Rh(D)陰性獻血者資料庫的建立及其構成狀況調查

盧海燕，姜利軍

(懷化市中心血站，湖南懷化418000)

Rh血型系統是人類最復雜的血型系統，也是輸血醫學最主要的血型系統之一，在世界人口比例中屬Rh(D)陰性血型人只占0.3%左右，在中國漢族人群中占0.2% ～0.5%［1-2］。因Rh(D)陰性比例低，常規備血相當困難，近年來雖然有些地方采用了紅細胞冰凍技術，但在實際應用中所起的作用十分有限，所以建立起一支稀有血型獻血者隊伍顯得尤為重要。為豐富本站的Rh(D)陰性血液，以滿足臨床的需求，近年來，本站加大對Rh(D)陰性獻血者的篩查工作，建立了一支Rh(D)陰性獻血者隊伍和稀有血型血庫。近期我們對該資料庫的構成狀況進行了調查。

材料和方法

一、標本來源

1998年5月1日～2011年12月31湖南省懷化市無償獻血者136 887名，年齡18～55歲，身體健康檢查均符合《獻血者健康檢查要求》［3］。

二、標本采集

獻血者留取2.5 mL血樣本，肝素抗凝，并且在每個標本上貼條形碼標簽，備用。

三、試劑

IgM抗-D血清購自加拿大DBL公司，IgM 抗-C、抗-c、抗-E、抗-e單克隆抗體購自英國Serolgicai Ltd公司、德國Biotest公司;抗人球蛋白試劑購自上海血液生物制藥有限責任公司、加拿大DBL公司;篩選紅細胞由上海血液生物制藥有限公司生產;凝聚胺試劑購自合肥天一生物技術研究所;IgM+IgG抗-D血清購自加拿大DBL公司及Dominion Biologicals Limited公司。

四、Rh血型系統表型的檢測

參照《全國臨床檢驗操作規程》［4］(血型血清學部分)進行。

1.初篩試驗 IgM抗-D血清，由檢驗科采用平板法進行初篩，按照試劑說明書操作，結果可疑者用試管法確認，初篩陰性標本送血型參比室進行確認試驗。

2.確認試驗 初篩陰性標本采用2個不同廠家IgM+IgG抗-D血清，用間接人球蛋白試驗進行確認，經初篩和確認均為陰性的標本為Rh(D)陰性，初篩試驗為陰性而確認中有1個或1個以上試劑檢測為陽性的標本定為弱D。

3.Rh表型篩選 采用IgM 抗-C、抗-c、抗-E、抗-e單克隆抗體試管法進行篩選，凝集為陽性，不凝集為陰性。

4.不規則抗體篩選 采用凝聚胺法和抗人球蛋白法，均按試劑說明書操作。陰性結果用排除法，陽性結果用可能包含法，根據獻血者血清與篩檢紅細胞反應格局，初步判斷獻血者血清中可能出現的抗體，再用譜細胞做鑒定試驗。

5.Rh(D)陰性獻血者資料庫的建立 將篩出的Rh(D)陰性獻血者，分別建立以ABO血型、人口來源、性別、年齡、民族、聯系電話、獻血證件及出生年月日等資料為主的檔案，然后匯總所有Rh(D)陰性獻血者的檔案，即形成Rh(D)陰性獻血者資料庫。

6.Rh(D)陰性獻血者資料庫的構成狀況調查 將資料庫中的Rh(D)陰性獻血者分別按ABO血型、性別、人口來源、年齡及民族分類，分別統計各類中的A型、B型、AB型及O型Rh(D)陰性獻血者的例數。

五、統計學方法

采用SPSS13.0統計軟件進行χ2檢驗。

結 果

一、在136 887名無償獻血者中共篩選出Rh(D)陰性獻血者 340名(0.25%)、弱 D 2名(0.005%)、不規則抗體1名(0.002%)。按ABO血型分為 A型 99名(29.1%)、B型 86名(25.3%)、O 型 124名(36.4%)、AB型 31名(9.2%)。

二、340名Rh(D)陰性者的表現型與基因型的分布情況見表1。340名Rh(D)陰性表現型的頻率ccdee最高，占49.7%，其次為Ccdee，其他依次為CCdee＞ccdEe＞CcdEe＞CCdEe＞ccdEE。

表1 340名Rh(D)陰性者的表現型與基因型分布

三、無償獻血者弱D抗原是D抗原量的變化，即每個RBC上正常D抗原表位是完整的，只是表達弱，RBC上抗原點單純性減少，不能被IgM抗-D凝集，但在IgG抗-D的抗球蛋白試驗中有凝集。本資料庫中A型CcDuee 1例、B型CcDuEE1例。

四、資料庫中的Rh(D)陰性獻血者按性別分類，男性及女性Rh(D)陰性獻血者的例數及其ABO血型分布見表2。

表2 Rh(D)陰性獻血者的男、女例數及其ABO血型分布

五、資料庫中的Rh(D)陰性獻血者按人口來源分類，常住人口及流動人口的Rh(D)陰性獻血者的例數及其ABO血型分布見表3。

六、資料庫中的Rh(D)陰性獻血者按年齡分類，不同年齡的Rh(D)陰性獻血者的例數及其ABO血型分布見表4。

表3 常住及流動人口的Rh(D)陰性者例數及ABC血型分布

七、資料庫中的Rh(D)陰性獻血者按民族分類，不同民族的Rh(D)陰性獻血者的例數及其ABO血型分布見表5。

表4 不同年齡的Rh(D)陰性獻血者例數及其ABO血型分布

表5 不同民族的Rh(D)陰性獻血者例數及ABO血型分布

討 論

Rh血型系統是僅次于ABO血型系統的第二大紅細胞血型系統，是最復雜的遺傳多態性血型系統之一。Rh系統內有45種不同的抗原，D抗原最為重要。根據紅細胞上D抗原的有無，可分類紅細胞為Rh陽性或Rh陰性。Rh系統主要抗原有C、c、E、e。Rh陰性個體經由輸血或懷孕接觸D抗原后，3個人中就有2個會產生抗-D抗體［5］。此抗體可引起輸入的 Rh陽性紅細胞破壞，若不經免疫球蛋白預防，抗-D將成為最常見的嚴重的新生兒溶血病抗體。在懷孕期間，IgG類抗-D能通過胎盤影響Rh陽性胎兒，引起新生兒溶血病［6］。

本研究結果顯示，Rh(D)陰性者在本血站的獻血者中的分布頻率較低，僅為0.25%。在表型分析中可見表型ccdee最多見，ccdEE、CcdEe和CCdEe表型在ABO各型中分布較罕見，表型分析中未發現CCdEE和CcdEE表型，符合Rh血型系統在血清學有復雜表現及表型頻率嚴重不平衡的特點［7］。如遇到臨床急需時，無法供應或供應難度大。另外，弱D或不完全D及已產生不規則抗體者的存在，提醒我們在輸血時要給這些人群輸入Rh(D)陰性的血液，并要配型成功。已產生抗體者，以后不宜再獻血，如果需要輸血時，一定要輸入Rh(D)陰性血液［8］。我們于2002年開始，從廣泛的獻血者中篩查Rh(D)陰性獻血者，并對篩出的Rh(D)陰性獻血者分別建立檔案，然后根據Rh分型結果、血型抗體檢測結果、血型分布和獻血史等情況輸入計算機管理系統，形成Rh(D)陰性獻血者資料庫，滿足臨床供血者、受血者間Rh、ABO血型系統各種不同相適度的快速、準確、詳細的優選檢索。由此可見，建立Rh(D)陰性獻血者資料庫，是滿足臨床對Rh(D)陰性血液需求的首要保證。

通過對Rh(D)陰性獻血者資料庫的構成狀況調查發現:(1)資料庫中的Rh(D)陰性獻血者，年齡在18～42歲之間的例數較多，占278名(81.76%)，這種狀況有利于豐富Rh(D)陰性血液的來源;(2)資料庫中的Rh(D)陰性獻血者的民族分布不平衡，漢族人口較多，其他民族人口較少，這種狀況對Rh(D)陰性血液的來源影響不大;(3)資料庫中的Rh(D)陰性獻血者的ABO血型有些偏型、屬流動人口較多及有2名年齡偏大已不適合獻血。這種狀況將影響Rh(D)陰性血液的來源，日久將導致無法滿足臨床對Rh(D)陰性血液的需求。針對資料庫中存在的不利狀況，我們認為，為能夠做到長期滿足臨床對Rh(D)陰性血液的需求應做到:(1)必須加強Rh(D)陰性獻血者的隊伍建設，使原來稀少且較分散的血源相對集中起來，便于在急需時能做到及時、準確、便捷的查找;(2)僅僅建立檔案是遠遠不夠的，如果沒有自愿獻血者，在急需用血時不能做到隨叫隨到，那么前面的工作將是徒勞的。這就要求在宣傳和動員方面下功夫，可以成立Rh(D)陰性獻血者愛心之家，定期舉辦聯誼會，并通過Rh(D)陰性獻血者之間開展互助、獻愛心的活動，調動大家參加無償獻血的積極性，保證了志愿者隊伍的長期穩定性，使他們深切了解獻血的知識和意義，同時加強血站與獻血者之間的溝通，便于今后工作的開展;(3)建立冷凍血庫，積極推廣低溫保存技術［9-10］，做好罕見表型血液的保存工作，以備急時所用;(4)血站要為臨床輸血提供科學依據，更好地指導各大醫院臨床Rh(D)陰性血的正確輸注，幫助和督促臨床醫生嚴格掌握輸血適應證，做到科學、合理用血，避免不必要的輸血，可輸可不輸的血盡可能不輸。因Rh(D)陰性血稀有珍貴，建議有條件的患者要進行貯存式、稀釋式或回收式自身輸血［11-12］，這是解決稀有血型輸血的重要途徑之一。做好這些工作，血站一定能夠做好長期滿足臨床對Rh(D)陰性血液的需求，從而保障Rh(D)陰性患者的輸血安全。

［1］ 江清華，李 鑫，蔡于旭，等.海南地區Rh(D)陰性血型資料庫的建立與臨床應用［J］.中國輸血雜志，2007，20(3):222.

［2］劉嫦瑛，謝 波，陳春平，等.咸陽市Rh D陰性獻血者的篩查與管理［J］.中國輸血雜志，2007，20(3):223-224.

［3］中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局.獻血者健康檢查要求［S］.GB18467-2001，中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局，2001.

［4］葉應嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規程［M］.第3版.南京:東南大學出版社，2006:249-251.

［5］王 晨，陳和平，岳丹琪，等.上海地區人群中部分稀有血型篩選［J］.檢驗醫學，2007，22(5):583-584.

［6］孫光偉，王厚照.Rh血型系列抗原檢測在輸血中的應用［J］.檢驗醫學與臨床，2010，7(19):2123-2124.

［7］Denise MH.Modern blood banking and transfusion practice［M］.3rd edition.Philadephia:F.A.DAVIS Company，1994:3-13.

［8］蘭炯采，魏亞明，張印則，等.Rh陰性患者的科學安全輸血［J］.中國輸血雜志，2008，21(2):84.

［9］許德義，趙寧江，杜 勇，等.紅細胞的低溫冷凍保存及臨床意義［J］.臨床輸血與檢驗，2004，6(3):182-184.

［10］張國清，楊玉發，彭麗珍，等.冰凍保存Rh陰性稀有血液方法的建立［J］.臨床和實驗醫學雜志，2007，6(5):22-23.

［11］Lecak J，Scott K，Young C，et al.Evaluation of red blood cells at-80 degrees C in excess of 10 years［J］.Transfusion，2004，44(9):1306-1313.

［12］龐桂芝，張趁利，婁白敏.新鄉地區Rh血型資料庫的建立與管理［J］.中國輸血雜志，2009，22(8):688-689.