蟲類中藥蠐螬中含氮化合物研究

李 林，晏永明，李小年，鐘惠民，程永現*

1中國科學院昆明植物研究所植物化學與西部植物資源持續利用國家重點實驗室，昆明650204;2青島科技大學化學與分子工程學院，青島266042

昆蟲是自然界種類最為豐富的物種，藥用昆蟲更以其獨特的療效而被廣泛地應用于臨床。蠐螬為節肢動物門昆蟲綱鞘翅目金龜子科昆蟲朝鮮黑金龜子Holotrichia diomphalia等同屬近緣昆蟲的干燥幼體，具有破血逐淤，明目退翳的功效，內服可用于婦女經閉、癥瘕等頑癥痼疾，外用可治丹毒、癰疽、痔漏、跌打損傷等［1］?，F代臨床上有人將蠐螬制成滴眼液，用于治療白內障、眼角膜翳的治療，效果顯著［2］。現代藥理研究證明蠐螬具有抗腫瘤、保肝、抗菌等作用，如蠐螬石油醚提取物可誘導人宮頸癌Hela細胞凋亡，蠐螬具有保肝作用等。相對于蠐螬突出的臨床療效，蠐螬的化學成分研究卻極為薄弱，雖然有報道稱蠐螬含有脂肪酸類、氨基酸、多肽或蛋白質、糖類、生物堿、有機酸鹽、甾體化合物等，也有學者通過GC-MS分析表明蠐螬石油醚提取物含有反油酸、十六酸，硬脂酸等［3］，但由于這些成分一般是動物類中藥均含有的共性成分，因此至今人們對蠐螬的化學成分，尤其是小分子物質認識仍然嚴重不足。我們為了揭示蠐螬藥用的化學物質基礎，對該中藥進行了深入系統的研究，從其乙醇提取物中分離得到13個含氮化合物，經譜學方法鑒定其結構為 N-［2-(4-羥苯基)-乙基］乙酰胺、環(酪氨酸-脯氨酸)、吡啶-3-甲酰胺、胸苷、戊內酰胺、5-(羥甲基)-1H-吡咯-2-醛、環(脯氨酸-纈氨酸)、環(脯氨酸-丙氨酸)、羥吲哚、1，2，3，4-四氫-1，3，4-三氧-(-咔啉、吲哚-3-醛、黃苷和苯基丙氨酸，以上化合物均為首次從該種動物藥中分離得到。

1 儀器與材料

核磁共振波譜用 Bruker AM-400和Bruker Avance-600核磁共振儀測定，TMS作為內標;ESIMS用Bruker HCT Esquire 3000離子阱質譜儀;高效液相色譜儀型號為 Agilent 1200;薄層層析硅膠GF254和柱層析硅膠(200～300目)均為青島海洋化工廠產品;大孔吸附樹脂為天津海光化工有限公司D101樹脂;Sephadex LH-20為Pharmacia公司產品;反相硅膠RP-18和MCI gel CHP 20P分別為Daiso公司和三菱公司產品。

2 提取與分離

蠐螬(18 kg)購自安徽省亳州藥材交易中心，經湖南中醫藥大學中藥鑒定教研室周小江副教授鑒定為朝鮮黑金龜子(Holotrichia diomphaliaBates)的干燥幼蟲，將藥材粉碎后用95%乙醇冷浸提取三次，每次3 d，減壓回收溶劑得浸膏2 kg，加水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取。乙酸乙酯萃取物55 g經過反復硅膠柱層析、Sephadex LH-20柱層析、MCI膠柱層析和反相柱層析，從中分得化合物1(130 mg)和2(4 mg)。正丁醇萃取物76 g經過反復D101大孔吸附樹脂柱層析、硅膠柱層析、反相柱層析、MCIgel CHP 20P柱層析和Sephadex LH-20柱層析，從中分得化合物3(8 mg)和4(6 mg)。濃縮水相部分得浸膏740 g，取其一半370 g進行分離，經硅膠柱層析(氯仿∶甲醇15∶0～4∶1梯度洗脫)，分為三部分EQ-1-EQ-3，經過反復MCI gel CHP 20P柱層析、Sephadex LH-20柱層析、反相柱層析、硅膠柱層析及HPLC純化，從EQ-1部分得到化合物1(30 mg)、2(6 mg)、5(6 mg)、6(1 mg)、7(4 mg)、8(11 mg)、9(2 mg)、10(2 mg)和11(10 mg);從 EQ-2部分得到化合物4(11 mg);從EQ-3部分得到化合物12(3 mg)和13(9 mg)。

3 結構鑒定

N-［2-(4-羥苯基)-乙基］乙酰胺 1 無色晶體;1H NMR(400 MHz，C5D5N):δH7.23(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，7.15(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5)，3.69(2H，m，H-7)，2.92(2H，m，H-8)，2.09(3H，s，H-10);13C NMR(100 MHz，C5D5N):δC170.6(s，C-9)，157.5(s，C-4)，130.6(s，C-1)，130.5(d，C-2，6)，116.4(d，C-3，5)，42.0(t，C-8)，35.6(t，C-7)，23.2(q，C-10)。以上數據與文獻數值相符［4］。

環(酪氨酸-脯氨酸)2 無色晶體;1H NMR(400 MHz，Acetone-d6):δH8.33(1H，br s，HN)，7.15(2H，d，J=8.4 Hz，H-12，16)，6.75(2H，d，J=8.4 Hz，H-13，15)，6.59(1H，br s，OH)，4.30(1H，dd，J=11.2，5.6 Hz，H-3)，4.09(1H，t，J=7.6 Hz，H-6)，3.50(1H，m，H-9)，3.36(1H，m，H-9')，3.21(1H，dd，J=14.4，4.5 Hz，H-10)，2.90(1H，dd，J=14.4，7.1 Hz，H-10')，2.04(1H，m，H-7)，1.84(2H，m，H-7'，8)，1.66(1H，m，H-8');13C NMR(100 MHz，Acetone-d6):δC169.8(s，C-2)，165.9(s，C-5)，157.2(s，C-14)，131.6(d，C-12，16)，128.4(s，C-11)，116.0(d，C-13，15)，59.5(d，C-6)，57.2(d，C-3)，45.5(t，C-9)，36.2(t，C-10)，28.9(t，C-7)，22.9(t，C-8)。以上數值與文獻數值相符［5］。

吡啶-3-甲酰胺 3 白色粉末;1H NMR(400 MHz，CD3OD):δH9.01(1H，m，H-6)，8.68(1H，m，H-3)，8.28(1H，m，H-4)，7.54(1H，m，H-5);13C NMR(100 MHz，CD3OD):δC169.8(s，C-7)，152.8(d，C-2)，149.4(d，C-6)，137.3(d，C-4)，131.4(s，C-3)，125.1(d，C-5)。以上數值與文獻數值相符［6］。

胸苷 4 白色粉末;ESI-MSm/z:307［M+Na］+.1H NMR(400 MHz，CD3OD):δH7.82(1H，d，J=1.0 Hz，H-6)，6.28(1H，t，J=6.9 Hz，H-1')，4.40(1H，dd，J=5.9，3.4 Hz，H-3')，3.90(1H，dd，J=6.7，3.3 Hz，H-4')，3.76(2H，m，H-5')，2.22(2H，m，H-2')，1.88(3H，d，J=1.0 Hz，H-7);13C NMR(100 MHz，CD3OD):δC166.4(s，C-4)，152.4(s，C-2)，138.2(d，C-6)，111.5(s，C-5)，88.8(d，C-1')，86.2(d，C-3')，72.2(d，C-4')，62.8(t，C-5')，41.2(t，C-2')，12.4(q，C-7)。以上數值與文獻數值相符［7］。

戊內酰胺 5 白色粉末;1H NMR(600 MHz，CD3OD):δH4.71(1H，s，NH)，3.30(2H，m，H-6)，2.33(2H，m，H-3)，1.82(2H，m，H-4)，1.79(2H，m，H-5);13CNMR(150 MHz，CD3OD):δC175.0(s，C-2)，43.0(t，C-6)，32.0(t，C-3)，23.0(t，C-5)，21.7(t，C-4)。以上數值與文獻數值相符［8，9］。

5-(羥甲基)-1H-吡咯-2-醛 6 無色膠狀物;1H NMR(600 MHz，CD3OD):δH9.26(1H，s，CHO)，6.87(1H，d，J=3.7 Hz，H-3)，6.16(1H，d，J=3.7 Hz，H-4)，4.50(2H，s，CH2OH);13C NMR(150 MHz，CD3OD):δC180.6(s，CHO)，143.4(s，C-5)，134.0(s，C-2)，124.8(s，C-3)，110.4(d，C-4)，57.8(t，CH2OH)。以上數值與文獻數值相符［10］。

環(脯氨酸-纈氨酸)7 無色晶體;1H NMR(400 MHz，CDCl3):δH5.90(1H，br s，NH)，4.08(1H，t，J=7.4 Hz，H-6)，3.94(1H，s，H-3)，3.62(1H，m，H-9)，3.55(1H，m，H-9)，2.63(1H，m，H-1')，2.37(1H，m，H-7)，2.04(2H，m，H-7，8)，1.91(1H，m，H-8)，1.06(3H，d，H-2')，0.91(3H，d，H-3');13C NMR(100 MHz，CDCl3):δC170.0(s，C-5)，164.7(s，C-2)，60.3(d，C-6)，58.8(d，C-3)，45.1(t，C-9)，28.5(t，C-7)，28.3(d，C-1')，22.3(t，C-8)，19.2(q，C-2')，16.0(q，C-3')。以上數值與文獻數值相符［11］。

環(脯氨酸-丙氨酸)8 無色晶體;1H NMR(400 MHz，CDCl3):δH6.62(1H，br s，NH)，4.06(2H，m，H-3，6)，3.62(1H，m，H-9)，3.51(2H，m，H-9)，2.28(1H，m，H-7)，2.03(1H，m，H-7)，1.96(1H，m，H-8)，1.85(1H，m，H-8)，1.41(3H，d，H-1');13C NMR(100 MHz，CDCl3):δC170.4(s，C-5)，166.4(s，C-2)，59.2(d，C-6)，51.1(d，C-3)，45.4(t，C-9)，28.1(t，C-7)，22.7(t，C-8)，15.9(q，C-1')。以上數值與文獻數值相符［12］。

羥吲哚 9 白色粉末;1H NMR(600 MHz，CDCl3):δH7.59(1H，br s，NH)，7.15(2H，m，H-6，7)，6.96(1H，t，J=7.5 Hz，H-5)，6.80(1H，d，J=7.5 Hz，H-4);13C NMR(150 MHz，CDCl3):δC176.9(s，C-2)，142.1(s，C-7a)，128.0(d，C-6)，125.3(s，C-3a)，124.9(d，C-4)，122.4(d，C-5)，109.5(d，C-7)，36.1(t，C-3)。以上數值與文獻數值相符［13］。

1，2，3，4-四氫-1，3，4-三氧-β-咔啉 10 黃棕色粉末;1H NMR(600 MHz，C5D5N):δH8.53(1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，7.78(1H，d，J=8.0 Hz，H-8)，7.50(1H，t，J=8.0 Hz，H-7)，7.45(1H，d，J=8.0 Hz，H-6);13C NMR(150 MHz，C5D5N):δC172.1(s，C-4)，161.5(s，C-1)，160.2(s，C-3)，139.4(s，C-13)，137.3(s，C-10)，127.7(d，C-7)，125.2(d，C-6)，125.0(s，C-12)，123.3(d，C-5)，117.9(s，C-11)，114.9(d，C-8)。以上數值與文獻數值相符［14］。

吲哚-3-醛 11 白色粉末;1H NMR(400 MHz，CD3OD):δH9.88(1H，s，H-10)，8.15(1H，d，J=7.3 Hz，H-5)，8.10(1H，s，H-2)，7.47(1H，d，J=8.0 Hz，H-8)，7.26(2H，m，H-6，7);13C NMR(100 MHz，CD3OD):δC187.4(s，C-10)，139.7(d，C-2)，138.0(s，C-9)，126.1(s，C-4)，125.0(d，C-5)，123.6(d，C-6)，122.4(d，C-7)，116.7(s，C-3)，113.1(d，C-8)。以上數值與文獻數值相符［15，16］。

黃苷12 白色粉末;ESI-MSm/z:166［M+H］+，188 ［M+Na］+.1H NMR(600 MHz，D2O):δH7.76(1H，s，H-8)，5.72(1H，d，J=6.3 Hz，H-1')，4.22(1H，dd，J=5.0，3.2 Hz，H-2')，4.07(1H，d，J=2.9 Hz，H-3')，3.71(1H，dd，J=12.8，2.7 Hz，H-4')，3.63(1H，d，J=12.8，3.5 Hz，H-5');13C NMR(150 MHz，D2O):δC157.6(s，C-6)，150.9(s，C-2)，139.1(s，C-4)，135.8(s，C-8)，115.8(s，C-5)，87.6(d，C-1')，85.4(d，C-4')，73.2(d，C-2')，70.5(d，C-3')，61.3(t，C-5')。以上數值與文獻數值相符［17］。

苯基丙氨酸13 白色粉末;ESI-MSm/z:265［M+Na］+.1H NMR(600 MHz，D2O):δH7.23(2H，m，H-3'，5')，7.18(1H，m，H-4')，7.13(2H，m，H-2'，6')，3.72(1H，m，H-2)，3.04(1H，m，H-3)，2.89(1H，m，H-3);13C NMR(150 MHz，D2O):δC174.7(s，C-1)，137.6(s，C-1')，130.6(d，C-3'，5')，130.1(d，C-2'，6')，128.5(d，C-4')，57.8(d，C-2)，38.8(t，C-3)。以上數值與文獻數值相符［18］。

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