病灶組織HPV、PCNA和nm23檢測在宮頸癌分型中的價值

周 靜 (新疆伊犁州婦幼保健院，新疆 伊犁 835000)

宮頸癌是比較常見的婦女惡性腫瘤之一，近年來該病在我國的發病率有增高趨勢，發病年齡日趨年輕化。按照癌細胞病理特點的分類，宮頸癌分為鱗狀細胞癌(80% ～90%)、腺癌(10%-15%)和其他腺鱗癌〔1〕。人乳頭瘤病毒(HPV)是一種球形DNA病毒，屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖。目前高危型(HR-HPV)持續感染被認為是宮頸癌的確切致病病毒〔2〕。增殖細胞核抗原(PCNA)大部分存在于增殖細胞的細胞核中，是細胞細胞合成期必不可少的因子，亦是增殖期特異性表達的核蛋白。nm23是第一個被發現的轉移抑制基因，其異常表達與多種腫瘤的轉移及預后相關〔3〕。本文將病灶組織HPV、PCNA和nm23檢測應用于宮頸癌分型。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇我院2009年4月至2012年4月手術切除宮頸癌的患者共184例。年齡61～77〔平均(65.6 ±4.8)〕歲。其中鱗狀細胞癌125例、腺癌43例和其他腺鱗癌16例。對照組30例為正常宮頸組織切片。所有病例手術切除前均未行放療及化療，樣本檢查前24 h內禁止性生活，3 d內無陰道內沖洗、上藥，檢查前不進行醋酸或碘液涂抹。

1.2 方法

1.2.1 HPV檢測方法

1.2.1.1 檢測材料 采用美國愛迪旺斯醫療科技有限責任公司生產的賽泰-細胞/組織HPV檢測試劑盒;常規試劑磷酸鹽緩沖液(PBS)、復染試劑等，來自本院病理研究室。

1.2.1.2 檢測方法 (1)取樣使用一次性宮頸脫落細胞采集器，將其放入宮頸口處，單方向旋轉4～5周以獲得足量的上皮細胞樣本，取出后放入樣本管中充分攪拌。(2)采用免疫組織化學檢測樣本管中子宮頸細胞核中濃度低于0.01 pg(10～12 g)的HPV殼蛋白的抗原，僅有一個被染色的細胞核呈紅色即可做出陽性診斷，具體實驗步驟按試劑盒說明書操作。

1.2.2 PCNA檢測方法

1.2.2.1 檢測材料 鏈霉親合素-復合物(SABC)試劑盒、鼠抗增殖細胞核抗原(PCNA)單克隆抗體、二氨基聯苯胺(DAB)顯色劑等均購自北京中杉金橋生物技術有限公司;常規試劑(PBS、復染試劑等)，來自本院病理研究室。

1.2.2.2 檢測方法 手術切除的病理組織樣本以甲醛(10%中性)固定、常規石蠟包埋，連續切片厚度在4～5 μm，再用脫臘和水化。以已知陽性片作為陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照，按試劑盒說明操作進行實驗，顯微鏡下觀察結果。PCNA以細胞核出現清晰的棕褐色為陽性表達。

1.2.3 nm23檢測方法

1.2.3.1 檢測材料 SABC試劑盒、nm23鼠抗單克隆抗體、DAB顯色劑等均購自北京中杉金橋生物技術有限公司;常規試劑(PBS、復染試劑等)，來自本院病理研究室。

1.2.3.2 檢測方法 手術切除的病理組織樣本以甲醛(10%中性)固定、常規石蠟包埋，連續切片厚度在4～5 μm，再用脫臘和水化。以已知陽性片作為陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照，按試劑盒說明操作進行實驗，顯微鏡下觀察結果。nm23蛋白以胞漿出現棕黃色為陽性表達。

1.3 評分方法 每張樣本切片由2名醫師雙盲觀測10個視野(×400)，陽性表達率用1 000個細胞中陽性細胞的百分數表示，采用雙評分半定量法分別對染色強度和陽性細胞百分比進行統計評分。

1.4 統計學方法 采用SSPS12.0軟件處理數據，計量資料用t檢驗。

2 結果

2.1 正常宮頸組織和宮頸癌鱗狀細胞癌、腺癌和其他宮頸癌的HPV表達差異 HPV在宮頸鱗癌、宮頸腺癌、其他宮頸癌患者陽性表達率分別為91.2%、93.4%、93.7%，與正常宮頸組織(6.3%)比較存在明顯差異(P＜0.05)。

2.2 正常宮頸組織和宮頸癌鱗狀細胞癌、腺癌和其他宮頸癌的PCNA表達差異 PCNA在宮頸鱗癌患者陽性表達率達84.80%，在宮頸腺癌患者達25.00%，在其他宮頸癌患者達18.75%，均高于正常宮頸組織(6.6%)(P＜0.05);此外，PCNA在宮頸鱗狀細胞癌中的陽性表達率與正常宮頸組織、腺癌和其他宮頸癌有明顯差異 (P＜0.05)。

2.3 正常宮頸組織和宮頸癌鱗狀細胞癌、腺癌和其他宮頸癌的nm23表達差 nm23在宮頸鱗癌、宮頸腺癌、其他宮頸癌患者陽性表達率分別為45.6%、41.8%、43.3%，與正常宮頸組織(76.7%)比較存在明顯差異(P＜0.05)。

3 討論

宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤，是鱗狀上皮內瘤由低度向高度發展，最后惡化到浸潤癌的復雜病理過程，癌基因的激活及抑癌基因的失活是細胞癌變的分子基礎，其發生與轉移與細胞增殖活性及某些基因突變有關〔4〕。宮頸癌多發生在25～40歲，每年新增病例50余萬，近年來該病有年輕化的趨勢〔5〕。按照癌細胞病理特點的分類，分為鱗狀細胞癌(80% ～90%)、腺癌(10%～15%)和其他腺鱗癌。宮頸癌分型與癌病變的分子標志物有很大的聯系，分析宮頸癌病理變化過程中分子標志物的臨床實驗參數將有助于更好地理解宮頸癌的病理變化過程，確診宮頸癌的分型，根據不同的宮頸癌分型臨床采取適合的治療方案，提高療效，降低死亡率。

HPV是一種雙鏈閉環小DNA病毒，屬于乳頭瘤病毒科，具有種屬特異性的嗜上皮生物特性。流行病學研究表明，HPV感染與宮頸癌的發生密切相關，現已知20余種與癌癥相關的HPV型別，根據HPV與宮頸癌病理變化程度的關系，可將HPV分為低危型和高危型兩種〔6〕。Feng等〔7〕認為HR-HPV持續感染是宮頸癌發生的必要條件和首要因素。本文研究顯示90%以上宮頸癌患者受HPV感染，故HPV檢測數據可用于確診是否患有宮頸癌。

PCNA是一種酸性核蛋白，在DNA復制中作為DNA多聚酶δ的輔助蛋白起著重要作用，不僅可用于檢測惡性腫瘤的增殖細胞有效標記物，還可用于評價腫瘤的增殖指數和生物學行為。其含量變化與細胞的增殖狀態密切相關，靜止期細胞含PCNA的量極少，G1后期細胞中的PCNA合成增加，S期達高峰，G2/M期明顯下降。因此PCNA含量可作為反映腫瘤細胞預后和增殖程度判斷性指標，檢測惡性腫瘤的增殖細胞有效標記物，并用于評價腫瘤的增殖指數和生物學行為〔8〕。本研究發現宮頸癌患者PCNA在宮頸鱗狀細胞癌中的陽性表達率達80%以上，與正常宮頸組織、腺癌和其他宮頸癌有明顯差異。故PCNA檢測數據可用于確診是否患有鱗狀細胞癌。

nm23基因可編碼產生二磷酸核苷激酶(NDPK)，NDPK的主要作用是通過促進微管聚合而參與G蛋白介導的磷脂酰肌醇信號傳遞途徑，參與細胞分裂紡錘體的形成，影響細胞的附著、粘連和活動，從而抑制癌變細胞的轉移和浸潤，故是一種與惡性腫瘤轉移相關的基因〔9〕。Marone等〔10〕認為nm23基因的臨床試驗參數與癌變細胞浸潤、轉移和惡化程度呈負相關，即組織癌變程度越高，則nm23實驗參數越低，利用這種關系可將nm23作為判斷治療和預后的臨床指標。本文研究也顯示nm23在宮頸癌組織中的陽性表達率明顯比正常宮頸組織低，該差異具有統計學意義，與上面提及的研究相符。故nm23基因的檢測數據可作為宮頸組織惡變的信號。

綜上所述，雖然病灶組織HPV、PCNA和nm23檢測用于宮頸癌分型的應用研究目前尚且還處于發展階段，HPV檢測數據可用于確診患者是否患有宮頸癌，而PCNA檢測數據可用于確診是否患有宮頸癌常見的類型鱗狀細胞癌，nm23檢測數據則可作為宮頸組織惡變的信號。

1 鄭巧榮，崔金全.宮頸上皮內瘤變及宮頸癌中 TS、PCNA的表達及其意義〔J〕.中國婦幼保健，2011;26(7):1083-5.

2 Pimple S，Muwonge R，Amin G，et al.Cytology versus HPV testing for the detection of high-grade cervical lesions in women found positive on visual inspection in Mumbai，India〔J〕.Int J Gynaecol Obstet，2010;108(3):236-9.

3 李榮麗，劉恩彤.nm23和p53在宮頸癌組織中的表達及意義〔J〕.中國醫藥導報，2009;6(18):7-8.

4 Mccarthy KS，Miller LS，Cox EB，et al.Correlation of biochemical and immuno-histochemical methods using monoclonal antireceptor antibodies〔J〕.Arch Lab Med，1985;109(6):716-21.

5 張露丹，劉玉玲.HPV L1殼蛋白聯合HPV分型檢測在宮頸癌篩查中的價值探討〔J〕.中國婦幼保健，2012;27(3):340-2.

6 包 穎，劉 明，朱金福，等.液基細胞學和高危型 HPV DNA檢測在宮頸癌篩查中的相關性〔J〕.中國實用醫藥，2012;7(18):60-1.

7 Feng J，Al-Abbadi MA，Bandyopadhyay S，et al.Significance of high-risk human papillomavirus DNA-positive atypical squamous cells of undetermined significance pap smears in perimenopausal and postmenopausal women〔J〕.Acta Cytol，2008;52(4):434-8.

8 Olivares D，Gisbert JP，Pajares JM，et al.Helicobacter pylori infection and gastric macosal epithelial cell apoptosis〔J〕.Rev Esp Enferm Dig，2005;97(7):505-20.

9 郭 晰.PCNA和nm23在宮頸癌中的表達及其臨床意義〔J〕.臨床醫藥實踐，2008;6(1):373-5.

10 Marone M，Scambia G，Ferrandina G，et al.Nm23 expression in endometrical and cervical cancer:inverse correlation with lymph node involvement and myometrial invasion〔J〕.Br J Cancer，1996;74(6):1063-8.