三七及其制劑采用高效液相色譜法測定皂苷類方法學概述

蘇家輝

三七及其制劑采用高效液相色譜法測定皂苷類方法學概述

蘇家輝

三七是常用的中藥之一，由于三七及其制劑中的化學成分復雜性，采用高效液相色譜法（HPLC）測定皂苷類的分析研究越來越多。本文結合近年實驗室的相關研究，對該技術的特點、存在的問題進行簡單的分析，并展望中藥采用HPLC法的方法學研究的發展方向。相信該法會對三七的分析研究提供越來越重要的技術支持。

三七；HPLC法；皂苷類；方法學

三七又名田七，李時珍稱其為“金不換”，是常用的中藥之一，為五加科植物的干燥根[1]，拉丁學名：PanaxNotoginseng（Burk.）F.H.Chen。具有止血、活血、定痛的功效，臨床常用于跌打損傷、胸痹絞痛、癥瘕積聚、閉經、痛經、瘡癰腫痛等。《本草綱目拾遺》中記載：“人參補氣第一，三七補血第一，味同而功亦等，故稱人參三七，為中藥中之最珍貴者”。“云南白藥”和“片仔癀”都是以三七為主制成的，為馳名中外的中成藥。

三七的主要藥用成分包括皂苷、黃酮、氨基酸、多糖、脂肪酸等多種生物活性物質[2-3]。三七中的皂苷類被認為是其主要的生理活性成分之一。有研究表明，三七中皂苷類的含量，尤其是人參皂苷Rg1和Rb1的含量高于人參和西洋參[4]。目前常見的測定方法有HPLC、閉塞法、薄層掃描法等。現對HPLC測定三七皂苷類含量的方法學研究，總結如下。

1 HPLC分析方法研究

色譜柱：常見的三七及其成藥分析HPLC色譜柱的常見填充劑有十八基硅烷鍵合硅膠（C18），其具有壽命長、效果穩定、價格適宜的特點，為最常用的HPLC色譜柱[5]。譚春梅[5]等以Shimadzu C18（75mm×2.0mm，2.2μm）為色譜柱檢測三七膠囊中的五種皂苷的含量，且方法簡單、快速。徐鵬[6]等采用VenusilXBP C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱以HPLC-ELSD法測定血塞通注射液中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd，結果三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd呈現良好的線性關系。

流動相：分離三七中皂苷類物質，由于其成分多，極性分布較大。因此，應采用梯度洗脫。常見的流動相種類有乙腈-水[9-10]。按照三七類注射液現行的國家標準，應選擇乙腈-水，因其簡單方便，被廣泛應用。除水以外，常見的水相還有醋酸銨-氨水溶液[7]、醋酸銨溶液[8]、水等。

檢測方法：目前常見的檢測方法包括紫外檢測和蒸發光散射檢測。蒸發光散射檢測由于靈敏度高、溶劑對其影響小，為近年通用的質量檢測方法[9-10]。又因為三七皂苷僅僅尾端吸收紫外線，導致相應靈敏度不高，還存在極限漂移等情況，因此，部分研究選擇了蒸發光散射檢測，但是該檢測方法線性范圍窄，其測定重現性不如紫外檢測方法。所以，目前最常用的方法仍為紫外檢測方法，該方法具有檢測簡便、成熟、穩定、線性范圍廣等特點。

2 HPLC法測定三七皂苷類物質存在的問題及解決方法

2.1 成本過高為提高三七總皂苷的可控程度，需在研究中增加對照品，但三七皂苷類物質的對照品價格較為昂貴，使分析成本幅度大大提高，不適合做為日常生產的檢驗。為解決對照品的問題，可選擇相對因子校正法[11]、對照提取物法[12]等。

相對因子校正法是將結構相似、相應穩定的同類化合物選擇其中分離度好、性質穩定的成分作為對照品。對照物提取法是將不同實驗室中的對照品和標定提取物的各個組分的含量。測定后可將標定好的對照提取物為對照，按照標定的含量值折算各個組分的量。

2.2 結果不夠客觀由于三七皂苷的HPLC圖譜隨著色譜柱和儀器的不同，其圖譜各指紋峰保留時間不能完全重現。而且其變異無一定的規律，需要進行各個峰的手動校正。因此，其試驗結果不夠客觀[13]。針對上述問題，有研究將紋峰的保留時間非線性漂移結果予以保留，不進行手動校正，以保證結果的客觀性。

3 展望

三七及其制劑的皂苷類成分的HPLC檢測是目前研究的熱點之一，但是在方法學方面的研究仍存在著一些問題。建議今后的相關研究中能重視HPLC方法學上的考慮，選擇C18色譜柱和相對質量穩定的HPLC儀器，對梯度和柱紋進行網格搜索；結合成本和客觀角度出發選擇更為合適的對照法進行測定。

HPLC具有較好的分離性能、較高的分析效率、較廣的適用范圍、選擇性好、靈敏度高。而且，該方法能夠通過使用整體材料填充、改變固定的相粒徑、升高系統溫度，可大大縮短分析時間[14]。相信隨著儀器和色譜柱等其它技術的不斷升級與完善，HPLC法在中藥鑒定和中藥成分研究中發揮越來越重要的作用，為中藥現代化、國際化中提供越來越重要的技術支撐[15]。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(第1部)[S].北京：中國醫藥科技出版社,2010：11.

[2] 李向高,鄭友蘭,賈繼紅.人參屬三種藥用植物化學成分的比較研究[J].吉林農業大學學報,1984,6(3)：90-96.

[3] 李琦,葉蘊華,邢其毅.三七水溶性化學成分及其藥理研究新進展[J].高等學校化學學報,1996,17(12)：1886-1892.

[4] 魏均嫻,杜元沖.三七——現代科學研究及應用[M].昆明：云南科技出版社,1996：12-16.

[5] 譚春梅,方翠芬,陳碧蓮.超快速液相色譜法測定三七膠囊中5種皂苷含量[J].醫藥導報,2013(01)：81-84.

[6] 徐鵬,馮素香,趙迪,等.HPLC-ELSD法測定血塞通注射液中三七皂苷R-1、人參皂苷Rg-1、Re、Rb-1、Rd[J].中成藥,2013(03)：521-524.

[7] 肖盛元,羅國安,王義明,等.LC/MS鑒定中藥三七及其復方制劑[J].藥學學報,2004,39(2)：127-131.

[8] 顧光華,周蕾,趙貴文.高效液相色譜法測定人參單體皂甙的研究——醋酸銨對人參皂甙分離的色譜改性[J].色譜,1994,12(1)：40-42.

[9] 甄健存,陳志剛,常增榮,等.血栓通注射液質量評價研究[J].中國藥學雜志,2001,36(12)：847-850.

[10] 唐露,李希,馮建安,等.HPLC-ELSD法測定舒絡顆粒中黃芪甲苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的含量[J].實用中醫藥雜志,2012,28(11)：964-967.

[11] 王超群,賈秀虹,陳季,等.中藥三七“一測多評”質量控制方法的系統研究[J].中國中藥雜志,2012(22)：3438-3445.

[12] 陳慧貞,李云飛,鐘敬華,等.腦得生片物質基礎的HPLCDAD-MS-n分析[J].浙江大學學報(醫學版),2012(01)：32-42.

[13] 賴宇紅.三七總皂苷HPLC方法研究及其應用[D].廣州中醫藥大學,2005：17.

[14] 孫毓慶.現代色譜法及其在藥物分析中的應用[M].北京：科學出版社,2005：65.

[15] 劉穎,周建良,李萍.快速高效液相色譜分離技術在中藥分析中的應用[J].色譜,2009,27(5)：682-689.

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