糖化血紅蛋白檢測(cè)及臨床意義

摘要：糖化血紅蛋白（HbA1C）是用于糖尿病評(píng)價(jià)治療方案有效性的金標(biāo)準(zhǔn)。并因HbA1C還是反應(yīng)長(zhǎng)期血糖變化的穩(wěn)定指標(biāo)而成為目前診斷糖尿病研究的熱點(diǎn)。這個(gè)反映長(zhǎng)期血糖控制狀況的金標(biāo)準(zhǔn)和糖尿病的重要手段，可以在臨床上更好地應(yīng)用指導(dǎo)糖尿病的治療。

關(guān)鍵詞：糖化血紅蛋白臨床檢測(cè)

【中圖分類號(hào)】R4【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1008-1879（2012）11-0134-02

糖化血紅蛋白HbA1c作為糖尿病篩選、診斷、血糖控制、療效考核的有效檢測(cè)指標(biāo)，在臨床中得到了廣泛的使用，其理由有二個(gè)：目前HPLC法測(cè)定HbA1c使其準(zhǔn)確性和重復(fù)性得到很大的提目前，糖化血紅蛋白HbA1c作為糖尿病篩選、診斷、血糖控制、療效考核的有效檢測(cè)指標(biāo)，在臨床中得到了廣泛的使用。

1HbA1C概述

在HbA1C與糖尿病關(guān)系的研究中，Rahbar在1968～1969年的研究中發(fā)現(xiàn)快速泳動(dòng)的Hb實(shí)際上與HbA1C的結(jié)構(gòu)相同，在糖尿病患者中其濃度增加2～3倍。從而確定了HbA1C與糖尿病之間的初步關(guān)系并在以后的臨床研究中證實(shí)了HbA1C可作為糖尿病患者長(zhǎng)期血糖控制的指標(biāo)，這與糖尿病慢性并發(fā)癥的發(fā)生及發(fā)展有密切關(guān)系。HbA1C與空腹血糖、過(guò)去數(shù)周的平均血糖水平等有關(guān)。正常人維持一定的血糖水平，就會(huì)形成正常范圍內(nèi)的HbA1C，當(dāng)血糖濃度增加時(shí)，其β鏈上的糖基化位點(diǎn)數(shù)目也增加，據(jù)此HbA1C是判斷血糖控制程度的很好的指標(biāo)。

糖化血紅蛋白是紅細(xì)胞中血紅蛋白與葡萄糖持續(xù)且不可逆地進(jìn)行非酶促蛋白糖基化反應(yīng)的產(chǎn)物。其壽命與紅細(xì)胞一致。人體內(nèi)紅細(xì)胞的壽命一般為120天，在紅細(xì)胞死亡前，血中HbA1C含量也會(huì)保持相對(duì)恒定。因此，HbA1C水平反映的是檢測(cè)前120天內(nèi)的平均血糖水平。與采血時(shí)間、是否空腹及使用胰島素等無(wú)關(guān)，是判斷糖尿病患者長(zhǎng)期血糖控制好壞的重要指標(biāo)。

2診斷糖尿病檢測(cè)指標(biāo)的比較

2.1血糖有波動(dòng)性、瞬間性特點(diǎn)，反映的是某一點(diǎn)（測(cè)定當(dāng)時(shí)）的血糖水平，變異率高、重現(xiàn)性差，不能反映患者全天血糖變化情況，是糖尿病微觀控制的指標(biāo)。

2.2糖化血清蛋白（GSP）/糖化白蛋白（GSA）半衰期較短（1～3周），只能評(píng)價(jià)近期血糖控制水平，且血液蛋白質(zhì)濃度發(fā)生變化時(shí)其測(cè)定結(jié)果受影響。

2.3HbA1C檢測(cè)便捷、標(biāo)本采集方便，不需空腹，可在任意時(shí)間采集并保持相對(duì)穩(wěn)定，變異率低，個(gè)體內(nèi)日間差<2%。測(cè)定反映的是過(guò)去2～3個(gè)月血糖平均水平，是糖尿病控制的宏觀指標(biāo)。

2.4HbA1C與糖尿病并發(fā)癥（如微血管病變、大血管病變、死亡）有關(guān)，而HbA1C降低可以明顯改善糖尿病并發(fā)癥發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。因此，HbA1C是反映糖尿病患者血糖長(zhǎng)期控制水平的金標(biāo)準(zhǔn)。

3糖尿病的臨床檢測(cè)方法

由于HbA1C在檢測(cè)前不穩(wěn)定性很小，生物變異率低，是一項(xiàng)更穩(wěn)定的生物學(xué)指標(biāo)，臨床廣泛采用診斷糖尿病。測(cè)定GHb主要是利用GHb和Hb的物理化學(xué)性質(zhì)的不同而進(jìn)行的，目前主要的檢測(cè)方法有5種：

3.1離子交換高效液相色譜分析法。基于Hbb鏈N末端纈氨酸糖化后所帶電荷不同而建立。在中性pH條件下，HbA1c攜帶的正電荷相對(duì)較少，因此可通過(guò)HPLC法將其與其它組分區(qū)分開，得到分離。此方法曾應(yīng)用于美國(guó)DCCT的研究，是目前檢測(cè)HbA1c的金標(biāo)準(zhǔn)。

3.2微柱法。微柱內(nèi)的陽(yáng)離子交換樹脂（如Biorex 70）在PH近7時(shí)解離后帶陰電荷，而Hb解離后帶陽(yáng)電荷，二者可形成離子鍵。由于GHb的陽(yáng)電荷比HbA少，與樹脂的結(jié)合力相對(duì)低，容易被洗脫。用分光光度計(jì)分別測(cè)定洗脫液中GHb和溶血物中總Hb的吸光率（A），可計(jì)算出GHb占總Hb的百分比（%）。但此方法的影響影響因素比較多：

（1）洗脫溫度對(duì)結(jié)果有較大影響。

（2）抗凝劑肝素能使測(cè)定結(jié)果增高。

（3）某些血紅蛋白如HbF異常增加時(shí)，也會(huì)與糖化血紅蛋白同時(shí)洗脫，從而使結(jié)果產(chǎn)生偏差。

3.3電泳法。膠體顆粒在一定條件下可以帶有電荷，帶有電荷的膠體顆粒可以借靜電吸引力在電場(chǎng)中泳行，帶正電荷者泳向負(fù)極，帶負(fù)電荷者泳向正極，此種現(xiàn)象稱為電泳。血清中各種蛋白質(zhì)都有它特有的等電點(diǎn)，各種蛋白質(zhì)在各自的等電點(diǎn)時(shí)呈中性狀態(tài)，它的分子所帶正電荷與所帶負(fù)電荷量相等。但此方法學(xué)的弱點(diǎn)是：

（1）需成批進(jìn)行樣本分析，速度比較慢，無(wú)法進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)。

（2）自動(dòng)化程度低，急診插入、自動(dòng)維護(hù)等功能比較欠缺。

3.4親和層析法。利用生物高分子能與相應(yīng)的專一配基分子可逆結(jié)合的原理將配基通過(guò)共價(jià)鍵牢固地結(jié)合于固相載體上制得親和吸附系統(tǒng)。帶有雜質(zhì)的高分子分離目的物在一定條件下，能以某種次級(jí)鍵與已固相化的配基結(jié)合，而雜質(zhì)則不吸附，除去雜質(zhì)后變換條件，又可以使待分離的高分子物質(zhì)重新解離，獲得純化。

除葡萄糖外，血液中所有的糖類都可與Hb相結(jié)合，因此該方法的檢測(cè)結(jié)果為糖化血紅蛋白總量，而不是HbA1c的含量。

3.5免疫法。使用單克隆或多克隆抗體直接測(cè)定血紅蛋白β-鏈上糖基化的N末端的4～8個(gè)氨基酸，因此對(duì)HbA1C上的糖基特異性好。

但是許多同源的糖化血紅蛋白變體也有相同的N末端結(jié)構(gòu)，從而會(huì)對(duì)結(jié)果造成干擾。在定標(biāo)方面，需與HPLC作相關(guān)校正。

綜合現(xiàn)在臨床實(shí)驗(yàn)室中常用的GHb測(cè)定方法，因?yàn)樵淼牟煌瑴y(cè)定的結(jié)果準(zhǔn)確度、重復(fù)性都有所差異。相信隨著對(duì)HbA1c實(shí)驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)化的重視和提高，HbA1c項(xiàng)目的檢測(cè)在臨床會(huì)得到越來(lái)越多的應(yīng)用。

4HbA1C檢測(cè)的質(zhì)量保證

4.1制定標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃，參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)，使用經(jīng)過(guò)認(rèn)證的方法（儀器）并進(jìn)行精密度、準(zhǔn)確度及線性范圍評(píng)價(jià)。

4.2檢測(cè)人員具有相應(yīng)的專業(yè)任職資格，并經(jīng)生物安全培訓(xùn)，定期業(yè)務(wù)學(xué)習(xí)，所用儀器、試劑應(yīng)符合要求。

4.3做好室內(nèi)質(zhì)量控制，嚴(yán)格按室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程執(zhí)行。

4.4編寫HbA1C檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，并按規(guī)程操作。

4.5完善各種相關(guān)記錄。

綜上所述，我們只要嚴(yán)格按照要求去做，HbA1C的檢測(cè)質(zhì)量才會(huì)提高，才會(huì)得到更好地結(jié)果，才能更好地服務(wù)于臨床和患者。