，除了肺和淋巴結外，對腸道組織進行IHC檢測也可作為確診PCV2-PRRSV混合感染的方法之一。

參考文獻：

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（責任編輯 屠 晶）