茸毛木藍根的化學成分研究

裘 璐， 梁 妍， 唐貴華， 苑春茂， 郝小燕*， 何紅平*

(1.貴陽醫學院藥學院，貴州貴陽 550004;2.中國科學院昆明植物研究所植物化學與西部植物資源持續利用國家重點實驗室，云南昆明 650201)

茸毛木藍Indigofera stachyoidesLindl.為豆科木藍屬植物，其根又名血人參、鐵刷子、山紅花、紅苦刺，為貴州省少數民族用藥。該植物廣泛分布于貴州中西部各苗鄉及云南、廣西等地。據記載［1］，血人參性溫，味微苦澀，有補氣攝血，滋陰補腎之功效，用于崩漏、跌打、風濕、肝硬化等。血人參也為化療藥輔助中藥芪膠升白膠囊的組成成分之一。然而，迄今為止，國內外學者僅報道了血人參地上部分及它的揮發性成分［2］。為更好地控制該藥材的質量，合理開發和利用該資源，完善芪膠升白膠囊的藥效學物質基礎研究，本實驗首次對血人參進行了系統的化學成分研究。現報道從中分離鑒定的7個化合物。

1 材料與儀器

1.1 材料 血人參，采自貴州六枝特區，經貴陽中醫學院陳德媛研究員鑒定為豆科木藍屬植物茸毛木藍Indigofera stachyoidesLindl.的根。

1.2 儀器與試劑 1D NMR用BRUKER AM－400和DRX－500型核磁共振儀測定，以TMS為內標;質譜用 VG Auto Spec－3000型及 Waters Autospec Premier P776型質譜儀測定;正相層析硅膠G(60～80目，300～400目)和高效薄層層析板(GF254)均為青島海洋化工廠生產;所用反相色譜硅膠C18(40～75 μm)為Fuji Silysia化學公司產品;凝膠色譜為Sephadex LH－20(GE Healthcare Bio－Xciences AB);用5%H2SO4乙醇溶液作為常規顯色試劑。

2 提取與分離

血人參干燥根10.0 kg，經粉碎成粗品后，用95%的乙醇回流提取3次(4 h，4 h，3 h)，合并提取液，回收乙醇得濃稠浸膏。用適量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取得3部分萃取物。其中，乙酸乙酯萃取物 (290 g)以粗硅膠(60～80目)1∶1拌樣，200～300目硅膠裝柱，三氯甲烷－甲醇 (95∶5→50∶50)梯度洗脫，分為8個組分 (A→H)。其中，組分C經反相柱層析(甲醇－水梯度洗脫)、反復硅膠柱層析 (三氯甲烷－丙酮－甲酸梯度洗脫)、凝膠色譜 Sephadex LH－20(甲醇－水洗脫)和重結晶純化，分離得到化合物1(200.0 mg)、2(11.6 mg)、3(9.4 mg)、4和 5(13.6 mg)、6和7(82.8 mg)。

3 結構鑒定

化合物1:白色針狀結晶 (MeOH)。ESI－MSm/z491 ［M －H］－。1H－NMR(500 MHz，pyridined5)δ:7.31(1H，d，J=1.3 Hz，H－2)，7.19(1H，d，J=8.1 Hz，H－5)，7.01(1H，dd，J=8.1，1.3 Hz，H－6)，4.56(1H，m，H－7)，2.38(1H，m，H－8)，4.22 ～ 4.29(1H，m，H－9a)，3.13(1H，dd，J=15.6，4.4 Hz，H－9b)，6.85(1H，s，H－2')，6.83(1H，s，H－5')，3.58～3.64(2H，m，H－7')，2.35 ～ 2.51(1H，m，H－8')，4.03 ～ 4.15(2H，m，H－9')，3.70(3H，s，3－OCH3)，3.77(3H，s，3'－OCH3)，4.62(1H，d，J=7.3 Hz，H－1″)，4.05(1H，m，H－2″)，4.12(1H，m，H－3″)，4.18 ～4.21(1H，m，H－4″)，4.58(1H，m，H－5″a)，3.33(1H，dd，J=16.0，11.4 Hz，H－5″b)。13C－NMR(125 MHz，pyridine－d5)δ:138.0(C－1)，114.4(C－2)，148.6(C－3)，146.5(C－4)，116.6(C－5)，122.6(C－6)，47.4(C－7)，45.5(C－8)，68.6(C－9)，128.2(C－1')，112.6(C－2')，147.0(C－3')，146.1(C－4')，118.0(C－5')，134.1(C－6')，33.9(C－7')，39.2(C－8')，64.3(C－9')，56.1(3－OCH3)，55.9(3'－OCH3)，106.1(C－1″)，75.2(C－2″)，78.6(C－3″)，71.2(C－4″)，67.3(C－5″)。波譜數據與文獻［3］報道的一致，故鑒定為schizandriside。

化合物2:白色針狀結晶 (MeOH)。ESI－MSm/z551［M －H］－.1H－NMR(500 MHz，CD3OD)δ:6.42(1H，s，H－2)，6.42(1H，s，H－6)，4.37(1H，d，J=6.6 Hz，H－7)，2.02 ～ 2.07(1H，m，H－8)，3.83(1H，m，H－9a)，3.41(1H，dd，J=9.6，3.7 Hz，H－9b)，6.56(1H，s，H－2')，2.71(1H，dd，J=15.5，4.5 Hz，H－7'a)，2.63(1H，dd，J=15.5，10.7 Hz，H－7'b)，1.66 ～ 1.73(1H，m，H－8')，3.64(1H，dd，J=10.8，4.1 Hz，H－9'a)，3.54(1H，dd，J=10.8，6.5 Hz，H－9'b)，3.74(3H，s，3－OCH3)，3.74(3H，s，5－OCH3)，3.84(3H，s，3'－OCH3)，3.31(3H，s，5'－OCH3)，4.21(1H，d，J=7.6 Hz，H－1″)，3.21(1H，m，H－2″)，3.27 ～ 3.29(1H，m，H－3″)，3.46 ～ 3.47(1H，ddd，J=10.4，9.5，5.6 Hz，H－4″)，3.82(1H，m，H－5″a)，3.17(1H，m，H－5″b)。13C－NMR(125 MHz，CD3OD)δ:139.4(C－1)，107.1(C－2)，149.0(C－3)，134.6(C－4)，149.0(C－5)，107.1(C－6)，43.0(C－7)，46.7(C－8)，71.1(C－9)，130.2(C－1')，107.9(C－2')，148.7(C－3')，139.0(C－4')，147.7(C－5')，126.4(C－6')，33.9(C－7')，40.6(C－8')，66.2(C－9')，56.9(3－OCH3)，56.9(5－OCH3)，56.7(3'－OCH3)，60.1(5'－OCH3)，105.5(C－1″)，75.0(C－2″)，78.0(C－3″)，71.3(C－4″)，67.0(C－5″)。波譜數據與文獻［3－4］報道的一致，故鑒定為lyoniside。

化合物3:淡黃色粉末 (MeOH)。ESI－MSm/z313 ［M+Na］+。1H－NMR(400 MHz，CD3OD)δ:4.81(1H，brs，H－2)，4.17(1H，dd，J=4.6，2.8 Hz，H－3)，2.85(1H，dd，J=16.8，4.6 Hz，H－4a)，2.75(1H，dd，J=16.8，2.8 Hz，H－4b)，5.93(1H，d，J=2.3 Hz，H－6)，5.90(1H，d，J=2.3 Hz，H－8)，6.96(1H，d，J=1.6 Hz，H－2')，6.75(1H，d，J=8.2 Hz，H－5')，6.79(1H，dd，J=8.2，1.6 Hz，H－6')。13C－NMR(100 MHz，CD3OD)δ:79.9(C－2)，67.5(C－3)，29.3(C－4)，157.7(C－5)，96.3(C－6)，158.0(C－7)，95.8(C－8)，157.4(C－9)，100.0(C－10)，132.3(C－1')，115.3(C－2')，145.8(C－3')，146.0(C－4')，119.4(C－5')，115.8(C－6')。波譜數據與文獻［5］報道的一致，故鑒定為表兒茶素［(－)－epicatechin］。

化合物4和5:白色結晶性粉末 (MeOH)。ESI－MSm/z:405 ［M+Na］+。1H－NMR(400 MHz，CD3OD)δ:α－端基異構體:5.22(1H，d，J=3.6 Hz，H－1)，3.52(1H，dd，J=10.9，7.5 Hz，H－2)，4.60(1H，dd，J=10.0，3.6 Hz，H－3)，3.87(1H，t，J=9.5 Hz，H－4)，3.99(1H，ddd，J=9.9，5.2，1.9 Hz，H－5)，4.42(1H，dd，J=11.9，2.0 Hz，H－6a)，4.26(1H，dd，J=11.9，5.4 Hz，H－6b)，3.08(4H，m，NO2CH2CH2COO－ × 2)，3.02(4H，m，NO2CH2CH2COO－× 2)，4.72(4H，m，NO2CH2CH2COO－ × 2);β－端基異構體:4.72(1H，m，H－1)，3.52(1H，dd，J=10.9，7.5 Hz，H－2)，4.60(1H，dd，J=10.0，3.6 Hz，H－3)，3.87(1H，t，J=9.5 Hz，H－4)，3.99(1H，ddd，J=9.9，5.2，1.9 Hz，H－5)，4.48(1H，dd，J=11.9，2.0 Hz，H－6a)，4.42(1H，dd，J=11.9，2.0 Hz，H－6b)，3.08(4H，m，NO2CH2CH2COO－×2)，3.02(4H，m，NO2CH2CH2COO－ × 2)，4.72(4H，m，NO2CH2CH2COO－ × 2)。13C－NMR(100 MHz，CD3OD)δ:α－端基異構體:91.1(C－1)，71.9(C－2)，75.9(C－3)，70.4(C－4)，71.8(C－5)，65.2(C－6)，171.7(NO2CH2CH2COO－3)，31.9(NO2CH2CH2COO－3)，70.8(NO2CH2CH2COO－3)，171.5(NO2CH2CH2COO－6)，31.8(NO2CH2CH2COO－2)，70.7(NO2CH2CH2COO－3);β－端基異構體:96.1(C－1)，75.3(C－2)，77.1(C－3)，71.6(C－4)，75.8(C－5)，65.2(C－6)，171.7(NO2CH2CH2COO－3)，31.9(NO2CH2CH2COO－3)，70.8(NO2CH2CH2COO－3)，171.5(NO2CH2CH2COO－6)，31.8(NO2CH2CH2COO－2)，70.7(NO2CH2CH2COO－3)。波譜數據與文獻［6］報道的一致，故鑒定為 3，6－二－O－(3－硝基丙酰基)－D－吡喃葡萄糖 α－和β－端基異構體混合物。

化合物6和7:白色結晶性粉末 (MeOH)。ESI－MSm/z405 ［M+Na］+。1H－NMR(400 MHz，CD3OD)δ:α－端基異構體:5.09(1H，d，J=3.2 Hz，H－1)，3.43(1H，dd，J=9.5，3.3 Hz，H－2)，4.68(1H，m，H－3)，3.54(1H，m，H－4)，4.14(1H，m，H－5)，4.14(1H，m，H－6a);4.26(1H，dd，J=11.9，6.0 Hz，H－6b)，3.20(4H，m，NO2CH2CH2COO－ × 2)，3.00(4H，m，NO2CH2CH2COO－ × 2)，4.68(4H，m，NO2CH2CH2COO－ ×2);β－端基異構體:4.50(1H，d，J=7.7 Hz，H－1)，3.43(1H，dd，J=9.5，3.3 Hz，H－2)，4.68(1H，m，H－3)，3.54(1H，m，H－4)，3.81(1H，m，H－5)，4.37(1H，m，H－6a)，4.14(1H，m，H－6b)，3.20(4H，m，NO2CH2CH2COO－ × 2)，3.00(4H，m，NO2CH2CH2COO－ × 2)，4.68(4H，m，NO2CH2CH2COO－ × 2)。13C－NMR(100 MHz，CD3OD)δ:α－端基異構體:93.9(C－1)，73.1(C－2)，72.6(C－3)，73.6(C－4)，68.2(C－5)，64.5(C－6)，171.5(NO2CH2CH2COO－4)，31.9(NO2CH2CH2COO－4)，70.8(NO2CH2CH2COO－4)，171.2(NO2CH2CH2COO－6)，31.8(NO2CH2CH2COO－6)，70.5(NO2CH2CH2COO－4);β－端基異構體:98.4(C－1)，76.2(C－2)，75.4(C－3)，72.4(C－4)，72.8(C－5)，64.4(C－6)，171.5(NO2CH2CH2COO－4)，31.9(NO2CH2CH2COO－4)，70.8(NO2CH2CH2COO－4)，171.2(NO2CH2CH2COO－6)，31.8(NO2CH2CH2COO－6)，70.5(NO2CH2CH2COO－4)。波譜數據與文獻［7］報道的一致，故鑒定為 4，6－二－O－(3－硝基丙酰基)－D－吡喃葡萄糖 α－和β－端基異構體混合物。

4 討論

化合物schizandriside(1)和lyoniside(2)為木脂素單糖苷類化合物，文獻［3］報道其均有較好清除與腫瘤有密切關系的自由基的作用。化合物(－)－epicatechin(3)為典型的黃烷醇類化合物，文獻［8］報道其是綠茶兒茶素類化合物 (GTC)的有效單體之一，不僅可以通過抑制抗癌藥外流而增強對癌細胞的殺傷作用，還不會增加抗癌藥的毒副作用，可以輔助化療、放療。因此，它們的發現可以一定程度上說明血人參在化療藥輔助中藥復方芪膠升白膠囊中可能發揮的作用，有利于完善芪膠升白膠囊的藥效學物質基礎。

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