病證結(jié)合思維對細胞推拿模型構(gòu)建的啟發(fā)

摘要：從推拿學(xué)科在細胞水平研究的缺陷、目前細胞推拿模型構(gòu)建的必要性及存在缺陷，研究可借鑒病證結(jié)合血瘀證血管內(nèi)皮損傷模型，認為細胞推拿模型的研究中應(yīng)該體現(xiàn)“病”“證”結(jié)合的特點，這一模型是當(dāng)前中醫(yī)手法科研所急需的，有助為中醫(yī)證候模型研究及推拿學(xué)科的發(fā)展提供有益探索。

關(guān)鍵詞：病證結(jié)合細胞推拿模型

【中圖分類號】R224.1【文獻標識碼】B【文章編號】1008-1879（2012）11-0069-02

1“病證結(jié)合”的細胞推拿模型是當(dāng)前中醫(yī)手法科研所急需的

推拿的良好療效已在全世界引起廣泛關(guān)注，但在西方，推拿仍以補充醫(yī)學(xué)形式出現(xiàn)，其功效還未被普遍接受，這與其作用機理尚未闡明有關(guān)，目前推拿治療多著眼于軟組織、骨關(guān)節(jié)、神經(jīng)等層面，這些研究畢竟屬于宏觀研究，缺少微觀的探討，給臨床、教學(xué)、科研帶來諸多不便，嚴重制約推拿的發(fā)展，這是目前推拿學(xué)科存在的致命弱點。其中手法在細胞等微觀層面的模型研發(fā)明顯滯后。

在自然科學(xué)中，可說只要涉及到生物體的研究，都無一例外的要設(shè)計、使用模型。在國外每年都有大量模型用于科學(xué)實驗。我國在模型研用上遠遠落后于國外。特別是中醫(yī)病、證模型的研制更是滯后，明顯地制約中醫(yī)學(xué)發(fā)展[1]，推拿治病模型的研制也不例外。到目前為止，如何建立符合中醫(yī)理論的，能夠完全替代臨床的符合“病證結(jié)合”的疾病推拿模型仍然是一個難題。基于單細胞分析的細胞組學(xué)研究給這一難題的解決帶來了轉(zhuǎn)機，模擬臨床疾病建立起來的細胞模型可以反映生命活動最小單位的活細胞水平[2]。因此積極開展細胞模型研究將大大拓展疾病推拿模型的研究領(lǐng)域。因此從微觀角度建立一種符合推拿學(xué)科的細胞力學(xué)模型就顯得尤為重要，這一模型的要求既要符合中醫(yī)“證”的特點，又要符合“病”的特點，對手法臨床的發(fā)展意義重大[3]。

2建立模型的必要性

2.1動物模型的不足及中醫(yī)證候模型忽略了“病證結(jié)合”。推拿治療疾病過程中模型的制備必不可少，有著眼于軟組織、骨關(guān)節(jié)等宏觀層面的模型，也有著眼于細胞等微觀層面的模型。就動物模型而言，其先天不足在于醫(yī)學(xué)研究的對象在人類本身，其所得結(jié)論最終適用于解決人類本身問題[1]，并非鼠、兔、狗。如果完全將西醫(yī)的實驗醫(yī)學(xué)模式套在中醫(yī)身上，讓中醫(yī)理論在動物身上得到證實和認可，并由此揭示其本質(zhì)思路是不現(xiàn)實的。比如把一個病人的癥狀和體征完完全全地復(fù)制到動物身上，是根本不可能辦到的，因為人的生理病理、情感等完全不同。以椎動脈型頸椎病血瘀證大鼠模型為例，在大鼠體表所建之血瘀證模型，到底是人體血瘀證模型呢？還是大鼠血瘀證模型，畢竟大鼠身上不能體現(xiàn)中醫(yī)的四診，聞、問、切診的內(nèi)容全沒了，只剩下大鼠體表形態(tài)。因此推拿中運用的證候動物模型多存在造模特異性差，缺乏對模型的辨證分型。

2.2目前動物模型存在的問題：有學(xué)者[4]以頸椎旁硬化劑注射法造成家兔椎動脈型頸椎病血瘀證模型作為病證結(jié)合動物模型，然后運用推拿手法對此模型進行干預(yù)。但是這一模型也存在不少缺點，眾所周知：血瘀證是一個慢性過程，而幾天時間的造模是否能反映血瘀證值得懷疑。目前血瘀證實驗動物模型評判標準很少對模型動物細致觀察，而僅以實驗室指標，如血粘度、血液流變學(xué)為依據(jù)，其說服力是不夠，中醫(yī)特色不強。第二，造模因素過于簡單：目前血瘀證動物模型多是單一因素造模，導(dǎo)致血瘀證的原因很多，如外邪、內(nèi)傷、出血等原因，血瘀通常是各種因素長期相互作用的結(jié)果，因此單一因素造模難以反映血瘀證的病因病機。第三，缺少病證結(jié)合的模型：大多數(shù)血瘀證的動物模型是根據(jù)中醫(yī)血瘀證的病因病機或西醫(yī)學(xué)的血瘀病理生理改變而建立的[1]。第四造模缺少量化標準等。

3模擬推拿力學(xué)刺激對對細胞模型的干預(yù)

推拿手法本質(zhì)是一種機械力，機械力對細胞生物學(xué)行為的影響是目前國際上細胞生物學(xué)領(lǐng)域研究的一個重要課題，將其引入推拿學(xué)領(lǐng)域具有重要意義，當(dāng)手法作用于體表后必然對組織內(nèi)的細胞產(chǎn)生機械刺激，進而激發(fā)細胞活性，并將物理性質(zhì)的力學(xué)信號轉(zhuǎn)換為生物性質(zhì)的化學(xué)信號，引發(fā)其生物學(xué)效應(yīng)，這可能是按摩發(fā)揮治病作用的細胞生物力學(xué)原理之一。研究表明血管內(nèi)皮細胞在機械力的刺激下會引起Ca2+的內(nèi)流，從而促發(fā)一系列生化反應(yīng)[5]。也有學(xué)者提出：“活血化瘀”的細胞學(xué)機制和細胞內(nèi)鈣離子變化有關(guān)[6]。因此從細胞學(xué)領(lǐng)域研究揭示手法的活血化瘀功效意義重大。目前常采用體外壓力刺激來模擬體外推拿（一維力學(xué)手法），作為機械力之一壓力刺激對細胞的生物學(xué)行為起重要的調(diào)節(jié)作用[7]。在壓力作用下細胞往往受到刺激誘發(fā)鈣離子內(nèi)流增加、NO合成增加等[8]。

目前細胞推拿模型的特點及不足：對于細胞模型而言，許多人也進行積極探討，如馬惠昇等[9]通過推拿對血管內(nèi)皮細胞進行干預(yù)構(gòu)建了力學(xué)加載模型，陳波等[10]對SD大鼠分別進行膝關(guān)節(jié)以下外側(cè)皮下組織塊取樣，利用模擬體外推拿對筋膜組織細胞進行干預(yù)構(gòu)建一維力學(xué)加載模型，張宏等[11]采用細胞培養(yǎng)技術(shù)，建立骨骼肌細胞損傷模型，然后利用體外推拿進行干預(yù)也實現(xiàn)了力學(xué)加載模型。這三個模型都成功建立了細胞力學(xué)加載模型，但是都無一例外存在一個缺點，只是單純的模擬了推拿對細胞模型的干預(yù)，都沒有體現(xiàn)出中醫(yī)學(xué)理論，尤其是“病證結(jié)合”的特點，同樣是缺乏對模型的辨證分型。目前我們在研制符合疾病推拿的各種模型的時候，往往過分強調(diào)中醫(yī)模型“病”的建立，而忽略了與中醫(yī)“證”的結(jié)合。這將嚴重阻礙模型的研究工作，其研究成果也很難為推拿臨床服務(wù)。

4病證結(jié)合血瘀證血管內(nèi)皮損傷模型對病證結(jié)合細胞推拿模型的指導(dǎo)意義

既往筆者的導(dǎo)師陳利國教授成功構(gòu)建病證結(jié)合血瘀證血管內(nèi)皮損傷模型[1]，用20%濃度的高血壓病血瘀證患者血清培養(yǎng)液作用于正常培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞株（ECV一304），培養(yǎng)24h后觀察細胞活性及功能的變化，然后運用具有活血化瘀或補氣的中藥進行干預(yù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)中藥對高血壓病血瘀證患者血清作用的細胞有著明顯的保護作用，這一發(fā)現(xiàn)為我們建立病證結(jié)合細胞推拿模型提供了方法學(xué)上的借鑒。

這些均強烈的暗示著，我們以人臍靜脈內(nèi)皮細胞株為實驗材料，以高血壓病或者椎動脈型頸椎病血瘀證患者血清為干預(yù)因素，建立在模擬推拿力學(xué)刺激下的高血壓病或者椎動脈型頸椎病血瘀證血管內(nèi)皮損傷模型完全可以取代當(dāng)前的一些動物或細胞推拿模型，既有利符合中醫(yī)自然發(fā)病因素，體現(xiàn)“病”“證”結(jié)合特點，又較為接近人類疾病的實際情況。無需對病因模擬，避免造模因素單一的缺點，對傳統(tǒng)意義推拿治療疾病的模型帶來全新借鑒，為推拿“活血化瘀”“扶正祛邪”的中醫(yī)機制提供細胞生物力學(xué)的實驗依據(jù)。

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