石斛口服液制備工藝研究

徐應淑，周旭美，鄢韜

（遵義醫學院藥學院，貴州遵義563003）

金釵石斛為蘭科石斛屬多年生附生草本植物[1]，是我國傳統名貴中藥，研究表明其有抗衰老、抗腫瘤和增強機體免疫力等作用[2]。金釵石斛的藥用成分主要是多糖類物質[3]，是石斛中具有免疫增強作用和抗炎作用的活性成分[4]，結合文獻[5-6]中多糖含量的提取及測定方法，本課題選用貴州道地藥材赤水金釵石斛為原料以提取液中多糖的含量為指標，考察提取料液比、溫度、時間、次數等因素，找出最佳制備工藝，為金釵石斛的進一步開發和利用提供參考。

1 材料

1.1 試藥

金釵石斛：購自貴州赤水；D-無水葡萄糖對照品：中國藥品生物制品檢定所，批號：110833-200503；石油醚：天津市化學試劑一廠；苯酚：上海化學試劑廠；無水乙醇：重慶川東化工有限公司化學試劑廠；乙醚：天津市大茂化學試劑廠；濃硫酸：遵義市師范學院化學試劑廠；正丁醇：天津市致遠化學試劑有限公司；氯仿：成都市化工試劑廠；均為分析純。

1.2 儀器

TU-1900 雙光束紫外可見分光光度計：北京普析通用儀器有限責任公司；旋轉蒸發儀：上海亞榮生化儀器廠；電子分析天平：塞多利斯科學儀器有限公司。

2 方法與結果

2.1 葡萄糖對照品溶液的制備

精密稱取葡萄糖對照品0.100 0 g，置100 mL 容量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻，精密量取1 mL 置于100 mL容量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻，即得濃度為10 μg/mL的葡萄糖對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

取金釵石斛藥材粉末35.00 g，置圓燒瓶中，加石油醚（60 ℃～90 ℃）500 mL，加熱回流提取l h，過濾，揮干溶劑，濾渣用體積分數為80%的乙醇500 mL 回流提取1 h。趁熱過濾，揮干溶劑，濾渣加入蒸餾水500 mL 回流提取2 次，每次1 h，趁熱過濾，減壓濃縮至150 mL，用活性炭脫色，過濾，加入無水乙醇使溶液含醇體積分數為 ，靜置，過濾，得金釵石斛粗多糖。將粗多糖溶液經Sevage 法脫蛋白。再次醇沉，沉淀物依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，得多糖為白色粉末，取10 mg 用雙蒸水稀釋至100 mL 成供試品溶液。

2.3 測定波長的選擇

根據2010 版《中國藥典》一部附錄VA 分光光度法在波長490 nm 處測對照品及供試品的吸光度，結果表明照品及供試品在此波長處都有最大吸收。

2.4 標準曲線的制備

精密量取對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL，加蒸餾水使成2.0 mL，各加苯酚試劑1.0 mL，加入硫酸5.0 mL，置沸水浴中加熱15 min，冷卻至室溫。另以蒸餾水作為空白對照，在波長490 nm 處測吸光度。以吸光度（A）為縱坐標，檢測濃度（C）為橫坐標，得標準曲線，回歸方程為A＝0.006 7C+0.032（r＝0.995 8）。結果表明，葡萄糖檢測濃度在1 μg/mL～10 μg/mL 范圍內與吸光度呈良好線性關系。

2.5 穩定性試驗

精密量取供試品0.2 mL，按標準曲線2.5 步驟操作，將同一份反應液間隔一定時間測定吸光度值。實驗結果表明：樣品在24 h 內穩定性良好，RSD=1.76%。

2.6 精密度實驗

精密量取供試品0.2 mL，按標準曲線2.2.5 步驟操作，重復測定5 次，測定吸光度值。結果表明：精密度良好，RSD=1.84%。

2.7 重復性實驗

精密量取供試品0.2 mL，5 份，按標準曲線2.5 步驟操作，測定吸光度值。結果表明重復性良好，RSD=1.65%。

3 赤水金釵石斛口服液制備工藝研究

3.1 提取工藝優化

根據單因數預實驗結果及參考文獻選定影響石斛多糖提取率的4 個因素：料液比（A）、提取時間（B）、提取溫度（C）、提取次數（D），以石斛多糖提取率為指標，選用L9（34）正交進行試驗，優選出最佳提取工藝流程。結果見表1。

通過以上結果得出正交試驗優選出的方案：即赤水金釵石斛在料液比為1 ∶10（g/mL），浴加熱80 ℃，提取3 h，提取3 次，提取液濃縮至10 mL，測定赤水金釵石斛多糖的含量，得到赤水金釵石斛多糖的平均含量為4.32%，RSD=0.35%（n=3），顯示該方法穩定可行。

3.2 口服液的制備工藝考察

取赤水金釵石斛粉末40 g，根據最佳提取工藝條件，加400 mL 水，控制溫度80 ℃，提取3 次，每次3 h濾過，合并濾液，濃縮得樣品浸膏，平均分成4 份，分別加水至1 000 mL，混勻，分別煮沸0、10、20、30 min，放冷后冷藏48 h，離心濾過，灌裝，滅菌。結果未熱處理的出現渾濁，10 min 熱處理的有少量沉淀，20、30 min 熱處理的澄清。通過對滅菌后制劑中多糖含量進行測定，結果變化不大，說明多糖受溫度影響不明顯，熱處理冷藏法可以提高制劑的澄明度。考慮到省時節能，降低成本，采用熱處理20 min 配液較為合理。

表1 正交設計結果Table 1 Orthogonal experimental resnlts

4 結論

綜上，金釵石斛口服液的制備工藝為：以水為溶劑，料液比為1 ∶10（g/mL），浴加熱80 ℃，3 h，提取3次，濃縮得浸膏，加100 mL 蒸餾水，煮沸20 min 后放冷冷藏48 h，離心濾過，灌裝，滅菌即得。取20 個處方量的同批次藥材，分別按所選工藝進行試驗，制得口服液樣品，分別考察多糖含量及澄明度，均符合質量標準要求，說明該口服液制備工藝穩定、可行。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].2010年版.北京:中國醫藥科技出版社,2010:85-86

[2] 管志斌,李再林.珍稀名貴中藥一金釵石斛[J].中國野生植物資源2002,21(4):36-37

[3] CHEN Xiao-Mei,XIAO Sheng-yuan,GUO Shun-xing.Dendrobium candidum and Dendrobium nobile comparison of chemical composition [J].Chinese Academy of medical Sciences Sinica,2006,28 (4):524

[4] Zhao yapping Y,Son Yong-OKYO,Kim S,et al.Antioxidant and antihyperglycemic at-tivity of polysaccharide isolated from DendrobiumchrysotoxumLindl.[J].JBiechem MolBiol,2007,40(5):670-677

[5] 舒瑩,郭順星,陳曉梅,等.金釵石斛化學成分的研究[J].中國藥學雜志,2004,39(6):421-422

[6] 楊艷,徐應淑.川黔地區金釵石斛多糖的含量測定[J].中國藥房2010,27(21)2552-2554