豬肉中克倫特羅（瘦肉精）的檢測(cè)能力驗(yàn)證結(jié)果分析

張清智，王麗麗，牛增元，葉曦雯

（1.山東出入境檢驗(yàn)檢疫局，山東青島266002；2.青島市嶗山區(qū)北宅街道辦事處，山東青島266104）

克倫特羅屬于苯乙胺類藥物，能減緩或減少脂肪沉積，增加肌肉蛋白沉積，使?fàn)I養(yǎng)重新分配，從而顯著提高動(dòng)物的瘦肉率、增重和提高飼料轉(zhuǎn)化率[1-2]。長(zhǎng)期食用含有克倫特羅殘留的食品將對(duì)人體健康產(chǎn)生極大的危害，可誘發(fā)和加重心率失常病人的病情，引起心室早搏，四肢、臉、頸部骨骼肌震顫[3-4]。另外還引起代謝紊亂，對(duì)糖尿病人可發(fā)生酸中毒或酮中毒。給患者的精神、健康及正常生活工作造成嚴(yán)重危害[5-7]。

克倫特羅是食品安全和進(jìn)出口豬肉等動(dòng)物源食品中一個(gè)很重要的監(jiān)控項(xiàng)目，由于克倫特羅是禁用藥物，最低要求執(zhí)行限最新要求為0.05 μg/kg（痕量級(jí)），對(duì)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)能力和檢測(cè)手段要求高[8]。因此，開(kāi)展豬肉中克倫特羅的檢測(cè)能力驗(yàn)證對(duì)于了解和監(jiān)督國(guó)內(nèi)各檢測(cè)機(jī)構(gòu)對(duì)克倫特羅檢測(cè)方法的掌握程度以及檢驗(yàn)結(jié)果的可信度和可靠性都具有十分重要的意義。對(duì)于監(jiān)控各實(shí)驗(yàn)室的持續(xù)檢測(cè)能力，確認(rèn)其認(rèn)可項(xiàng)目的持續(xù)有效性具有極為重要的現(xiàn)實(shí)意義。

1 參加實(shí)驗(yàn)室概述

全國(guó)共有127 家實(shí)驗(yàn)室報(bào)名參加本次能力驗(yàn)證計(jì)劃，其中來(lái)自檢驗(yàn)檢疫系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室33 家，占總數(shù)的25.98%；各產(chǎn)品質(zhì)檢中心、質(zhì)檢院的實(shí)驗(yàn)室52 家，占總數(shù)的40.94%；其他政府實(shí)驗(yàn)室19 家，占總數(shù)的14.96%；企業(yè)及社會(huì)實(shí)驗(yàn)室23 家，占總數(shù)的18.11%。

2 樣品均勻性檢驗(yàn)和穩(wěn)定性檢驗(yàn)

2.1 均勻性檢驗(yàn)

依據(jù)CNAS-GL-03：2006《能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南》要求，將分裝好的樣品按隨機(jī)數(shù)表各隨機(jī)抽取10 份用于均勻性檢驗(yàn)。采用SN/T 1924-2011《進(jìn)出口動(dòng)物源食品中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林殘留量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》的測(cè)試方法對(duì)樣品中的克倫特羅含量進(jìn)行檢測(cè)[9]，每個(gè)樣品在重復(fù)性條件下按隨機(jī)次序測(cè)試2次。最終結(jié)果采用單因子方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

樣品間自由度為9，樣品內(nèi)自由度為10，在約定的自由度水平α=0.05 的顯著水平下，查表得F 臨界值F0.05(9，10)=3.02。計(jì)算樣品檢測(cè)結(jié)果的F 值均

2.2 穩(wěn)定性檢驗(yàn)

依據(jù)CNAS-GL03：2006《能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南》要求，隨機(jī)抽取6 個(gè)樣品，每個(gè)樣品獨(dú)立測(cè)定1 次。與t 臨界值t0.05(14)=1.761 相比較，計(jì)算得到的t 值均小于t 臨界值，這表明在α=0.05 顯著性水平時(shí)，樣品中克倫特羅含量是穩(wěn)定的。

3 統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)方法

本計(jì)劃采用穩(wěn)健（Robust）統(tǒng)計(jì)技術(shù)確定指定值和變動(dòng)性量度值（目標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)偏差），即采用穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)的中位值作為指定值，標(biāo)準(zhǔn)化四分位距（NIQR）作為變動(dòng)性度量值（目標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)偏差），計(jì)算各實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的Z 比分?jǐn)?shù)（Z 值）。

對(duì)參加實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果xi，按公式Z=（Xi-Xa）σ 轉(zhuǎn)化成Z 值，公式中xi代表各實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果，xa是指定值，σ 是能力評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)偏差。按Z 值的大小評(píng)價(jià)各實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)能力。

評(píng)價(jià)原則：|Z|≤2 為滿意結(jié)果；

2<|Z|<3 為存有問(wèn)題的結(jié)果（可疑值）；

|Z|≥3 為不滿意結(jié)果（離群值）。

4 測(cè)試結(jié)果的總體情況

本次能力驗(yàn)證共127 家實(shí)驗(yàn)室報(bào)名，第一次共回收126 家實(shí)驗(yàn)室的測(cè)試結(jié)果。滿意結(jié)果數(shù)為106 家，占結(jié)果總數(shù)的84.1%，可疑結(jié)果數(shù)為6 家，占結(jié)果總數(shù)的4.8%，不滿意結(jié)果14 家，占結(jié)果總數(shù)的11.1%。

5 技術(shù)分析與建議

5.1 采用不同檢測(cè)方法的差異

克倫特羅的檢測(cè)方法有液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC/MS/MS）、氣相色譜-質(zhì)譜法（GC/MS）、液相色譜法（HPLC）等[10]，可以滿足我國(guó)關(guān)于禁用藥物的法定檢測(cè)要求[11]；本次能力驗(yàn)證各參加實(shí)驗(yàn)室采用的檢測(cè)方法統(tǒng)計(jì)見(jiàn)表1。

表1 實(shí)驗(yàn)室采用的方法統(tǒng)計(jì)Table 1 Laboratory Used Statistical Method

5.2 是否采用酶解的差異

本次能力驗(yàn)證所用的豬肉樣品為實(shí)際陽(yáng)性樣品，克倫特羅藥物在豬體內(nèi)會(huì)代謝為克倫特羅葡萄糖苷酸[12-14]，組織中大部分以結(jié)合態(tài)形式存在，因而為準(zhǔn)確測(cè)量樣品中克倫特羅的含量，協(xié)調(diào)者在作業(yè)指導(dǎo)書(shū)中建議在前處理過(guò)程中須有水解步驟，也可以減少SPE凈化時(shí)堵塞柱子。在是否酶解這一步驟的操作上，共有19 家實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有選擇酶解，其中僅有一家實(shí)驗(yàn)室結(jié)果不滿意，可以看出在不堵塞SPE 凈化柱子的前提下，是否酶解對(duì)檢測(cè)豬肉中克倫特羅的含量影響不大。這也再次證實(shí)了苯胺型的β-受體激動(dòng)劑與組織結(jié)合不緊密，不酶解也可以，但不酶解樣品提取液易堵塞SPE 小柱，所以對(duì)克倫特羅仍建議酶解。

5.3 定量方法的差異

127 家參加實(shí)驗(yàn)室中有90 家采用內(nèi)標(biāo)法定量，其中有11 家結(jié)果可疑或不滿意，占采用內(nèi)標(biāo)法的12.2%。有36 家實(shí)驗(yàn)室采用外標(biāo)法定量，其中有9 家實(shí)驗(yàn)室結(jié)果可疑或不滿意，占采用外標(biāo)法的25.0%。可以看出采用內(nèi)標(biāo)法定量能夠消除基質(zhì)干擾和回收率等的影響，比外標(biāo)法更能夠準(zhǔn)確的測(cè)定豬肉中鹽酸克倫特羅的含量。

在全部參加實(shí)驗(yàn)室中，有14 家實(shí)驗(yàn)室采用單點(diǎn)定量，其中有兩家實(shí)驗(yàn)室結(jié)果可疑或不滿意，占使用采用單點(diǎn)定量實(shí)驗(yàn)室的14.3%，采用工作曲線定量的實(shí)驗(yàn)室中結(jié)果可疑或不滿意的實(shí)驗(yàn)室占16.1%，可以看出在接近被測(cè)克倫特羅濃度的情況下，使用單點(diǎn)定量或者線性定量對(duì)結(jié)果影響不顯著。

5.4 采用不同檢測(cè)儀器的差異

在使用儀器方面，有119 家實(shí)驗(yàn)室選擇使用含有LC/MS/MS 儀器的方法，其中有16 家實(shí)驗(yàn)室結(jié)果可疑或不滿意，占使用LC/MS/MS 儀器的13.4%，有7 家實(shí)驗(yàn)室選擇使用含有GC/MS 方法，其中有4 家實(shí)驗(yàn)室結(jié)果可疑或不滿意，占使用GC/MS 儀器的57.1%，有一家單位使用液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)而沒(méi)有給出結(jié)果。可以看出，在檢測(cè)豬肉中克倫特羅的方法上，選擇使用GC/MS 的檢測(cè)方法，不如選擇使用LC/MS/MS 的方法。

5.5 采用不同凈化方式的差異

在凈化方式方面，共有10 家實(shí)驗(yàn)室采用液/液萃取方式進(jìn)行凈化，其中僅有1 家實(shí)驗(yàn)室結(jié)果不滿意，占采用液/液萃取凈化方式實(shí)驗(yàn)室的10.0%；采用SPE 小柱凈化方式的實(shí)驗(yàn)室中結(jié)果可疑或不滿意的實(shí)驗(yàn)室占16.4%，可以看出采用SPE 小柱凈化和采用液/液萃取凈化方式，對(duì)檢測(cè)豬肉中克倫特羅的影響不顯著。

6 結(jié)語(yǔ)

全國(guó)范圍內(nèi)不同行業(yè)實(shí)驗(yàn)室共有127 家實(shí)驗(yàn)室參加本次能力驗(yàn)證，通過(guò)穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)技術(shù)，初次滿意率為84.1%，表明國(guó)內(nèi)的大部分檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室都掌握了克倫特羅的檢測(cè)能力。部分實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)可疑或者不滿意現(xiàn)象的原因可能是由于前處理方法操作不當(dāng)，固相萃取小柱應(yīng)用不當(dāng)，導(dǎo)致結(jié)果偏低；標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)性差，試樣濃度偏離線性范圍等原因造成。

因此，建議參加實(shí)驗(yàn)室參照合適的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，并對(duì)豬肉進(jìn)行酶解，使用合適的標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證的凈化方式，選擇使用LC/MS/MS 的相關(guān)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，并結(jié)合自身的實(shí)際，認(rèn)真對(duì)本實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)估，真正找出差距和問(wèn)題所在，制定糾正措施，有效整改，持續(xù)保持和提高技術(shù)能力及檢測(cè)水平。

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